提取分离方法

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1、第三节第三节 提取分离方法提取分离方法1一、中草药有效成分的提取一、中草药有效成分的提取提取：提取：指选择适当的溶剂和适当的方法，将所要的成指选择适当的溶剂和适当的方法，将所要的成分溶解出来并同原料脱离的过程。分溶解出来并同原料脱离的过程。2( (一一) ) 提取分离前的准备提取分离前的准备l动植物的拉丁学名动植物的拉丁学名l产地产地l药用部位药用部位l采集时间与方法采集时间与方法 l系统查阅文献系统查阅文献 3（二）常用溶剂的特点（二）常用溶剂的特点 环己烷，石油醚，苯，二氯甲烷，氯仿，乙醚，环己烷，石油醚，苯，二氯甲烷，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇，水乙酸乙酯，正丁醇，丙

2、酮，乙醇，甲醇，水 极性：极性： 亲脂性：亲脂性： 亲水性：亲水性：4环己烷，石油醚，苯，二氯甲烷，氯仿，乙醚，乙酸环己烷，石油醚，苯，二氯甲烷，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇，水乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇，水l比水重的有机溶剂：比水重的有机溶剂： 二氯甲烷，氯仿二氯甲烷，氯仿l能与水分层的极性最大的有机溶剂：能与水分层的极性最大的有机溶剂： 正丁醇正丁醇l与水分层的有机溶剂：与水分层的有机溶剂：环己烷环己烷- -正丁醇正丁醇l与水可以以任意比例混溶的有机溶剂：与水可以以任意比例混溶的有机溶剂：丙酮丙酮- -甲醇甲醇l极性最大的有机溶剂：极性最大的有机溶剂：甲醇甲醇l常用来

3、从水中萃取苷类、水溶性生物碱类的有机溶剂：常用来从水中萃取苷类、水溶性生物碱类的有机溶剂：正丁醇正丁醇5（三）提取方法：（三）提取方法：提取方法提取方法溶剂提取法溶剂提取法 水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法 升华法升华法 ( (应用最广应用最广) ) 61. 1. 溶剂提取法：溶剂提取法：相似相溶原理相似相溶原理 （1 1）溶剂提取法原理：溶剂提取法原理：7（2 2）提取溶剂的选择原则：）提取溶剂的选择原则：l 对所提取成分溶解度大，对杂质溶解度小对所提取成分溶解度大，对杂质溶解度小l 不与提取成分起化学变化不与提取成分起化学变化l 经济、易得、使用安全经济、易得、使用安全8（3 3）影响溶剂提取法提

4、取效率的因素影响溶剂提取法提取效率的因素: : l 原料粉碎度原料粉碎度l 提取时间提取时间l 提取温度提取温度l 设备条件设备条件9溶剂提取法溶剂提取法 （4 4）溶剂提取法分类溶剂提取法分类 浸渍法浸渍法渗漉法渗漉法煎煮法煎煮法回流提取法回流提取法连续回流提取法连续回流提取法以水或稀醇在常温下浸泡提取以水或稀醇在常温下浸泡提取 渗漉筒渗漉筒 用水加热煮沸提取用水加热煮沸提取 有机溶剂有机溶剂, ,在回流装置中加热提取在回流装置中加热提取 以索氏提取器（或称脂肪抽以索氏提取器（或称脂肪抽出器）回流提取出器）回流提取 10渗漉法渗漉法冷提冷提-浸渍法、渗漉法：浸渍法、渗漉法： 适用于热不稳定的

5、化合物适用于热不稳定的化合物11回流提取法回流提取法连续回流提取法连续回流提取法12粉碎原料粉碎原料 放在放在滤纸筒滤纸筒内内置于置于提取器提取器中中 加热盛有溶剂圆底烧加热盛有溶剂圆底烧瓶瓶 溶剂沸腾溶剂沸腾 蒸气通过提取器蒸气通过提取器的的导气管导气管上升上升 冷凝滴入提取器中冷凝滴入提取器中 当溶剂面超过当溶剂面超过虹吸管虹吸管的最高处时，含有萃的最高处时，含有萃取物的溶剂虹吸回烧瓶，因而萃取出一部取物的溶剂虹吸回烧瓶，因而萃取出一部分物质，如此重复。分物质，如此重复。索氏提取：索氏提取：利用溶剂回流及虹吸原理利用溶剂回流及虹吸原理13各种溶剂提取法的特点比较各种溶剂提取法的特点比较提取

6、方法提取方法溶剂溶剂是否加热是否加热 提取效率提取效率 使用范围使用范围备注备注浸渍法浸渍法水、稀醇水、稀醇否否低低各类成分各类成分水提易发霉，需水提易发霉，需加防腐剂加防腐剂渗漉法渗漉法各类溶剂各类溶剂否否高高各类成分各类成分消耗溶剂量大，消耗溶剂量大，费时长费时长煎煮法煎煮法水水是是高高水溶性成水溶性成分分热不稳定不宜用，热不稳定不宜用，含多糖多的成分含多糖多的成分过滤困难过滤困难回流提取回流提取法法有机溶剂有机溶剂是是高高脂溶性成脂溶性成分分热不稳定不宜用，热不稳定不宜用，消耗溶剂量大消耗溶剂量大连续回流连续回流提取法提取法有机溶剂有机溶剂是是最高最高脂溶性成脂溶性成分分提取时间长，提取

7、时间长，热不稳定不宜用，热不稳定不宜用，节省溶剂节省溶剂14超临界提取法超临界提取法(Supercritical Fluid Extraction，SFE) 超临界流体（超临界流体（SFSF）：）：指处于临界温度（指处于临界温度（TcTc）和）和临界压力（临界压力（PcPc）以上，介于气体和液体之间的、）以上，介于气体和液体之间的、以流动形式存在的物质。以流动形式存在的物质。 超临界提取法超临界提取法利用溶剂在超临界条件下特殊的流利用溶剂在超临界条件下特殊的流体性能对样品进行提取。体性能对样品进行提取。15超临界提取法超临界提取法16 选用超临界流体（选用超临界流体（SFSF）替代有机溶剂的特

8、点：）替代有机溶剂的特点： 可在低温下提取，可在低温下提取，“热敏性热敏性”成分尤其适用成分尤其适用 无溶剂残留，对作为制剂的中药提取物的提取无溶剂残留，对作为制剂的中药提取物的提取是一大优势是一大优势 提取与蒸馏合为一体，无需回收溶剂提取与蒸馏合为一体，无需回收溶剂 具选择性分离具选择性分离 设备昂贵，需专业人员操作设备昂贵，需专业人员操作17超声提取法超声提取法n物理过程。物理过程。n超声波引起液体介质的振超声波引起液体介质的振动，并且通过动，并且通过空化空化现象，现象，造成植物细胞壁及整个生造成植物细胞壁及整个生物体破裂；物体破裂；n溶液渗透到药材细胞中，溶液渗透到药材细胞中，加速成分的

9、溶解。加速成分的溶解。18微波提取法微波提取法n穿透性强，选择性高，穿透性强，选择性高， 加热效率高，操作简加热效率高，操作简 便。便。n缺点：成分变化、生物缺点：成分变化、生物 活性变化。活性变化。192.2.水蒸气蒸馏法：水蒸气蒸馏法： n适用于具有适用于具有挥发性、能随水挥发性、能随水蒸汽蒸馏而不被破坏，难溶蒸汽蒸馏而不被破坏，难溶或或不溶于不溶于水的成分的提取。水的成分的提取。 n 如如挥发油挥发油、小小分子的分子的香豆香豆素类素类、小小分子的分子的醌类醌类成分的成分的提取。提取。203.3.升华法（升华法（sublimation） l固体物质受热不经过熔融，直接固体物质受热不经过熔融

10、，直接 变成蒸汽，遇冷后又凝固为固态，称为变成蒸汽，遇冷后又凝固为固态，称为升华升华。l中草药中有一些成分具有升华的性质，可以利用升华中草药中有一些成分具有升华的性质，可以利用升华法直接自中草药中提取出来。如樟脑、咖啡因。法直接自中草药中提取出来。如樟脑、咖啡因。 21二、中草药有效成分的分离与精制二、中草药有效成分的分离与精制（一）根据物质溶解度差别进行分离（一）根据物质溶解度差别进行分离n结晶及重结晶法（结晶及重结晶法（温度不同，溶解度不同温度不同，溶解度不同）n沉淀法沉淀法 溶剂沉淀法（溶剂沉淀法（改变溶液的极性去杂，改变溶液的极性去杂，水提醇沉）水提醇沉） 酸碱酸碱法（酸碱酸碱法（酸提

11、碱沉法：酸提碱沉法：生物碱）生物碱） （碱提酸沉法：碱提酸沉法：黄酮、蒽醌类酚酸性成分）黄酮、蒽醌类酚酸性成分） 沉淀试剂（如铅盐沉淀沉淀试剂（如铅盐沉淀法法）22（二）根据物质在两相溶剂中的分配比不同（二）根据物质在两相溶剂中的分配比不同 进行分离进行分离1. 1. 液液- -液萃取法液萃取法l（1 1） 原理：利用混合物中各成分在两相互原理：利用混合物中各成分在两相互不相溶的溶剂中分配系数的不同而实现分离。不相溶的溶剂中分配系数的不同而实现分离。l（2 2） 分配系数分配系数K K值（即分配比）：值（即分配比）： K = CU/CL CU、CL分别表示溶质在上相和下相溶剂分别表示溶质在上相

12、和下相溶剂中的浓度。中的浓度。 23（3 3）分离因子分离因子： = = K KA A/ /K KB B ( (注：注：K KA A K KB B） 可表示分离的难易可表示分离的难易 100 100，一次简单萃取即可分离，一次简单萃取即可分离 1001010010时，需萃取时，需萃取10-1210-12次，次，CCDCCD法。法。 22时，需时，需100100次以上萃取才能完成，次以上萃取才能完成，DCCCDCCC法。法。 11时，时， K KA AKKB B，意味着两者性质相似，意味着两者性质相似， 无法实现萃取分离无法实现萃取分离 24n可以根据纸色谱法计算可以根据纸色谱法计算值，值，选择

13、理想的分配条件选择理想的分配条件 = = = = = =nRfRfa a、RfRfb b为为A A、B B两物质在两物质在PC上上RfRf值。值。KAKB1/r( ) Rfa1-Rfa1/r( ) Rfb1-RfbRfa(1-Rfb)Rfb(1-Rfa)25（4 4）分配比与）分配比与pHpH 酸性、碱性及两性化合物，酸性、碱性及两性化合物，PHPH可改变它们的存在状可改变它们的存在状态（游离型或解离型），影响在溶剂系统中的分配态（游离型或解离型），影响在溶剂系统中的分配比。比。酚类酚类 p pK Ka a值值 9.2-10.89.2-10.8 羧酸类羧酸类 p pK Ka a值值 约约5 5

14、 PH12，酸性酸性物质呈物质呈解离解离状态状态（A） 碱性碱性物质呈非解离状态物质呈非解离状态（B）存在存在 26nHA+H2O A- +H3O+nKa=nPKa=PH-lgA-/HAnPH=Pka+lgA-/HAnHA达到达到99%99%解离时，解离时，PH=Pka+2PH=Pka+2nHA达到达到99%99%游离时，游离时，PH=Pka-2PH=Pka-2A-H3O+ HA27试样水溶液试样水溶液水相水相碱性解离碱性解离有机相有机相PH 3PH 3，有机溶剂提，有机溶剂提PH 12PH 12，有机溶剂提，有机溶剂提水相水相有机相有机相碱性物质碱性物质PH 9PH 9，有机溶剂提，有机溶剂

15、提水相水相酸性强解离酸性强解离 有机相有机相酸弱非解离酸弱非解离水相水相酸弱解离酸弱解离有机相有机相中性物质中性物质PH 6,PH 6,有机溶剂提有机溶剂提水相水相有机相有机相（酚等酸性物质）（酚等酸性物质）PH 3PH 3，有机，有机水相水相有机相有机相（有机酸等）（有机酸等）PH3PH12pH12，酸性酸性物质物质 解离（解离（A A） 碱性碱性物质物质 非解离（非解离（B B）（糖类、中性物（糖类、中性物质、两性物质）质、两性物质）酸性非解离酸性非解离PH 13PH 13，有机，有机282. 2. 逆流分溶法（逆流分溶法（CCD法）法）： 多次多次、连续连续的的液液- -液萃取液萃取分离

16、过程，可用分离过程，可用于于分离因子分离因子值小值小的萃取分离。的萃取分离。 条件温和，样品易回收，适用于中等极条件温和，样品易回收，适用于中等极性、不稳定物质的分离。性、不稳定物质的分离。29液滴逆流色谱液滴逆流色谱 (DCCC)(DCCC)l液滴逆流色谱液滴逆流色谱 (DCCC)(DCCC)：流动相呈液滴形式垂直上流动相呈液滴形式垂直上升或下降，通过固定相的液柱，实现物质的逆流升或下降，通过固定相的液柱，实现物质的逆流色谱。色谱。（特别适合皂苷类的分离）（特别适合皂苷类的分离）l优点：优点：克服固体载体引起的不可逆吸附消耗、试克服固体载体引起的不可逆吸附消耗、试样变性污染及色谱峰脱尾现象。

17、样变性污染及色谱峰脱尾现象。30液滴逆流色谱液滴逆流色谱DCCCDCCC流动相液滴垂直上下，经过固定相液流动相液滴垂直上下，经过固定相液 31高速逆流色谱高速逆流色谱(HSCCC)(HSCCC)：n依靠聚四氟乙烯蛇形管的方向性及高速行星式旋转产生依靠聚四氟乙烯蛇形管的方向性及高速行星式旋转产生离心力离心力n使无载体支持的使无载体支持的固定相保留固定相保留在蛇形管内，并使流动相单在蛇形管内，并使流动相单向、低速通过固定相，实现向、低速通过固定相，实现连续逆流萃取连续逆流萃取分离物质的目分离物质的目的。的。323. 3. 纸色谱（纸色谱（PCPC）：）： l原理：原理：分配原理分配原理l支持剂：支

18、持剂：纤维素纤维素l固定相：固定相：水水l流动相：流动相：水饱和的有机溶剂水饱和的有机溶剂l K = 1/r(Rf/1-Rf)（ r为纸层色谱定数）为纸层色谱定数） 若若A、B两种物质的两种物质的Rf值分别为值分别为Rfa，Rfb，则，则 Rfa（1Rfb）/ Rfb（1Rfa） (Rfa Rfb)l故纸色谱可为液故纸色谱可为液-液萃取分离提供指导。液萃取分离提供指导。334 4液液- -液分配柱色谱：液分配柱色谱：l原理：原理：分配原理分配原理l支持剂：支持剂： 硅胶、硅藻土、纤维素粉等硅胶、硅藻土、纤维素粉等34（1 1）正相分配色谱：）正相分配色谱：l固定相：极性大，如固定相：极性大，如

19、水、缓冲溶液水、缓冲溶液l流动相：极性小，如流动相：极性小，如氯仿、乙酸乙酯、丁醇等氯仿、乙酸乙酯、丁醇等l载体：硅胶（含水大于载体：硅胶（含水大于17%17%）、硅藻土、纤维素等）、硅藻土、纤维素等l洗脱顺序：洗脱顺序：化合物极性越小，越先出柱；极性越化合物极性越小，越先出柱；极性越大，越后出柱。大，越后出柱。l应用：应用：通常用于分离通常用于分离水溶性水溶性或或极性较大极性较大的成分，的成分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物。如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物。35（2 2）反相分配色谱）反相分配色谱（固定相极性（固定相极性 RP-8 RP-2RP-18 RP-8 RP-2。RP-2

20、RP-8RP-18化学修饰化学修饰37（3 3）液）液- -液分配薄层色谱：液分配薄层色谱： 液液- -液分配色谱法可在液分配色谱法可在硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱上进行。上进行。 分配柱色谱分配柱色谱最佳分离条件最佳分离条件注：正相柱用正相薄层色谱，反相柱用反相薄层色谱注：正相柱用正相薄层色谱，反相柱用反相薄层色谱384 4加压液相柱色谱：加压液相柱色谱：加压液相柱色谱依所用压力大小分为：加压液相柱色谱依所用压力大小分为：l快速柱色谱快速柱色谱（约（约2.02102.02105 5PaPa）lLobarLobar低压柱色谱低压柱色谱（5.051020.21020.2105 5PaPa）。）。39

21、（三）根据物质的吸附性差别进行分离（三）根据物质的吸附性差别进行分离固固- -液吸附液吸附物理吸附物理吸附: :分子间力，无选择性，可逆分子间力，无选择性，可逆化学吸附化学吸附: :化学键，选择性较强，化学键，选择性较强， 常不可逆常不可逆半化学吸附半化学吸附: :氢键，选择性较弱，氢键，选择性较弱， 多可逆多可逆 401 1物理吸附物理吸附l基本规律：基本规律：“极性相似者易于吸附极性相似者易于吸附”l基本特点：无选择性、可逆吸附、快速基本特点：无选择性、可逆吸附、快速 l基本原理：吸附与解吸附的往复循环基本原理：吸附与解吸附的往复循环 l三要素：吸附剂三要素：吸附剂 、溶质、溶质( (被分

22、离物被分离物) )、溶剂、溶剂吸吸附附再吸再吸附附解解吸吸再解再解吸吸直至直至分离分离41（1 1）硅胶、氧化铝为极性吸附剂，特点：硅胶、氧化铝为极性吸附剂，特点：l 被分离物质极性越强，吸附力越强。被分离物质极性越强，吸附力越强。l 溶剂极性越弱，吸附剂的吸附能力越强。溶剂溶剂极性越弱，吸附剂的吸附能力越强。溶剂极性的增强，吸附力减弱。极性的增强，吸附力减弱。l 当加入极性较强的溶剂后，先前被硅胶或氧化当加入极性较强的溶剂后，先前被硅胶或氧化铝所吸附的溶质可被置换洗脱下来。铝所吸附的溶质可被置换洗脱下来。42（2 2）非极性吸附剂：活性炭）非极性吸附剂：活性炭 l对非极性物质具有较强的亲和力

23、对非极性物质具有较强的亲和力l在水中对溶质表现出强的吸附能力在水中对溶质表现出强的吸附能力l从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的极性越极性越小小，洗脱能力越强洗脱能力越强43非极性吸附剂：非极性吸附剂：活性炭活性炭p对非极性成分吸附强对非极性成分吸附强p溶剂极性溶剂极性 p吸附剂对溶质的吸附力吸附剂对溶质的吸附力 p溶质可被极性弱的溶剂洗脱溶质可被极性弱的溶剂洗脱极性吸附剂：极性吸附剂：硅胶、氧化铝硅胶、氧化铝p 对极性物质亲和力强对极性物质亲和力强p 溶剂极性溶剂极性 p 吸附剂对溶质的吸附力吸附剂对溶质的吸附力 p 溶质可被极性强的溶剂洗脱溶质可被极性强

24、的溶剂洗脱 442 2极性及其强弱判断：极性及其强弱判断：极性强弱极性强弱是支配物理吸附过程的主要因素。是支配物理吸附过程的主要因素。 l官能团极性官能团极性（按下列顺序依次递增）：（按下列顺序依次递增）： CH2CH2，CH2=CH2，OCH3，COOR，C=O，CHO， R-CO-NH-，NH2，ROH，H2O，ArOH，COOHl溶剂的极性可大体根据介电常数的大小来判断。溶剂的极性可大体根据介电常数的大小来判断。 介电常数越大，极性越大。介电常数越大，极性越大。 453 3进行硅胶或氧化铝吸附柱色谱时需注意：进行硅胶或氧化铝吸附柱色谱时需注意：l 用极性小的溶剂装柱和溶解样品，或用极性稍

25、大的溶用极性小的溶剂装柱和溶解样品，或用极性稍大的溶剂溶解样品后，以少量吸附剂拌匀挥干，上柱。剂溶解样品后，以少量吸附剂拌匀挥干，上柱。l最佳溶剂系统：最佳溶剂系统：RfRf值值=0.2-0.3=0.2-0.3。l 为避免化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质宜用为避免化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质宜用氧化铝分离。氧化铝分离。l在分离酸性（或碱性）物质时，洗脱剂中常加适量的醋在分离酸性（或碱性）物质时，洗脱剂中常加适量的醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），防止拖尾。酸（或氨、吡啶、二乙胺），防止拖尾。l吸附剂用量吸附剂用量: 30: 306060倍，有时倍，有时100100200200倍倍46TL

26、C1510475 5聚酰胺吸附色谱法：聚酰胺吸附色谱法：（1 1）原理：氢键吸附。）原理：氢键吸附。l分子中的酰胺分子中的酰胺羰基羰基与化合物的与化合物的酚羟基酚羟基l酰胺键上的游离酰胺键上的游离胺基胺基与与羰基羰基形成氢键缔合形成氢键缔合l吸附强弱取决于各种化合物与之形成氢键缔合的吸附强弱取决于各种化合物与之形成氢键缔合的能力。能力。48聚酰胺吸附层析原理聚酰胺吸附层析原理49（2 2）吸附能力的强弱规律）吸附能力的强弱规律（在含水溶剂中）：（在含水溶剂中）：l 形成氢键的基团形成氢键的基团数目越多数目越多，则能力越强。，则能力越强。l 成键位置对吸附能力也有影响。易形成分子内成键位置对吸附

27、能力也有影响。易形成分子内氢键者，其在聚酰胺上的吸附相应减弱。氢键者，其在聚酰胺上的吸附相应减弱。l 分子中芳香化程度高者，则吸附性增强；反之，分子中芳香化程度高者，则吸附性增强；反之，则减弱。则减弱。5051（3）各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱）各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱到强的顺序：到强的顺序：l水水 甲醇甲醇 乙醇乙醇 NaOH水溶液水溶液 甲酰胺甲酰胺 二甲二甲基甲酰胺基甲酰胺 尿素水溶液尿素水溶液l最常应用的洗脱系统是：乙醇最常应用的洗脱系统是：乙醇-水水52（4 4）应用：）应用：l 特别适合于特别适合于酚类、黄酮类酚类、黄酮类化合物的制备和化合物的制备和分离。分离。l

28、脱鞣质处理脱鞣质处理注意：注意：对碱稳定，对酸特别是对碱稳定，对酸特别是无机酸稳定性差无机酸稳定性差 可溶于浓盐酸、冰乙酸、甲酸中可溶于浓盐酸、冰乙酸、甲酸中536 6大孔吸附树脂：大孔吸附树脂：（1 1）组成：）组成：苯乙烯，二乙烯苯和致孔剂苯乙烯，二乙烯苯和致孔剂（2 2）原理：）原理：吸附吸附作用和作用和分子筛分子筛作用（多孔）相结合。作用（多孔）相结合。（3 3）分类：）分类： 非极性非极性: :苯乙烯，二乙烯苯缩合而成（芳香吸附苯乙烯，二乙烯苯缩合而成（芳香吸附 树脂）树脂） 中极性中极性: :含脂基的吸附树脂含脂基的吸附树脂 极极 性性: :含酰胺基、氰基、酚羟基等极性基团的含酰胺

29、基、氰基、酚羟基等极性基团的 吸附树脂吸附树脂546 6大孔吸附树脂：大孔吸附树脂：一般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性化一般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性化合物在水中易被极性树脂吸附。合物在水中易被极性树脂吸附。 物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小，物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小，反之就大。反之就大。洗脱剂：洗脱剂：最常用的是最常用的是乙醇乙醇- -水水。 H2O洗：洗：糖、水溶性色素糖、水溶性色素 30%30%乙醇乙醇洗：极性较大成分洗：极性较大成分50%-75%50%-75%乙醇乙醇洗：洗：皂苷类皂苷类成分成分 95%95%乙醇乙醇洗

30、：极性较小成分洗：极性较小成分55（四）根据物质分子大小差别进行分离（四）根据物质分子大小差别进行分离主要的几种方法：主要的几种方法：n透析法：透析法：半透膜，分子筛滤过作用半透膜，分子筛滤过作用n超滤法：超滤法：分子大小不同，扩散速度不同分子大小不同，扩散速度不同n超速离心法：超速离心法：溶质在超速离心作用下，沉降性和溶质在超速离心作用下，沉降性和 浮游性不同浮游性不同n凝胶滤过法（分子筛滤过色谱或排阻色谱）：凝胶滤过法（分子筛滤过色谱或排阻色谱）：56（四）根据物质分子大小差别进行分离（四）根据物质分子大小差别进行分离1 1凝胶过滤法：凝胶过滤法：n原理：分子筛原理原理：分子筛原理 利用凝

31、胶的三维网状结构分子筛的过滤作用将利用凝胶的三维网状结构分子筛的过滤作用将化合物按分子量大小不同进行分离。化合物按分子量大小不同进行分离。n出柱顺序：分子量由大到小出柱顺序：分子量由大到小57葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶Sephadex G-25Sephadex G-25羟丙基葡聚糖凝胶羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20Sephadex LH-20羟丙基化羟丙基化（3 3）凝胶的种类与性质：）凝胶的种类与性质：58葡聚糖凝胶（葡聚糖凝胶（Sephadex GSephadex G）：）：l只适用于只适用于水中水中应用，不同规格适合分离不同分子量的应用，不同规格适合分离不同分子量的物质，分离物质

32、，分离多糖多糖、蛋白质蛋白质等。等。l数字表示葡聚糖凝胶的吸水量，数字吸水量数字表示葡聚糖凝胶的吸水量，数字吸水量1010，如如Sephadex G-25Sephadex G-25中的中的2525表示吸水量为表示吸水量为2.5ml/g2.5ml/g59羟丙基葡聚糖凝胶羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20 Sephadex LH-20 ）的特点：的特点：l具有分子筛特性具有分子筛特性l在水、极性有机溶剂及极性有机溶剂与水的混合物中在水、极性有机溶剂及极性有机溶剂与水的混合物中均可使用，适用于各类化合物的分离。均可使用，适用于各类化合物的分离。l在由极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中常起到

33、反相在由极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中常起到反相分配色谱的作用分配色谱的作用60（五）根据物质解离程度不同进行分离（五）根据物质解离程度不同进行分离n原理：原理：离子交换原理离子交换原理n固定相固定相：离子交换树脂（聚苯乙烯高分子化：离子交换树脂（聚苯乙烯高分子化 合物，引入交换基团）合物，引入交换基团）n流动相：流动相：水或含水溶剂水或含水溶剂611分类：分类： 根据交换基团不同分为：根据交换基团不同分为：l阳离子交换树脂阳离子交换树脂 强酸型（强酸型（RSO3H+） 弱酸型（弱酸型（RCOOH+）l阴离子交换树脂阴离子交换树脂 强碱型强碱型RN+(CH3)3Cl 弱碱型（弱碱型（RNH2

34、，仲胺、叔胺基）仲胺、叔胺基）62交换原理：交换原理：nR-SO3H+ + BH+ R-SO3BH+ R-SO3H+ + BR-N+(CH3)3Cl +RCOO R-N+(CH3)3 RCOO R-N+(CH3)3Cl + RCOOH OH HCl 632 2应用：应用：l用于不同电荷离子的分离，如水提取物中的酸用于不同电荷离子的分离，如水提取物中的酸性、碱性、两性化合物的分离。性、碱性、两性化合物的分离。l用于相同电荷离子的分离，如同为生物碱，但用于相同电荷离子的分离，如同为生物碱，但碱性强弱不同，仍可用离子交换树脂分离。碱性强弱不同，仍可用离子交换树脂分离。 64水提液中酸性、碱性、两性化

35、合物的分离水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离65 碱性碱性 66思考题：思考题： l1.1.中草药有效成分的提取方法有哪些？其各自的使用中草药有效成分的提取方法有哪些？其各自的使用范围及其优缺点是什么？范围及其优缺点是什么？l2.2.分离中草药成分常用的色谱方法有哪些？它们分别分离中草药成分常用的色谱方法有哪些？它们分别适用于哪些类别化合物的分离？并说出各自常用的洗适用于哪些类别化合物的分离？并说出各自常用的洗脱剂及洗脱顺序。脱剂及洗脱顺序。67 从植物中分得从植物中分得3 3个黄酮化合物，结构如下，根据其个黄酮化合物，结构如下，根据其结构特点推测在硅胶结构特点推测在硅胶TLCTLC和聚酰胺薄膜上的和聚酰胺薄膜上的RfRf值大小。值大小。A: R1=R2=HB: R1=H，R2=RhamC: R1=Glc，R2=Rham68