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1、蛋白质存在于所有的蛋白质存在于所有的蛋白质存在于所有的蛋白质存在于所有的生物细胞中，是构成生物细胞中，是构成生物细胞中，是构成生物细胞中，是构成生物体最基本的生物体最基本的生物体最基本的生物体最基本的结构结构结构结构物质和功能物质物质和功能物质物质和功能物质物质和功能物质。蛋白质是生命活动的蛋白质是生命活动的蛋白质是生命活动的蛋白质是生命活动的物质基础，它参与了物质基础，它参与了物质基础，它参与了物质基础，它参与了几乎所有的生命活动几乎所有的生命活动几乎所有的生命活动几乎所有的生命活动过程过程过程过程。第一章第一章 蛋白质蛋白质(Protein)(Protein) 第一节第一节 概概 述述一、
2、一、蛋白质的定义蛋白质的定义 蛋白质：蛋白质：是一切生物体中普遍存在的，由天然氨基酸天然氨基酸通过肽键肽键连接而成的生物大分子；其种类繁多，各具有一定的相对分子质量，复杂的分子结构和特定的生物功能；是表达生物遗传性状的一类主要物质。二、蛋白质在生命中的重要性二、蛋白质在生命中的重要性 早在1878年，恩格斯就在反杜林论中指出：“生生命是蛋白体的存在方式，这种存在方式本质上就在于这命是蛋白体的存在方式，这种存在方式本质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新。”具体生物学意义：具体生物学意义：1. 1. 生物体的组成成分生物体的组成成分2. 2. 酶
3、酶3. 3. 运输：运输：4. 4. 运动运动：5. 5. 抗体抗体6. 6. 干扰素干扰素7. 7. 遗传信息的控制遗传信息的控制8. 8. 细胞膜的通透性细胞膜的通透性9. 9. 高等生物的记忆、识别机构高等生物的记忆、识别机构Na-KNa-K泵泵、驱动蛋白介导的转运活动驱动蛋白介导的转运活动离子转运离子转运三、蛋白质的组成三、蛋白质的组成1.1.元素组成元素组成 蛋白质是一类含氮有机化合物，除含有碳、氢、氧外，还有氮和少量的硫。某些蛋白质还含有其他一些元素，主要是磷、铁、碘、碘、锌和铜等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为： 碳 50 氢 7 氧 23 氮 16% 硫 03 其他 微 量
4、 氮占生物组织中所有含氮物质的绝大部分。因此，可以将生物组织的含氮量近似地看作蛋白质的含氮量。由于大多数蛋白质大多数蛋白质的含氮量接近于的含氮量接近于16%16%，所以，可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量蛋白质含量的测定：凯氏定氮法蛋白质含量的测定：凯氏定氮法(测定氮的经典方法) 优点：对原料无选择性，仪器简单，方法也简单； 缺点：易将非蛋白氮(如核酸中的氮)都归入蛋白质中, 不精确。 一般，样品含氮量平均在16%，取其倒数100/16=6.25，即为蛋白质换算系数蛋白质换算系数，其含义是样品中每存在1g元素氮，就说明含有6.25g 蛋白质；故： 蛋白质含量=氮的量100/16或
5、6.25 除了上法外，还有 紫外比色法紫外比色法 双缩脲法双缩脲法 FolinFolin酚酚 考马斯亮兰考马斯亮兰G G250250比色法比色法（条件：蛋白质必须是可溶的） 2.2.化学组成化学组成（两种类型） 单纯蛋白质：水解（三种方法）为 -氨基酸 缀合蛋白质=单纯蛋白质+辅基 第二节第二节 氨基酸化学氨基酸化学一、氨基酸的结构与分类一、氨基酸的结构与分类1.1.氨基酸的结构氨基酸的结构氨基酸氨基酸是蛋白质水解的最终最终产物，是组成蛋白质的基本单位。从所有蛋白质水解物中分离出来的氨基酸有二十种（标准氨基酸， standard amino acids) ，除脯氨酸和羟脯氨酸外，这些天然氨基酸
6、在结构上的共同特点为：(1) 与羧基相邻的-碳原子上都有一个氨基，因而称为-氨基酸 COOHH2N CH -碳原子基团 R R基团-氨基酸基本结构通式不带电形式 H2NCHCOOHR +H3NCHCOO-R两性离子形式(中性PH)(2) C如是不对称C（除Gly），则： 具有两种立体异构体 D-型和L-型（蛋白质中的蛋白质中的AA都是都是L型型） . 具有旋光性（手性） 左旋（-）或右旋（+）BA.2.2.构成蛋白质的构成蛋白质的2020种氨基酸种氨基酸3 3、常见蛋白质氨基酸的分类、常见蛋白质氨基酸的分类1 1）按照）按照R R基的化学结构基的化学结构（1 1）脂肪簇氨基酸）脂肪簇氨基酸中性
7、氨基酸：中性氨基酸：GlyGly、AlaAla、ValVal、LeuLeu、IleIle含羟基或硫氨基酸：含羟基或硫氨基酸：SerSer、ThrThr、CysCys、MetMet酸性氨基酸及其酰胺：酸性氨基酸及其酰胺：AspAsp、GluGlu、AsnAsn、GlnGln碱性氨基酸：碱性氨基酸：LysLys、ArgArg（2 2）芳香簇氨基酸）芳香簇氨基酸PhePhe、TyrTyr、TrpTrp（3 3）杂环簇氨基酸）杂环簇氨基酸HisHis、ProPro(Gln, Q)(Asn, N)2 2）按）按R R的极性性质的极性性质（1 1）非极性）非极性R R基氨基酸基氨基酸AlaAla、ValV
8、al、LeuLeu、IleIle、ProPro、PhePhe、TrpTrp、MetMet（2 2）不带电荷的极性）不带电荷的极性R R基氨基酸基氨基酸GlyGly、SerSer、ThrThr、CysCys、TyrTyr、AsnAsn、GlnGln（3 3）带正电荷的）带正电荷的R R基氨基酸基氨基酸（4 4）带负电荷的）带负电荷的R R基氨基酸基氨基酸LysLys、ArgArg、HisHisAspAsp、GluGlu注：二十种氨基酸的结构特点注：二十种氨基酸的结构特点支链氨基酸：支链氨基酸：缬氨酸、亮氨酸，异亮氨酸缬氨酸、亮氨酸，异亮氨酸含羟基的氨基酸：含羟基的氨基酸：丝氨酸、苏氨酸丝氨酸、苏
9、氨酸含硫的氨基酸：含硫的氨基酸：半胱氨酸（含巯基）、甲硫氨半胱氨酸（含巯基）、甲硫氨 酸（含硫甲基酸（含硫甲基）含苯环的氨基酸：含苯环的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸含胍基的氨基酸：含胍基的氨基酸：精氨酸精氨酸含咪唑基的氨基酸：含咪唑基的氨基酸：组氨酸组氨酸亚氨基酸：亚氨基酸：脯氨酸脯氨酸含酰胺的氨基酸：含酰胺的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺天冬酰胺、谷氨酰胺含吲哚基的氨基酸：含吲哚基的氨基酸：色氨酸色氨酸含含-氨基的氨基酸：氨基的氨基酸：赖氨酸赖氨酸胶原蛋白中的胶原蛋白中的Lys侧链氧化时能形成很强的分子间侧链氧化时能形成很强的分子间(内内)交联。交联。Arg的胍基碱性
10、很强，与的胍基碱性很强，与NaOH相当。相当。His是是一一个个弱弱碱碱，是是天天然然的的缓缓冲冲剂剂，它它往往往往存存在在于于许许多多酶酶的的活活性中心。性中心。非非极极性性aa一一般般形形成成蛋蛋白白质质的的疏疏水水核核心心，带带电电荷荷的的aa和和极极性性aa位于表面。位于表面。酶的活性中心：酶的活性中心：His、Ser、Cys 4.4.人体所需的八种必需氨基酸人体所需的八种必需氨基酸 缬氨酸(Val) 亮氨酸(Leu) 异亮氨酸(Ile) 苏氨酸(Thr) 赖氨酸(Lys) 蛋氨酸(Met) 苯丙氨酸(Phe)色氨酸(Trp) 婴儿时期所需: 精氨酸(Arg)、组氨酸(His) 早产儿
11、所需：色氨酸(Try)、半胱氨酸(Cys). .几种重要的不常见几种重要的不常见几种重要的不常见几种重要的不常见propropropro氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸在少数蛋白质中分离出一些不常见的氨基酸，通常称为不常见蛋白质氨基酸。这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的。其中重要的有4-羟基脯氨酸、5-羟基赖氨酸(存在于胶原pro)、N-甲基赖氨酸、和3,5-二碘酪氨酸等。这些不常见蛋白质氨基酸的结构如下： 6 6 6 6、非蛋白质氨基酸、非蛋白质氨基酸、非蛋白质氨基酸、非蛋白质氨基酸除除参参与与蛋蛋白白质质组组成成的的2020多多种种氨氨基基酸酸外外，生生物物体体内内存存在在大大量量的的氨氨
12、基基酸酸中中间间代代谢谢产产物物，它它们们不不是是蛋蛋白白质质的的结结构构单单元元，但但在在生生物体内具有很多生物学功能。物体内具有很多生物学功能。 （1 1）L-L-型型氨基酸的衍生物：氨基酸的衍生物：L-L-瓜氨酸和瓜氨酸和L-L-鸟氨酸鸟氨酸 （2 2）D-D-型氨基酸：型氨基酸：D-GluD-Glu、D-AlaD-Ala（肽聚糖中）、（肽聚糖中）、D-PheD-Phe（短（短杆菌肽杆菌肽S S） （3 3）-、-、-氨基酸氨基酸 ：-Ala-Ala（泛素的前体）、（泛素的前体）、-氨基丁酸（神经递质）。氨基丁酸（神经递质）。 二二. .氨基酸的重要理化性质氨基酸的重要理化性质1.1.一
13、般物理性质一般物理性质 常见氨基酸均为无色结晶，其形状因构型而异(1)(1)溶解性：溶解性：各种氨基酸在水中的溶解度差别很大，并能使水的介电常数增加，能溶解于稀酸或稀碱中，但不能溶解于有机溶剂。通常酒精能把氨基酸从其溶液中沉淀析出。 (2)(2)熔点：熔点：氨基酸的熔点极高，一般在200以上。(3)(3)味感：味感：其味随不同氨基酸有所不同，有的无味、有的为甜、有的味苦(必需氨基酸必需氨基酸都具有苦味，以苯丙氨酸和色氨酸的苦味最强都具有苦味，以苯丙氨酸和色氨酸的苦味最强)，谷氨酸的单钠盐有鲜味，是味精的主要成分。(4)(4)旋光性：旋光性：除甘氨酸外，氨基酸都具有旋光性，能使偏振光平面向左或向
14、右旋转，左旋者通常用（-）表示，右旋者用（+）表示。(5)(5)光吸收：光吸收：构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(3.5pH3.5，-羧羧基基以以-COO-COO- -形形式式存存在在。-氨氨基基pKpK2 2在在9.49.4左左右右，当当pH8.0pH8.0时时，-氨氨基基以以-NH-NH3 3+ +形形式式存存在在。在在pH3.5-8.0pH3.5-8.0时时，带带有有相相反反电电荷荷，因因此此氨氨基基酸酸在在水水溶溶液液中中是是以以两两性性离离子离子形式存在。子离子形式存在。 在在pH2.34pH2.34和和pH9.60pH9.60处，处，GlyGly具有缓冲
15、能力。具有缓冲能力。起点：起点： 100% Gly100% Gly+ + 净电荷：净电荷：+1+1第一拐点：第一拐点： 50%Gly50%Gly + + ，50%Gly50%Gly 平均净电荷：平均净电荷：+0.5+0.5 pH=pK+lgGly pH=pK+lgGly/Gly/Gly+ + = pK = pK1 1 = 2.34= 2.34第二拐点：第二拐点： 100%Gly100%Gly 净电荷：净电荷：0 0 等电点等电点pIpI第三拐点：第三拐点： 50%Gly50%Gly ，50%Gly50%Gly- - 平均净电荷：平均净电荷：-0.5-0.5 pH=pK pH=pK2 2+lgG
16、ly+lgGly- -/Gly/Gly=pK=pK2 2=9.6=9.6终点：终点： 100% Gly100% Gly- - 净电荷：净电荷：-1-1HisHis咪咪唑唑基基的的pKpKa a值值为为6.06.0，在在pH7pH7附附近近有有明明显显的的缓缓冲冲作作用用。在在生生理理条条件件下下，只只有有HisHis有有缓缓冲冲能能力力。血血红红蛋蛋白白中中HisHis含含量量高高，在血液中具很强的缓冲能力。在血液中具很强的缓冲能力。 甘甘氨氨酸酸滴滴定定曲曲线线甘氨酸盐酸盐（甘氨酸盐酸盐（A+）等电点甘氨酸（等电点甘氨酸（A ）甘氨酸钠（甘氨酸钠（A-）一氨基一羧基一氨基一羧基AA的的等电点
17、计算：等电点计算：pI=2pK1+pK2一氨基二羧基一氨基二羧基AA的的等电点计算：等电点计算：pI=2pK1+pK2二氨基一羧基二氨基一羧基AA的的等电点计算：等电点计算：pI=2pK2+pK3 3.3.氨基酸的等电点氨基酸的等电点 当溶液浓度为某一pH值时，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-数目正好相等，净电荷为0。这一pH值即为氨基酸的等电点等电点，简称pI。在等电点时，氨基酸既不向正极也不向负极移动，即氨基酸处于两性离子状态。 侧链不含解离基团的中性氨基酸，其等电点是它的pK1和pK2的算术平均值：pI = (pK1 + pK2 )/2 同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其p
18、I值也决定于两性离子两边的pK值的算术平均值。 酸性氨基酸：pI = (pK1 + pKR-COO- )/2 碱性氨基酸：pI = (pK2 + pKR-NH2 )/2 结论结论：（1）当PHPI，AA带电性？在电场中的运动性？（2）当PHPI，AA带电性？在电场中的运动性？（3）PI与浓度的关系？ 氨基酸与水合茚三酮共热，发生氧化脱氨反应，生成NH3与酮酸。水合茚三酮变为还原型茚三酮。加热过程中酮酸裂解，放出CO2，自身变为少一个碳的醛。NH3与水合茚三酮及还原型茚三酮脱水缩合，生成蓝紫色化合物。4.氨基酸的化学性质氨基酸的化学性质(1)与茚三酮的反应（颜色反应）与茚三酮的反应（颜色反应）
19、OH OHn反应要点反应要点A.A.该反应由该反应由NHNH2 2与与COOHCOOH共同参与共同参与B.B.茚三酮是强氧化剂茚三酮是强氧化剂C.C.该反应非常灵敏，可在该反应非常灵敏，可在570nm570nm测定吸光值测定吸光值D. D. 测定范围：测定范围：0.50.55050g/mlg/ml E.E.脯氨酸（或羟脯氨酸）与茚三酮直接生成黄色物质（不释放脯氨酸（或羟脯氨酸）与茚三酮直接生成黄色物质（不释放NHNH3 3）n应用：应用：A.A.氨基酸定量分析（先用层析法分离，再测定氨基酸定量分析（先用层析法分离，再测定COCO2 2的量）的量）B.B.氨基酸自动分析仪：氨基酸自动分析仪： 用
20、阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。 n反应特点反应特点A.A.为为- - NHNH2 2的反应的反应B.B.在常温，中性条件，甲醛与在常温，中性条件，甲醛与- NH- NH2 2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离子。子。n应用：氨基酸定量分析应用：氨基酸定量分析甲醛滴定法（间接滴定）甲醛滴定法（间接滴定）(2)与甲醛反应与甲醛反应氨基酸的甲醛滴定氨基酸的甲醛滴定 氨氨基基酸酸两两性性离离子子的的NHNH3 3+ +是是弱弱酸酸，其其pKapKa为为9.79.7左左右
21、右，完完全全解解离离时时溶溶液液的的pHpH约约为为1010，超超出出酸酸碱碱滴滴定定指指示示剂剂的的显显色色范范围围，不不能能用用一一般般指指示示剂剂，例例如如酚酚酞酞，作作酸酸碱碱滴滴定定。但但当当氨氨基基酸酸的的氨氨基基与与中中性性甲甲醛醛结结合合成成氨氨基基酸酸二二羟羟甲甲基基衍衍生生物物后后，其其氨氨基基的的碱碱性性即即大大大大减减少少，反反应应向向右右进进行行，两两性性离离子子中中NHNH3 3+ +基基的的离离解解度度增增加加，释释出出H H+ +质质子子，NHNH3 3+ +的的pKpKa a值值降降低低到到6.56.5左左右右，溶溶液液的的pHpH降降至至6.76.7左左右右
22、，此此时时NHNH3 3+ +离离解解释释出出的的H H+ +即即可可以以酚酚酞酞作作指指示示剂剂用用标标准准NaOHNaOH溶溶液液加加以以滴滴定定。每每释释出出的的一一个个H H+ +就就相相当当于于一一个个氨氨基基酸酸。甲甲醛醛滴滴定定可可用用来来测测定定蛋蛋白白质的水解程度质的水解程度。当当氨氨基基酸酸溶溶液液中中存存在在1mol/L1mol/L甲甲醛醛时时，滴滴定定终终点点由由pHl2pHl2左左右右移移至至9 9附附近近，亦亦即即酚酚酞酞指指示示剂的变色区域。这就是甲醛滴定法的基础。剂的变色区域。这就是甲醛滴定法的基础。小结：A.A.直接滴定，终点直接滴定，终点pHpH过高（过高（
23、1212），没有适），没有适当指示剂。当指示剂。B.B.与甲醛反应，滴定终点在与甲醛反应，滴定终点在9 9左右，可用酚左右，可用酚酞作指示剂。酞作指示剂。C.C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩摩尔比尔比1 1：1 1）D.D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。速度。 (3) (3) 与与2,4-2,4-二硝基氟苯（二硝基氟苯（DNFBDNFB）反应）反应n反应特点反应特点A.A.为为- - NHNH2 2的反应的反应B.B.氨基酸氨基酸- NH- NH2 2的一个的一个H H原子可被烃基取代原子可被烃基取代( (卤代烃
24、卤代烃) )C.C.在弱碱性条件下，与在弱碱性条件下，与DNFBDNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸n应用：鉴定多肽或蛋白质的应用：鉴定多肽或蛋白质的N-N-末端氨基酸末端氨基酸A.A.虽然多肽侧链上的虽然多肽侧链上的- NH- NH2 2、酚羟基也能与、酚羟基也能与DNFBDNFB反应，但其生成物，容易反应，但其生成物，容易与与- DNP- DNP氨基酸区分和分离（氨基酸区分和分离（- DNP- DNP氨基酸可溶于有机溶剂，而氨基酸可溶于有机溶剂，而R R基的基的DNPDNP衍生物则不能，因此，可用衍生物则不能，因此，可用有机溶剂抽提有机溶剂抽提）黄色黄色
25、 首先由首先由SangerSanger应用，确定了胰岛素的一级结构应用，确定了胰岛素的一级结构A.A.B.B.用酸水解用酸水解DNP-DNP-肽，得肽，得DNP-NDNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸端氨基酸及其他游离氨基酸C.C.分离分离DNP-DNP-氨基酸氨基酸D.肽分子与肽分子与DNFBDNFB反应，得反应，得DNP-DNP-肽肽层析法定性层析法定性DNP-DNP-氨基酸，得出氨基酸，得出N N端氨基酸的种类、数目端氨基酸的种类、数目nSanger降解法的改进方法- DNS-Edman降解法n用DNS(二甲基氨基萘磺酰氯)测定N端氨基酸n原理DNFB法相同n但水解后的DNS-氨基酸不需分
26、离，可直接用电泳或层析法鉴定n由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Sanger法高几到十几倍n可用于微量氨基酸的定量 由Edman于1950年首先提出为- NH2的反应用于N末端分析，又称Edman降解法nEdman Edman （苯异硫氰酸酯法）苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-N-端分端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-N-端氨基酸残基逐一端氨基酸残基逐一进行标记和解离进行标记和解离。(4)与异硫氰酸苯酯（与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应）的反应苯氨基硫甲酰肽苯氨基硫甲酰
27、肽噻唑啉酮苯胺噻唑啉酮苯胺苯乙内酰硫脲苯乙内酰硫脲AAAA 肽链（肽链（N N端氨基酸）与端氨基酸）与PITCPITC偶联，生成偶联，生成PTC-PTC-肽肽环化断裂：最靠近环化断裂：最靠近PTCPTC基的肽键断裂，生成基的肽键断裂，生成PTC-PTC-氨基酸和少氨基酸和少 一残基的肽链，同时一残基的肽链，同时PTC-PTC-氨基酸环化生成氨基酸环化生成PTH-PTH-氨氨 基酸基酸分离分离PTH-PTH-氨基酸氨基酸层析法和层析法和HPLCHPLC等鉴定等鉴定n用Edman降解法提供逐次减少一个残基的肽链 灵敏度提高，能连续测定。n多肽顺序自动分析仪 样品最低用量可在5pmoln（5）侧链）
28、侧链R基参加的反应基参加的反应n氨基酸的侧链基团氨基酸的侧链基团R有下列几种：有下列几种： n苯环苯环(苯丙氨酸及酪氨酸苯丙氨酸及酪氨酸)n酚基酚基(酪氨酸酪氨酸)n-OH基基(丝氨酸、苏氨酸丝氨酸、苏氨酸)n-SH基及基及SS键键(半胱氨酸及胱氨酸半胱氨酸及胱氨酸)n吲哚基吲哚基(色氨酸色氨酸)n胍基胍基(精氨酸精氨酸)n咪唑基咪唑基(组氨酸组氨酸) 重要反应：重要反应：A. 与酰化试剂反应：与酰化试剂反应：如丹磺酰氯；为- NH2的反应B. 精氨酸的反应：精氨酸的反应：胍基与1，2环已二酮；防止胰pro酶对Arg的 COOH所生成的肽键的水解C. Cys与乙撑亚胺的反应与乙撑亚胺的反应：S
29、H的反应；为胰pro酶提供了新的水解位点D. 胱氨酸的氧化与还原反应：胱氨酸的氧化与还原反应：二硫键的反应E. 其他反应其他反应成盐、成酯、成肽、脱羧反应n酪酪氨氨酸酸的的酚酚基基在在3和和5位位上上容容易易发发生生亲亲电电取取代代反反应应，例例如如发发生生碘碘化化或或硝硝化化，分分别别生生成成一一碘碘酪酪氨氨酸酸和和二二碘碘酪酪氨氨酸酸或或一一硝基酪氨酸和二硝基酪氨酸：硝基酪氨酸和二硝基酪氨酸：n与重氮盐结合生成桔黄色的化合与重氮盐结合生成桔黄色的化合物：物：n这就是这就是Pauly反应，可用于检测酪氨酸。反应，可用于检测酪氨酸。n组组氨氨酸酸的的侧侧链链咪咪唑唑基基与与重重氮氮苯苯磺磺酸酸
30、也也能能形形成成相相似的化合物，但颜色稍有差异，是棕红色。似的化合物，但颜色稍有差异，是棕红色。n精精氨氨酸酸的的侧侧链链胍胍基基在在硼硼酸酸钠钠缓缓冲冲液液(pH 89，2535）中，与）中，与1，2环己二酮反应，生成缩合物：环己二酮反应，生成缩合物：n在胰蛋白酶水解肽段时，用于保护在胰蛋白酶水解肽段时，用于保护Arg的的NH2，减少作用位点。，减少作用位点。n色色氨氨酸酸的的侧侧链链吲吲哚哚基基在在温温和和条条件件下下可可被被N溴溴代代琥琥珀珀酰酰亚亚胺胺氧氧化化。此此反反应应可可用用于于分分光光光光度度法法测测定定蛋蛋白白质质中中色色氨氨酸酸的的含含量量，并并能能在在色色氨氨酸酸和和酪酪
31、氨氨酸酸残残基基处处选选择择性性化学断裂肽键。化学断裂肽键。n蛋蛋氨氨酸酸侧侧链链上上的的甲甲硫硫基基是是一一个个很很强强的的亲亲核核基基团团，与与烃烃化化试试剂如甲基碘容易形成锍盐。剂如甲基碘容易形成锍盐。n生生成成的的侧侧链链带带有有正正电电荷荷(+NH3)，它它为为胰胰蛋蛋白白酶酶水水解解肽肽链链提提供供了了一一个个新新位位点点，这这对对氨氨基基酸酸顺顺序序测测定定是是很很有有用用的的。同同时时此此反反应应也也可可用用来来保保护护肽肽链链上上的的SH基基、以以防防止止被被重重新新氧氧化化为为二硫键。二硫键。n半胱氨酸可与二硫硝基苯甲酸半胱氨酸可与二硫硝基苯甲酸(缩写为缩写为DTNB)或称
32、或称Ellman氏试剂发生硫醇氏试剂发生硫醇二硫化物交换反应：二硫化物交换反应：n反反应应中中1分分子子的的半半胱胱氨氨酸酸引引起起1分分子子的的硫硫硝硝基基苯苯甲甲酸酸的的释释放放，它它在在pH 8.0时时，在在412nm波波长长处处有有强强烈烈的的光光吸吸收收，因此可利用比色法定量测定一因此可利用比色法定量测定一SH基。基。n硫基很容易受空气或其他氧化剂氧化。硫基很容易受空气或其他氧化剂氧化。n硫醇一般遇到的只有两种氧化衍生物：二硫化物和磺酸。硫醇一般遇到的只有两种氧化衍生物：二硫化物和磺酸。n2R-SH 1/2O2 R-S-S-R + H2O2n半半胱胱氨氨酸酸的的SH基基可可与与另另一
33、一个个SH基基结结合合成成二二硫硫键键(SS)。SH与与SS成成一一氧氧化化还还原原体体系系，在在机机体体氧氧化化还还原原作作用用中中有有一一定定作作用用。二二硫硫键键存存在在于于多多种种肽肽和和蛋蛋白白质质分分子子中中，胰胰岛岛素素分分子子中中有有3个个二二硫硫键键，核核糖糖核核酸酸酶酶分分子子中中有有4个个二二硫硫键键。二二硫硫键键对对蛋蛋白白质质和和多多肽肽分分子子的的立立体体结结构构有有维维系系稳稳定定的的作作用用。二二硫硫键键可可被被还还原原剂剂破破坏坏产产生生SH基基。SH基基可可被被氧氧化化成成磺磺酸酸基基(HSO3基基)。这这两两种种反反应应在在研研究究胰胰岛岛素素和和含含二二硫硫键键肽肽的的结结构构工工作中都有用处。作中都有用处。 n丝氨酸、苏氨酸和羟脯氨酸的丝氨酸、苏氨酸和羟脯氨酸的OH基能与酸结合成酯。在生物体基能与酸结合成酯。在生物体蛋白质中，丝氨酸常与磷酸结合，蛋白质中，丝氨酸常与磷酸结合，酪蛋白中含有大量的丝氨酸磷酸酯。酪蛋白中含有大量的丝氨酸磷酸酯。
