显微摄影技术ppt课件

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1、显微摄影技术显微摄影技术廖继东电话：电话：0208522584102085225841E-MAIL:什么是显微摄影？什么是显微摄影？n n 显微摄影：显微摄影： 利用摄影装置（传统相机、数码相利用摄影装置（传统相机、数码相机、专用机、专用CCD等）拍摄显微镜视野中所等）拍摄显微镜视野中所观察到的物像。观察到的物像。n n影像质量取决于：影像质量取决于：样本制作质量样本制作质量样本制作质量样本制作质量；显微镜光学性能；显微镜光学性能；显微镜光学性能；显微镜光学性能；摄影装置性能；摄影装置性能；摄影装置性能；摄影装置性能；操作者技术水平。操作者技术水平。操作者技术水平。操作者技术水平。内内 容容n

2、 n光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n光学显微镜主要光学部件及性能光学显微镜主要光学部件及性能n n与显微摄影有关的基本光学概念与显微摄影有关的基本光学概念 n n显微摄影系统的基本构成显微摄影系统的基本构成n n显微摄影基本操作程序显微摄影基本操作程序n n影响显微成像质量的因素影响显微成像质量的因素光学显微镜种类及结构特征光学显微镜种类及结构特征n n按照其按照其按照其按照其光路结构、分辨模式光路结构、分辨模式光路结构、分辨模式光路结构、分辨模式： 正置显微镜正置显微镜正置显微镜正置显微镜 倒置显微镜倒置显微镜倒置显微镜倒置显微镜 体视镜体视镜体视镜体视镜 偏光镜等

3、；偏光镜等；偏光镜等；偏光镜等；n n按照其照明按照其照明按照其照明按照其照明光源性质光源性质光源性质光源性质： 可见光（明视场、弱视场）可见光（明视场、弱视场）可见光（明视场、弱视场）可见光（明视场、弱视场） 荧光（紫外、红外）显微镜荧光（紫外、红外）显微镜荧光（紫外、红外）显微镜荧光（紫外、红外）显微镜 激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜 光谱显微镜；光谱显微镜；光谱显微镜；光谱显微镜；n n按机械部件的按机械部件的按机械部件的按机械部件的控制方式控制方式控制方式控制方式： 手动手动手动手动 电动和全自动显微镜。电动和全自动显微镜。电动和全自动显微镜。电动和全

4、自动显微镜。光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n明视场明视场明视场明视场（可见光）（可见光）（可见光）（可见光）照明光源采用照明光源采用照明光源采用照明光源采用普通灯泡或卤素普通灯泡或卤素普通灯泡或卤素普通灯泡或卤素灯灯灯灯，主要用于常规染色组织标本的观察：，主要用于常规染色组织标本的观察：，主要用于常规染色组织标本的观察：，主要用于常规染色组织标本的观察： 组织化学染色样本组织化学染色样本组织化学染色样本组织化学染色样本 免疫组织化学染色样本；免疫组织化学染色样本；免疫组织化学染色样本；免疫组织化学染色样本；n n弱视场弱视场弱视场弱视场包括相差（又称相忖）、霍夫曼、微

5、分干包括相差（又称相忖）、霍夫曼、微分干包括相差（又称相忖）、霍夫曼、微分干包括相差（又称相忖）、霍夫曼、微分干涉和偏光等，照明光源与明视场通用，但在光路涉和偏光等，照明光源与明视场通用，但在光路涉和偏光等，照明光源与明视场通用，但在光路涉和偏光等，照明光源与明视场通用，但在光路上插入不同的光学部件，降低背景光强度，增强上插入不同的光学部件，降低背景光强度，增强上插入不同的光学部件，降低背景光强度，增强上插入不同的光学部件，降低背景光强度，增强被观察物体的光反差，提高对透明样本的观察能被观察物体的光反差，提高对透明样本的观察能被观察物体的光反差，提高对透明样本的观察能被观察物体的光反差，提高对

6、透明样本的观察能力，主要用于活组织未染色样本的观察。力，主要用于活组织未染色样本的观察。力，主要用于活组织未染色样本的观察。力，主要用于活组织未染色样本的观察。光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n荧光荧光显微镜：显微镜：照明光源采用照明光源采用照明光源采用照明光源采用汞灯或高能氙灯汞灯或高能氙灯汞灯或高能氙灯汞灯或高能氙灯，通过不同的，通过不同的，通过不同的，通过不同的滤光片组合获得不同波段的激发滤光片组合获得不同波段的激发滤光片组合获得不同波段的激发滤光片组合获得不同波段的激发/ /发射光，发射光，发射光，发射光，用于荧光染色标本的观察。用于荧光染色标本的观察。用于荧光

7、染色标本的观察。用于荧光染色标本的观察。由于冷光源技术（由于冷光源技术（由于冷光源技术（由于冷光源技术（金属卤素灯）金属卤素灯）金属卤素灯）金属卤素灯）的开发及荧的开发及荧的开发及荧的开发及荧光蛋白技术的日臻成熟，已逐渐克服了强光光蛋白技术的日臻成熟，已逐渐克服了强光光蛋白技术的日臻成熟，已逐渐克服了强光光蛋白技术的日臻成熟，已逐渐克服了强光源对组织的灼伤及活组织荧光显色等技术瓶源对组织的灼伤及活组织荧光显色等技术瓶源对组织的灼伤及活组织荧光显色等技术瓶源对组织的灼伤及活组织荧光显色等技术瓶颈，使荧光显微技术在活组织样本观察中获颈，使荧光显微技术在活组织样本观察中获颈，使荧光显微技术在活组织样

8、本观察中获颈，使荧光显微技术在活组织样本观察中获得了广泛的应用。得了广泛的应用。得了广泛的应用。得了广泛的应用。 光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n激光共聚焦显微镜：激光共聚焦显微镜： 利用单色高能激光对观测样本进行逐点、多利用单色高能激光对观测样本进行逐点、多利用单色高能激光对观测样本进行逐点、多利用单色高能激光对观测样本进行逐点、多焦面扫描，通过计算机处理合成高清晰图像。焦面扫描，通过计算机处理合成高清晰图像。焦面扫描，通过计算机处理合成高清晰图像。焦面扫描，通过计算机处理合成高清晰图像。n n光谱显微镜：光谱显微镜：采用多滤片组合或分光技术，获得连续激发采用多滤片

9、组合或分光技术，获得连续激发采用多滤片组合或分光技术，获得连续激发采用多滤片组合或分光技术，获得连续激发/ /发射光谱，用于荧光扫描、荧光萃灭、荧发射光谱，用于荧光扫描、荧光萃灭、荧发射光谱，用于荧光扫描、荧光萃灭、荧发射光谱，用于荧光扫描、荧光萃灭、荧光能量转移等细胞动力学观察光能量转移等细胞动力学观察光能量转移等细胞动力学观察光能量转移等细胞动力学观察内内 容容n n光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n光学显微镜主要光学部件及性能光学显微镜主要光学部件及性能n n与显微摄影有关的基本光学概念与显微摄影有关的基本光学概念 n n显微摄影系统的基本构成显微摄影系统的基本构

10、成n n显微摄影基本操作程序显微摄影基本操作程序n n影响显微成像质量的因素影响显微成像质量的因素光学显微镜主要光学部件及性能n n透镜及其性能透镜及其性能n n显微镜成像原理显微镜成像原理n n影响成像的关键因素影响成像的关键因素相差相差n n主要光学部件及性能主要光学部件及性能n n光学显微镜相关参数光学显微镜相关参数透镜及其性能透镜及其性能n n透镜透镜（lens):透镜是由透明物质（如玻璃等）透镜是由透明物质（如玻璃等）制成的一种光学元件。制成的一种光学元件。n n透镜是折射镜，其折射面是两个球面，或一透镜是折射镜，其折射面是两个球面，或一个球面一个平面。它所成的像有实像也有虚个球面一

11、个平面。它所成的像有实像也有虚像。像。n n透镜一般可以分为两大类：透镜一般可以分为两大类：凸透镜凸透镜和和凹透镜凹透镜。中央部分比边缘部分厚的叫凸透镜，有双凸、中央部分比边缘部分厚的叫凸透镜，有双凸、平凸、凹凸三种；中央部分比边缘部分薄的平凸、凹凸三种；中央部分比边缘部分薄的叫凹透镜，有双凹、平凹、凸凹三种。叫凹透镜，有双凹、平凹、凸凹三种。n n凸透镜凸透镜具有会聚光线的作用，所以也叫会聚具有会聚光线的作用，所以也叫会聚透镜。透镜。n n凹透镜凹透镜具有发散光线的作用，所以也叫发散具有发散光线的作用，所以也叫发散透镜。透镜。n n透镜是组成显微镜光学系统的最基本的光学透镜是组成显微镜光学系

12、统的最基本的光学元件，物镜、目镜及聚光镜等部件均由单个元件，物镜、目镜及聚光镜等部件均由单个或多个透镜组成。或多个透镜组成。n n虚像虚像/实像实像：光线通过凹透镜后，成正立虚：光线通过凹透镜后，成正立虚像，而凸透镜则成正立实像。实像可在屏幕像，而凸透镜则成正立实像。实像可在屏幕上显现出来，而虚像不能。上显现出来，而虚像不能。 n n焦点与焦平面焦点与焦平面：当一束平行于光轴当一束平行于光轴的光线通过凸透镜后相交于一点，这的光线通过凸透镜后相交于一点，这个点称个点称“焦点焦点”；通过交点并垂直光；通过交点并垂直光轴的平面，称轴的平面，称“焦平面焦平面”。焦点有两。焦点有两个，在物方空间的焦点，

13、称个，在物方空间的焦点，称“物方焦物方焦点点”，该处的焦平面，称，该处的焦平面，称“物方焦平物方焦平面面”；反之，在像方空间的焦点，称；反之，在像方空间的焦点，称“像方焦点像方焦点”，该处的焦平面，称，该处的焦平面，称“像方焦平面像方焦平面”。光学显微镜主要光学部件及性能n n透镜及其性能透镜及其性能n n显微镜的成像原理显微镜的成像原理n n影响成像的关键因素影响成像的关键因素相差相差n n主要光学部件及性能主要光学部件及性能n n光学显微镜相关参数光学显微镜相关参数显微镜的成像原理显微镜的成像原理n na.a.当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在像方二当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则

14、在像方二当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在像方二当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在像方二倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实像；倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实像；倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实像；倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实像； n nb.b.当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在像方二倍当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在像方二倍当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在像方二倍当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在像方二倍焦距上形成同样大小的倒立实像；焦距上形成同样大小的倒立实像；焦距上形成同样大小的倒立实像；焦距上形成同样大小的倒立实像；n nc.c.当物体位于透镜物方

15、二倍焦距以内，焦点以外时，则当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在像方二倍焦距以外形成放大的在像方二倍焦距以外形成放大的在像方二倍焦距以外形成放大的在像方二倍焦距以外形成放大的倒立实像倒立实像倒立实像倒立实像；n nd.d.当物体位于透镜物方焦点上时，则像方不能成像；当物体位于透镜物方焦点上时，则像方不能成像；当物体位于透镜物方焦点上时，则像方不能成像；当物体位于透镜物方焦点上时，则像方不能成像； n ne.e.当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也无像的当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也

16、无像的当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也无像的当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也无像的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的的的的直立虚像直立虚像直立虚像直立虚像。 显微镜的成像原理就是利用上述（显微镜的成像原理就是利用上述（c）和）和（e）的规律把物体放大的。当物体处在物镜前）的规律把物体放大的。当物体处在物镜前F-2F（F为物方焦距）之间，则在物镜像方的为物方焦距）之间，则在物镜像方的二倍焦距以外形成放大的倒立实像。在显微镜二倍焦距以外

17、形成放大的倒立实像。在显微镜的设计上，将此像落在目镜的一倍焦距的设计上，将此像落在目镜的一倍焦距F1之内，之内，使物镜所放大的第一次像（中间像），又被目使物镜所放大的第一次像（中间像），又被目镜再一次放大，最终在目镜的物方（中间像的镜再一次放大，最终在目镜的物方（中间像的同侧）、人眼的明视距离（同侧）、人眼的明视距离（250mm）处形成）处形成放大的直立（相对中间像而言）虚像。因此，放大的直立（相对中间像而言）虚像。因此，当我们在镜检时，通过目镜（不另加转换棱镜）当我们在镜检时，通过目镜（不另加转换棱镜）看到的像于原物体的像，方向相反。看到的像于原物体的像，方向相反。 光学显微镜主要光学部件及

18、性能n n透镜及其性能透镜及其性能n n显微镜的成像原理显微镜的成像原理n n影响成像的关键因素影响成像的关键因素相差相差n n主要光学部件及性能主要光学部件及性能n n光学显微镜相关参数光学显微镜相关参数影响成像的关键因素影响成像的关键因素相差相差n n 色差色差色差色差（ChromaticChromatic aberrationaberration）：）：）：）： 色差是透色差是透色差是透色差是透镜成像的一个严重缺陷，发生在以多色光为光镜成像的一个严重缺陷，发生在以多色光为光镜成像的一个严重缺陷，发生在以多色光为光镜成像的一个严重缺陷，发生在以多色光为光源的情况下，单色光不产生色差。白光由

19、红源的情况下，单色光不产生色差。白光由红源的情况下，单色光不产生色差。白光由红源的情况下，单色光不产生色差。白光由红 橙橙橙橙 黄黄黄黄 绿绿绿绿 青青青青 蓝蓝蓝蓝 紫紫紫紫 七种组成，各种光的波长不同七种组成，各种光的波长不同七种组成，各种光的波长不同七种组成，各种光的波长不同 ，所以在通过透镜时的折射率也不同，这样物，所以在通过透镜时的折射率也不同，这样物，所以在通过透镜时的折射率也不同，这样物，所以在通过透镜时的折射率也不同，这样物方一个点，在像方则可能形成一个方一个点，在像方则可能形成一个方一个点，在像方则可能形成一个方一个点，在像方则可能形成一个色斑色斑色斑色斑。 色差色差色差色差

20、一般有位置色差，放大率色差。位置色差使像一般有位置色差，放大率色差。位置色差使像一般有位置色差，放大率色差。位置色差使像一般有位置色差，放大率色差。位置色差使像在任何位置观察，都带有色斑或晕环，使像模在任何位置观察，都带有色斑或晕环，使像模在任何位置观察，都带有色斑或晕环，使像模在任何位置观察，都带有色斑或晕环，使像模糊不清。而放大率色差使像带有彩色边缘。糊不清。而放大率色差使像带有彩色边缘。糊不清。而放大率色差使像带有彩色边缘。糊不清。而放大率色差使像带有彩色边缘。n n球差球差(Sphericalaberration)：球差是轴上球差是轴上点的单色相差，是由于透镜的球形表面造成的。点的单色

21、相差，是由于透镜的球形表面造成的。球差造成的结果是，一个点成像后，不再是个球差造成的结果是，一个点成像后，不再是个亮点，而是一个中间亮亮点，而是一个中间亮边缘逐渐模糊的边缘逐渐模糊的亮斑亮斑。从而影响成像质量。从而影响成像质量。 球差的矫正常利用透镜球差的矫正常利用透镜组合来消除，由于凸、凹透镜的球差是相反的，组合来消除，由于凸、凹透镜的球差是相反的，可选配不同材料的凸凹透镜胶合起来给予消除。可选配不同材料的凸凹透镜胶合起来给予消除。旧型号显微镜，物镜的球差没有完全矫正，应旧型号显微镜，物镜的球差没有完全矫正，应与相应的补偿目镜配合，才能达到纠正效果。与相应的补偿目镜配合，才能达到纠正效果。一

22、般新型显微镜的球差完全由物镜消除。一般新型显微镜的球差完全由物镜消除。n n慧差慧差(Coma) ：慧差属轴外点的单色相差。慧差属轴外点的单色相差。轴外物点以大孔径光束成像时，发出的光束通轴外物点以大孔径光束成像时，发出的光束通过透镜后，不再相交一点，则一光点的像便会过透镜后，不再相交一点，则一光点的像便会得到得到一逗点壮一逗点壮，型如慧星，故称，型如慧星，故称“慧差慧差”。 n n像散像散（Astigmatism）：）：像散也是影响清晰像散也是影响清晰度的轴外点单色相差。当视场很大时，边缘上度的轴外点单色相差。当视场很大时，边缘上的物点离光轴远，光束倾斜大，经透镜后则引的物点离光轴远，光束倾

23、斜大，经透镜后则引起像散。像散使原来的物点在成像后变成两个起像散。像散使原来的物点在成像后变成两个分离并且相互垂直的短线，在理想像平面上综分离并且相互垂直的短线，在理想像平面上综合后，形成一个合后，形成一个椭圆形的斑点椭圆形的斑点。像散是通过复。像散是通过复杂的透镜组合来消除。杂的透镜组合来消除。n n场曲场曲（Curvatureoffield）：）：场曲又称场曲又称“像像场弯曲场弯曲”。当透镜存在场曲时，整个光束的交。当透镜存在场曲时，整个光束的交点不与理想像点重合，虽然在每个特定点都能点不与理想像点重合，虽然在每个特定点都能得到清晰的像点，但整个像平面则是一个曲面。得到清晰的像点，但整个像

24、平面则是一个曲面。这样在镜检时这样在镜检时不能同时看清整个相面不能同时看清整个相面，给观察，给观察和照相造成困难。因此研究用显微镜的物镜一和照相造成困难。因此研究用显微镜的物镜一般都是般都是平场物镜平场物镜，这种物镜已经矫正了场曲。，这种物镜已经矫正了场曲。n n畸变畸变（Distortion）：）：前面所说各种相差除前面所说各种相差除场曲外，都影响像的清晰度。畸变是另一种性场曲外，都影响像的清晰度。畸变是另一种性质的相差，光束的同心性不受到破坏。因此，质的相差，光束的同心性不受到破坏。因此，不影响像的清晰度，但使像与原物体比，在形不影响像的清晰度，但使像与原物体比，在形状上造成失真。状上造成

25、失真。光学显微镜主要光学部件及性能n n透镜及其性能透镜及其性能n n显微镜的成像原理显微镜的成像原理n n影响成像的关键因素影响成像的关键因素相差相差n n主要光学部件及性能主要光学部件及性能n n光学显微镜相关参数光学显微镜相关参数主要光学部件及性能主要光学部件及性能n n物镜物镜（objective）:物镜是显微镜最物镜是显微镜最主要的光学部件，显微镜的分辩力主主要的光学部件，显微镜的分辩力主要取决于物镜的数值孔径（镜口率，要取决于物镜的数值孔径（镜口率，numerical aperture,NA）。）。n n目前常见物镜：消色差物镜、复消色目前常见物镜：消色差物镜、复消色差物镜、半复消

26、色差物镜、平场消色差物镜、半复消色差物镜、平场消色差物镜。差物镜。数值孔径数值孔径(NA)n n数值孔径数值孔径（numerical aperture,NA），是，是物镜和聚光镜的重要技术参数，是判物镜和聚光镜的重要技术参数，是判断光学元件性能的重要标志。断光学元件性能的重要标志。n n它是物镜前透镜与被检物体之间介质它是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率的折射率(Eta)(Eta)和孔径角和孔径角(u (upsilon)(upsilon)半数的半数的正弦之乘积。用公式表示如下：正弦之乘积。用公式表示如下：NA=sinu/2。n n消色差物镜消色差物镜（achromatic objectiv

27、e, Ach）。这是一种常见的）。这是一种常见的物镜，物镜外壳上不列代表标志。物物镜，物镜外壳上不列代表标志。物镜把光谱中红蓝光聚焦于一点，黄绿镜把光谱中红蓝光聚焦于一点，黄绿光聚焦于一点，最清晰范围为光聚焦于一点，最清晰范围为510630纳米。这种物镜一般不适宜作摄纳米。这种物镜一般不适宜作摄影用，如加黄绿滤光镜，可获得较为影用，如加黄绿滤光镜，可获得较为清晰的照片。清晰的照片。n n复消色差物镜复消色差物镜（apochromatic objective, Apo）。这种物镜能把光镜）。这种物镜能把光镜中红、蓝、黄光聚焦于一点，纠正了红中红、蓝、黄光聚焦于一点，纠正了红蓝光的色差和黄绿光的球

28、差，最佳清晰蓝光的色差和黄绿光的球差，最佳清晰范围为范围为400720纳米。这种物镜适用于纳米。这种物镜适用于在任何色光下或加用各色滤色镜进行观在任何色光下或加用各色滤色镜进行观察摄影，适用于彩色摄影。但察摄影，适用于彩色摄影。但Apo物镜物镜残留有像场弯曲，使平面物体形成类似残留有像场弯曲，使平面物体形成类似球面的弯曲影像，结果使视野中心和边球面的弯曲影像，结果使视野中心和边缘的影像不能同时聚焦，拍出的底片中缘的影像不能同时聚焦，拍出的底片中心清晰，边缘模糊或者相反。心清晰，边缘模糊或者相反。n n半复消色差物镜半复消色差物镜（荧光石镜，（荧光石镜，fluorite objective, F

29、l）。最佳清晰范围）。最佳清晰范围430680纳米，色差校正介于消色差物镜与复纳米，色差校正介于消色差物镜与复消色差物镜之间。消色差物镜之间。n n平场消色差物镜平场消色差物镜(plan achromatic objective, lp)。这种物镜纠正了以上三。这种物镜纠正了以上三种物镜的缺陷，校正了像场弯曲，不存在种物镜的缺陷，校正了像场弯曲，不存在视野中心与边缘不能同时准焦的现像。由视野中心与边缘不能同时准焦的现像。由于影像展开，在同样倍数下，影像要比一于影像展开，在同样倍数下，影像要比一般物镜的影像大。平场消色差物镜有多种般物镜的影像大。平场消色差物镜有多种类型，外壳上刻有类型，外壳上刻

30、有plan.Apo。平场复消色。平场复消色差物镜是最佳物镜。差物镜是最佳物镜。物镜标识物镜标识n n物镜色差程度：物镜色差程度：Apo(复消色差物镜复消色差物镜) Fl(荧石物荧石物镜镜) plan 或或pl(平场消色差物镜平场消色差物镜)。n n放大倍数放大倍数/数字孔径：数字孔径：2.5，4（5），），10/0.25，20，40/0.65，63，100/1.25。n n标准机械筒长：标准机械筒长：160mm或或170mm。n n盖玻片厚：盖玻片厚：0.17mm，常以，常以170mm/0.17mm表示，载玻片厚小于表示，载玻片厚小于1.2mm。n n物镜与被检样品的介质：干燥系物镜无标志；物

31、镜与被检样品的介质：干燥系物镜无标志；油浸镜标有油浸镜标有OIL、OEL、HL或或IMM字样；水浸字样；水浸镜标为镜标为W；甘油为；甘油为Glyz。目镜目镜(eyepiece)n n目镜是位于实像和肉眼间的放大镜，将物像进行第目镜是位于实像和肉眼间的放大镜，将物像进行第目镜是位于实像和肉眼间的放大镜，将物像进行第目镜是位于实像和肉眼间的放大镜，将物像进行第二次放大，并纠正物镜造成的像差和色差。目镜由二次放大，并纠正物镜造成的像差和色差。目镜由二次放大，并纠正物镜造成的像差和色差。目镜由二次放大，并纠正物镜造成的像差和色差。目镜由两片（组）透镜组成，其中，场透镜可使视野边缘两片（组）透镜组成，其

32、中，场透镜可使视野边缘两片（组）透镜组成，其中，场透镜可使视野边缘两片（组）透镜组成，其中，场透镜可使视野边缘的成像光线向内折射，进入眼透镜中，使物体的影的成像光线向内折射，进入眼透镜中，使物体的影的成像光线向内折射，进入眼透镜中，使物体的影的成像光线向内折射，进入眼透镜中，使物体的影像均匀明亮，眼透镜决定放大倍数和成像的优劣。像均匀明亮，眼透镜决定放大倍数和成像的优劣。像均匀明亮，眼透镜决定放大倍数和成像的优劣。像均匀明亮，眼透镜决定放大倍数和成像的优劣。目镜筒内装有以金属光阑，物镜放大后的目镜筒内装有以金属光阑，物镜放大后的目镜筒内装有以金属光阑，物镜放大后的目镜筒内装有以金属光阑，物镜放

33、大后的 中间像就中间像就中间像就中间像就落在金属光阑平面处。从目镜中透出来的光线在目落在金属光阑平面处。从目镜中透出来的光线在目落在金属光阑平面处。从目镜中透出来的光线在目落在金属光阑平面处。从目镜中透出来的光线在目镜外相交，这个相交点称为眼点（镜外相交，这个相交点称为眼点（镜外相交，这个相交点称为眼点（镜外相交，这个相交点称为眼点（eyepointeyepoint）。观）。观）。观）。观察时眼睛应在眼点位置上，这样才能接收从目镜射察时眼睛应在眼点位置上，这样才能接收从目镜射察时眼睛应在眼点位置上，这样才能接收从目镜射察时眼睛应在眼点位置上，这样才能接收从目镜射出的全部光线，看到最大的视场，否

34、则会造成图像出的全部光线，看到最大的视场，否则会造成图像出的全部光线，看到最大的视场，否则会造成图像出的全部光线，看到最大的视场，否则会造成图像晃动和不适的感觉，影响观察效果。晃动和不适的感觉，影响观察效果。晃动和不适的感觉，影响观察效果。晃动和不适的感觉，影响观察效果。目镜目镜(eyepiece)n n由前述已知显微镜的分辨能力是由物镜的数字孔径由前述已知显微镜的分辨能力是由物镜的数字孔径由前述已知显微镜的分辨能力是由物镜的数字孔径由前述已知显微镜的分辨能力是由物镜的数字孔径所决定的，而目镜只是起到放大作用。因此，对于所决定的，而目镜只是起到放大作用。因此，对于所决定的，而目镜只是起到放大作

35、用。因此，对于所决定的，而目镜只是起到放大作用。因此，对于物镜不能分辩出的细微结构，目镜放得再大，也仍物镜不能分辩出的细微结构，目镜放得再大，也仍物镜不能分辩出的细微结构，目镜放得再大，也仍物镜不能分辩出的细微结构，目镜放得再大，也仍然不能辨认。目镜有标准型和广视场型。按用途又然不能辨认。目镜有标准型和广视场型。按用途又然不能辨认。目镜有标准型和广视场型。按用途又然不能辨认。目镜有标准型和广视场型。按用途又分为观察目镜、照相目镜和取景目镜。照相目镜专分为观察目镜、照相目镜和取景目镜。照相目镜专分为观察目镜、照相目镜和取景目镜。照相目镜专分为观察目镜、照相目镜和取景目镜。照相目镜专供显微照相之用

36、，它是一种负焦目镜，眼点位于目供显微照相之用，它是一种负焦目镜，眼点位于目供显微照相之用，它是一种负焦目镜，眼点位于目供显微照相之用，它是一种负焦目镜，眼点位于目镜内，因而不能用于观察。它的特点是视场平坦，镜内，因而不能用于观察。它的特点是视场平坦，镜内，因而不能用于观察。它的特点是视场平坦，镜内，因而不能用于观察。它的特点是视场平坦，可校正物镜的残留色差，使投射到感光片（或可校正物镜的残留色差，使投射到感光片（或可校正物镜的残留色差，使投射到感光片（或可校正物镜的残留色差，使投射到感光片（或CCDCCD）上的图像四周与中心都尽可能在一个焦点平）上的图像四周与中心都尽可能在一个焦点平）上的图像

37、四周与中心都尽可能在一个焦点平）上的图像四周与中心都尽可能在一个焦点平面上。照相目镜用于显微照相，其放大率不高，一面上。照相目镜用于显微照相，其放大率不高，一面上。照相目镜用于显微照相，其放大率不高，一面上。照相目镜用于显微照相，其放大率不高，一般在般在般在般在2.52.56.76.7倍之间。照相目镜外侧或端面刻有倍之间。照相目镜外侧或端面刻有倍之间。照相目镜外侧或端面刻有倍之间。照相目镜外侧或端面刻有“ “PHOTOPHOTO” ”、“ “FKFK” ”、“ “NFKNFK” ”字样。字样。字样。字样。目镜与物镜的组合目镜与物镜的组合物镜放大倍数物镜放大倍数10104040100100物镜数

38、值孔径物镜数值孔径0.250.250.650.651.251.25有效放大倍数有效放大倍数125125250250325 325 650650625 625 12501250目镜放大倍数目镜放大倍数12.512.525258 8 16166 6 12.512.5 显微镜的有效放大率为所用物镜数值孔径的5001000倍。目镜与物镜组合前提是使放大倍数在有效放大率范围内。 在有效放大率前提下，要提高对物像细节的分辩能力和清晰度，必须使用高数值孔径的物镜和低倍目镜的组合。目镜和物镜的组合目镜和物镜的组合n n当所选目镜的放大倍数低于有效放大倍数当所选目镜的放大倍数低于有效放大倍数当所选目镜的放大倍数

39、低于有效放大倍数当所选目镜的放大倍数低于有效放大倍数时，会造成物镜本来可以辨认的细节因总时，会造成物镜本来可以辨认的细节因总时，会造成物镜本来可以辨认的细节因总时，会造成物镜本来可以辨认的细节因总的放大倍数太小而挤在一起，难以分辩。的放大倍数太小而挤在一起，难以分辩。的放大倍数太小而挤在一起，难以分辩。的放大倍数太小而挤在一起，难以分辩。n n当所选目镜的放大倍数高于有效放大倍数当所选目镜的放大倍数高于有效放大倍数当所选目镜的放大倍数高于有效放大倍数当所选目镜的放大倍数高于有效放大倍数时，所得放大倍数叫时，所得放大倍数叫时，所得放大倍数叫时，所得放大倍数叫“ “空的放大空的放大空的放大空的放大

40、” ”，影像，影像，影像，影像细节的分辩能力没有提高。细节的分辩能力没有提高。细节的分辩能力没有提高。细节的分辩能力没有提高。 在有效放大率前提下，要提高对物像细节的分在有效放大率前提下，要提高对物像细节的分在有效放大率前提下，要提高对物像细节的分在有效放大率前提下，要提高对物像细节的分辩能力和清晰度，必须使用辩能力和清晰度，必须使用辩能力和清晰度，必须使用辩能力和清晰度，必须使用高数值孔径的物镜高数值孔径的物镜高数值孔径的物镜高数值孔径的物镜和低倍目镜的组合和低倍目镜的组合和低倍目镜的组合和低倍目镜的组合。目镜和物镜的组合目镜和物镜的组合n n例如数值孔径为例如数值孔径为例如数值孔径为例如数

41、值孔径为1.31.3的物镜（标记为的物镜（标记为的物镜（标记为的物镜（标记为100/1.3100/1.3）与放大倍数为）与放大倍数为）与放大倍数为）与放大倍数为4 4的目镜组合，的目镜组合，的目镜组合，的目镜组合，总放大倍数为总放大倍数为总放大倍数为总放大倍数为400400，若入射光为绿色光，若入射光为绿色光，若入射光为绿色光，若入射光为绿色光（550550纳米），分辩力为纳米），分辩力为纳米），分辩力为纳米），分辩力为270270纳米。纳米。纳米。纳米。n n数值孔径为数值孔径为数值孔径为数值孔径为0.650.65的物镜（标记为的物镜（标记为的物镜（标记为的物镜（标记为40/0.6540/0

42、.65）与放大倍数为）与放大倍数为）与放大倍数为）与放大倍数为1010的目镜组合，的目镜组合，的目镜组合，的目镜组合，总放大倍数为总放大倍数为总放大倍数为总放大倍数为400400， 550550纳米时分辩力纳米时分辩力纳米时分辩力纳米时分辩力为为为为500500纳米。纳米。纳米。纳米。n n 两种组合结果，显然第一种能提高物像两种组合结果，显然第一种能提高物像两种组合结果，显然第一种能提高物像两种组合结果，显然第一种能提高物像分辩力。分辩力。分辩力。分辩力。不同照像目镜不同照像目镜/物镜组合的效果物镜组合的效果照像目镜的选择：在物镜的有效放大倍率内，尽量优选低倍照像目镜。聚光器聚光器(cond

43、enser)n n聚光器的主要作用是使光线集中于标本，聚光器的主要作用是使光线集中于标本，配合物镜提高物像的分辩力。配合物镜提高物像的分辩力。聚光镜聚光镜：聚光镜由一至数片透镜组成。：聚光镜由一至数片透镜组成。聚光镜有聚光作用，它的数值孔径在聚光镜有聚光作用，它的数值孔径在0.251.40不等，聚光镜的数值孔径不等，聚光镜的数值孔径受孔径光阑控制。受孔径光阑控制。孔径光阑孔径光阑：孔径光阑的开放与收缩，：孔径光阑的开放与收缩，调节聚光镜数值孔径的大小，使图像调节聚光镜数值孔径的大小，使图像分辩力、反差和焦深处在最佳状态。分辩力、反差和焦深处在最佳状态。n n显微镜的功能主要取决于物镜的性能，而

44、显微镜的功能主要取决于物镜的性能，而物镜的性能又取决于物镜的数值孔径，物物镜的性能又取决于物镜的数值孔径，物镜的数值孔径与聚光镜的数值孔径相关，镜的数值孔径与聚光镜的数值孔径相关，两者孔径相等时，物镜分辨力最高。但显两者孔径相等时，物镜分辨力最高。但显微摄影不同于一般摄影，其最大的区别是微摄影不同于一般摄影，其最大的区别是影像反差小、焦深浅，这两点可随孔径光影像反差小、焦深浅，这两点可随孔径光阑缩小而提高。孔径光阑小于物镜的数值阑缩小而提高。孔径光阑小于物镜的数值孔径时，物镜的分辩力的亮度降低，但影孔径时，物镜的分辩力的亮度降低，但影像反差和焦点深度提高，使影像更加清晰。像反差和焦点深度提高，

45、使影像更加清晰。所以，在不过多降低分辩力前提下，要将所以，在不过多降低分辩力前提下，要将孔径光阑数值调到所用物镜数值孔径的孔径光阑数值调到所用物镜数值孔径的6080。 物镜有效数值孔径物镜有效数值孔径(物镜物镜NA+聚光镜聚光镜NA)/2注注注注 意意意意若显微摄影的照明光线过强，可以改变灯的亮度（降若显微摄影的照明光线过强，可以改变灯的亮度（降若显微摄影的照明光线过强，可以改变灯的亮度（降若显微摄影的照明光线过强，可以改变灯的亮度（降低电压），用深色滤光片或增加滤光片的数目。千万低电压），用深色滤光片或增加滤光片的数目。千万低电压），用深色滤光片或增加滤光片的数目。千万低电压），用深色滤光片

46、或增加滤光片的数目。千万不要改变聚光器的位置或缩小光圈，否则会降低显微不要改变聚光器的位置或缩小光圈，否则会降低显微不要改变聚光器的位置或缩小光圈，否则会降低显微不要改变聚光器的位置或缩小光圈，否则会降低显微镜的分辩力。镜的分辩力。镜的分辩力。镜的分辩力。若被检物为活体标本或未染色标本时，应缩小孔径光若被检物为活体标本或未染色标本时，应缩小孔径光若被检物为活体标本或未染色标本时，应缩小孔径光若被检物为活体标本或未染色标本时，应缩小孔径光阑，加强明暗对比。但为了防止物镜的分辩力的降低，阑，加强明暗对比。但为了防止物镜的分辩力的降低，阑，加强明暗对比。但为了防止物镜的分辩力的降低，阑，加强明暗对比

47、。但为了防止物镜的分辩力的降低，必须加强照明光线的强度，但孔径光阑数值一般不能必须加强照明光线的强度，但孔径光阑数值一般不能必须加强照明光线的强度，但孔径光阑数值一般不能必须加强照明光线的强度，但孔径光阑数值一般不能小于物镜孔径光阑数值的小于物镜孔径光阑数值的小于物镜孔径光阑数值的小于物镜孔径光阑数值的6060。若聚光器外方没有刻度时，可以在标本调焦后，取下若聚光器外方没有刻度时，可以在标本调焦后，取下若聚光器外方没有刻度时，可以在标本调焦后，取下若聚光器外方没有刻度时，可以在标本调焦后，取下目镜，眼睛离目镜头目镜，眼睛离目镜头目镜，眼睛离目镜头目镜，眼睛离目镜头5 51010厘米，左眼观察镜

48、筒，边厘米，左眼观察镜筒，边厘米，左眼观察镜筒，边厘米，左眼观察镜筒，边看物镜的后焦点平面，边缓慢增大孔径光阑，至物镜看物镜的后焦点平面，边缓慢增大孔径光阑，至物镜看物镜的后焦点平面，边缓慢增大孔径光阑，至物镜看物镜的后焦点平面，边缓慢增大孔径光阑，至物镜后透镜呈一明亮园时再将孔径光阑适当缩小（估计其后透镜呈一明亮园时再将孔径光阑适当缩小（估计其后透镜呈一明亮园时再将孔径光阑适当缩小（估计其后透镜呈一明亮园时再将孔径光阑适当缩小（估计其为物镜孔径数值的为物镜孔径数值的为物镜孔径数值的为物镜孔径数值的2/32/3），然后放回目镜。），然后放回目镜。），然后放回目镜。），然后放回目镜。视场光阑视场

49、光阑n n 视场光阑位于镜座之中，用以控制照明光束的直径，它根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积。视场光阑过小，视野亮度不足，影像不清晰；视场光阑过大，光束直径超出孔径光阑，造成光线的乱反射，也影响影像的清晰度。n n一般观察时，应先用聚光器上的调中一般观察时，应先用聚光器上的调中螺旋把视场光阑调到视场中心位置，螺旋把视场光阑调到视场中心位置，然后让视场光阑多边形光阑处于视场然后让视场光阑多边形光阑处于视场的外切位。的外切位。n n显微摄影时，视场光阑收缩至取景框显微摄影时，视场光阑收缩至取景框边缘的外方（但不能接触取景框），边缘的外方（但不能接触取景框），此位可使图像反差得到改善。如果视此位

50、可使图像反差得到改善。如果视场光阑收缩得过于接近取景框时，则场光阑收缩得过于接近取景框时，则图像的四角将被切去。因为实际拍摄图像的四角将被切去。因为实际拍摄的视场范围要比取景框略大一些。的视场范围要比取景框略大一些。视场光阑的配合使用视场光阑的配合使用根据不同倍率物镜给予不同直径的光束；避免散射光，增加图像反差；适度：视场光阑像恰在取景框的外缘。过于接近或超过则会将图像的四角切掉。视场光阑配合使用视场光阑配合使用光学显微镜主要光学部件及性能n n透镜及其性能透镜及其性能n n显微镜的成像原理显微镜的成像原理n n影响成像的关键因素影响成像的关键因素相差相差n n主要光学部件及性能主要光学部件及

51、性能n n光学显微镜相关参数光学显微镜相关参数n n分辨率分辨率：显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，又称“鉴别率”。其计算公式是=/NA 式中(sigma )(sigma )为最小分辨距离；为射光线的波长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。n n放大率和有效放大放大率和有效放大：物像：物像经过物镜和目镜的两次放大，所以显微镜总的放大率是物镜放大率和目镜放大率的乘积,显微镜放大倍率的极限即有效放大倍率。n n焦深焦深：焦深为焦点深度的简称，即在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在

52、此平面的上下一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。焦深大, 可以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检物体的一薄层。n n视场直径视场直径：所看到的明亮的圆形范围叫视场，它的大小是由目镜里的视场光阑决定的。视场直径也称视场宽度，是指在显微镜下看到的圆形视场内所能容纳被检物体的实际范围。视场直径愈大，愈便于观察。n n覆盖差覆盖差：由于盖玻片的厚度不标准，光线从盖玻片进入空气产生折射后的光路发生了改变，从而产生了相差，这就是覆盖差.国际上规定，盖玻片的标准厚度为0.17mm，许可范围在0.16-0.18mm，在物镜的制造上已将此厚度范围的相差计算在内。物镜外壳上标的0.17

53、，即表明该物镜所要求的盖玻片的厚度。n n工作距离工作距离(WD)：工作距离也叫物距，即指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离。内内 容容n n光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n光学显微镜主要光学部件及性能光学显微镜主要光学部件及性能n n与显微摄影有关的基本光学概念与显微摄影有关的基本光学概念 n n显微摄影系统的基本构成显微摄影系统的基本构成n n显微摄影基本操作程序显微摄影基本操作程序n n影响显微成像质量的因素影响显微成像质量的因素折射和折射率折射和折射率n n折射：折射：折射：折射： 光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以

54、光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以直线传播。当光从一种介质斜射入另一种介质时，直线传播。当光从一种介质斜射入另一种介质时，直线传播。当光从一种介质斜射入另一种介质时，直线传播。当光从一种介质斜射入另一种介质时，传播方向发生变化，这种现像叫光的折射，这是由传播方向发生变化，这种现像叫光的折射，这是由传播方向发生变化，这种现像叫光的折射，这是由传播方向发生变化，这种现像叫光的折射，这是由于光线在不同介质的传播速度不同造成的。折射光于光线在不同介质的传播速度不同造成的。折射光于光线在不同介质的传播速度不同造成的。折射光于光线在不同介质的传播速度不同造成的。折

55、射光线与发线之间的夹角称折射角，同理入射光线与法线与发线之间的夹角称折射角，同理入射光线与法线与发线之间的夹角称折射角，同理入射光线与法线与发线之间的夹角称折射角，同理入射光线与法线之间的夹角称入射角。线之间的夹角称入射角。线之间的夹角称入射角。线之间的夹角称入射角。n n光的折射光的折射光的折射光的折射规律规律规律规律：光从空气斜射入水或其他介质中时，：光从空气斜射入水或其他介质中时，：光从空气斜射入水或其他介质中时，：光从空气斜射入水或其他介质中时，折射光线与入射光线、法线在同一折射光线与入射光线、法线在同一折射光线与入射光线、法线在同一折射光线与入射光线、法线在同一平面平面平面平面上，折

56、射光上，折射光上，折射光上，折射光线和入射光线分居法线两侧；折射角小于入射角；线和入射光线分居法线两侧；折射角小于入射角；线和入射光线分居法线两侧；折射角小于入射角；线和入射光线分居法线两侧；折射角小于入射角；入射角增大时，折射角也随着增大；当光线垂直射入射角增大时，折射角也随着增大；当光线垂直射入射角增大时，折射角也随着增大；当光线垂直射入射角增大时，折射角也随着增大；当光线垂直射向介质表面时，传播方向不变，在折射中光路可逆。向介质表面时，传播方向不变，在折射中光路可逆。向介质表面时，传播方向不变，在折射中光路可逆。向介质表面时，传播方向不变，在折射中光路可逆。折射和折射率折射和折射率n n

57、折射率折射率：是表示同一光线在两种（各向同性）：是表示同一光线在两种（各向同性）介质中光速比值的物理量。介质中光速比值的物理量。绝对折射率绝对折射率绝对折射率绝对折射率 光从光从光从光从真空真空真空真空射入介质发生折射时，入射射入介质发生折射时，入射射入介质发生折射时，入射射入介质发生折射时，入射角角角角i i与折射角与折射角与折射角与折射角r r的正弦之比的正弦之比的正弦之比的正弦之比n n叫做介质的叫做介质的叫做介质的叫做介质的“ “绝对折射绝对折射绝对折射绝对折射率率率率” ”，简称，简称，简称，简称“ “折射率折射率折射率折射率” ”。它表示光在介质中传播。它表示光在介质中传播。它表示

58、光在介质中传播。它表示光在介质中传播时，介质对光的一种特征。时，介质对光的一种特征。时，介质对光的一种特征。时，介质对光的一种特征。 相对折射率相对折射率相对折射率相对折射率 光从介质光从介质光从介质光从介质1 1射入介质射入介质射入介质射入介质2 2发生折射时，入发生折射时，入发生折射时，入发生折射时，入射角射角射角射角11与折射角与折射角与折射角与折射角22的正弦之比的正弦之比的正弦之比的正弦之比n21n21叫做介质叫做介质叫做介质叫做介质2 2相相相相对介质对介质对介质对介质1 1的折射率，即的折射率，即的折射率，即的折射率，即“ “相对折射率相对折射率相对折射率相对折射率” ”。因此，

59、。因此，。因此，。因此，“ “绝对折射率绝对折射率绝对折射率绝对折射率” ”可以看作介质相对真空的折射率。可以看作介质相对真空的折射率。可以看作介质相对真空的折射率。可以看作介质相对真空的折射率。色温与白平衡色温与白平衡n n黑体（black body）：黑体是一种可将落在其上的所有热量吸收，而无损的转化成为“光”向外辐射的理想物质，辐射光的颜色成分与该黑体所受热量值（温度）相对应。n n色温（colour temperature）：色温是表示光颜色视觉印像的物理量，是量度和计算光线颜色成分的尺度。光源发射的光的颜色与黑体在某一温度下辐射光色相同的光时，黑体的温度即为该光源的色温。色温用开氏温

60、标表示（Kelvin temperature scale. K）, K=+273.15。光源色温不同，光色亦不同。色温与白平衡色温与白平衡n n白平衡（White Balance）：物体颜色会因投射光线颜色产生改变，在不同光线条件下拍摄出的图像会有不同的色温。白平衡就是在特定光线条件下，按视野中图像特质，找出白色区域，默认为“白色”，并调整整个图像红绿蓝三色的强度，以修正照射光线所造成的误差，进而解决色彩还原和色调处理等一系列问题，使图像的色调恢复到原色状态。开氏温标示意图开氏温标示意图n n越低的数值表示越越低的数值表示越“ “红红” ”，越高的数值表示越，越高的数值表示越“ “蓝蓝” ”。

61、红和蓝并不是光线本身颜色，只是表明光谱中。红和蓝并不是光线本身颜色，只是表明光谱中的红或蓝成分较多。的红或蓝成分较多。不不同同光光源源环环境境的的色色温温表表内内 容容n n光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n光学显微镜主要光学部件及性能光学显微镜主要光学部件及性能n n与显微摄影有关的基本光学概念与显微摄影有关的基本光学概念 n n显微摄影系统的基本构成显微摄影系统的基本构成n n显微摄影基本操作程序显微摄影基本操作程序n n影响显微成像质量的因素影响显微成像质量的因素传统传统光学光学显微显微摄影摄影系统系统数码显微图像分析系统n n系统配置：系统配置：系统配置：系统配

62、置：n n万能研究级显微镜万能研究级显微镜万能研究级显微镜万能研究级显微镜n n专用摄影头专用摄影头专用摄影头专用摄影头n n定制高清晰度专用图像采集卡定制高清晰度专用图像采集卡定制高清晰度专用图像采集卡定制高清晰度专用图像采集卡n n进口原装摄影头专用标准进口原装摄影头专用标准进口原装摄影头专用标准进口原装摄影头专用标准C C接口接口接口接口n n高性能商用计算机高性能商用计算机高性能商用计算机高性能商用计算机n n专用图像分析软件专用图像分析软件专用图像分析软件专用图像分析软件显微图像分析系统显微图像分析系统显微荧光图像分析系统显微荧光图像分析系统成像质量要求成像质量要求nBF：追求分辨率

63、、色彩还原nFL: 追求敏感度n定量分析定量分析：图像可比性环境要求环境要求n无尘、无振动；n避免强光照射-影响对焦准确性；n房间照度不能过强，散射光、照明的眩光透过物镜、聚光镜等会反射到光路中，干扰正常成像；n无腐蚀性气、物；n防潮、防霉。软件基本功能要求软件基本功能要求n n可充分利用可充分利用可充分利用可充分利用WINDOWSWINDOWS系统资源，全面支系统资源，全面支系统资源，全面支系统资源，全面支持多种操作系统；持多种操作系统；持多种操作系统；持多种操作系统；n n可与显微镜联动或控制显微镜的相关功能；可与显微镜联动或控制显微镜的相关功能；可与显微镜联动或控制显微镜的相关功能；可与

64、显微镜联动或控制显微镜的相关功能；n n具有程序设计手段，可进行分析过程的全自具有程序设计手段，可进行分析过程的全自具有程序设计手段，可进行分析过程的全自具有程序设计手段，可进行分析过程的全自动设置；动设置；动设置；动设置；n n悔步、重复功能，方便寻找最佳处理路径；悔步、重复功能，方便寻找最佳处理路径；悔步、重复功能，方便寻找最佳处理路径；悔步、重复功能，方便寻找最佳处理路径；n n在线帮助；在线帮助；在线帮助；在线帮助；图像输入图像输入：n n支持视窗平台，支持模拟支持视窗平台，支持模拟CCD、数字、数字CCD、数字冷、数字冷CCD、数码相机、扫描仪、数码相机、扫描仪等图像摄入设备；支持多

65、种图像采集卡；等图像摄入设备；支持多种图像采集卡；支持支持JPEG、TIFF、BMP、GIF、PCX、DIB、EPS、WMF、TGA、WPG和部和部分非标准图像格式；支持分非标准图像格式；支持24/48位真彩位真彩色图像采集；符合色图像采集；符合GB15445、美国、美国ASTM112及及ISO9276标准标准。n n特征范围选取：特征范围选取： 具有多种图像特征的选取工具（矩形具有多种图像特征的选取工具（矩形框、圆形框和自画任意框等），不限制框、圆形框和自画任意框等），不限制多层彩色分割，图像数学运算。多层彩色分割，图像数学运算。n n专业图像处理与分析功能：专业图像处理与分析功能： 包括色

66、度调整，图像变形，数字形态包括色度调整，图像变形，数字形态学处理，图像增强，图像匹配，纹理分学处理，图像增强，图像匹配，纹理分析，特征识别等。析，特征识别等。 具有颗粒自动识别、粘连颗粒自动切具有颗粒自动识别、粘连颗粒自动切分功能，以利复杂图像的准确分析。分功能，以利复杂图像的准确分析。图像参数测量n n图像定量分析提供点、线、面积和角度测量四大类；提供多种的测量参数，如面积、周长、长轴、短轴、形态因子、异型指数、圆形度、平均灰度、平均光密度、积分光密度、绝对光密度、光密方差度、核浆比等。n n分析数据的可视化处理使分析结果与图像之间构成直接映射关系，便于观察分析。n n数值统计：数值统计：

67、自动对目标图像进行分割、计算、统计、归类等操作，并可自动编号，逐个显示被跟踪目标的全部参数；用户可自行设置测量参数或编辑用户所需测量参数，并可进行分类。n n白平衡：白平衡： 软件支持将不同时间、不同亮度、不同拍摄曝光设置下图片进行背景修正，以更科学的计算光密度相关的参数。n n免疫组化分析：免疫组化分析： 支持对免疫组化图片进行面积含量、数目含量以及和光密度有关的各类参数。n n图像定标和校正图像定标和校正： 可定标图像到任何测量单位，并以实际尺寸参数对目标进行分析计算或打印相应定倍图片。n n图像输出： 照片质量输出图像，输出图像的大小和位置可任意调整，并能按严格的标尺输出图像。n n荧光

68、图片合成与滤色：荧光图片合成与滤色： 将不同波段下的荧光图片合成一张图片或将合成图片滤色成不同波段的多张图片。n n景深扩展：景深扩展： 对同一视野下不同焦距下拍摄的多张图片进行景深扩展，处理成一张各区域都清晰的图片。n n大图拼接：大图拼接： 对多视野下拍摄的图片进行拼接，从而将一个视野下不能完全显示的目标处理成一张能够包含目标各个部分的完整的图片。n n结果输出和打印：结果输出和打印： 所有分析测量数据均可动态连接到WORD、EXCEL以及SPSS等软件作进一步处理；可直接把分析图表导入到WORD或剪贴板中进行处理。软件安装软件安装n n先安装常用软件程序，并运行检测整个电脑系统至系统正常

69、稳定n n安装图像采集卡、数据线连接电脑、显微镜和CCDn n按软件安装指导程序一步一步进行软件的安装（必要时启动显微镜）n n用标准标尺对显微镜各物镜图像进行标定内内 容容n n光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n光学显微镜主要光学部件及性能光学显微镜主要光学部件及性能n n与显微摄影有关的基本光学概念与显微摄影有关的基本光学概念 n n显微摄影系统的基本构成显微摄影系统的基本构成n n显微摄影基本操作程序显微摄影基本操作程序n n影响显微成像质量的因素影响显微成像质量的因素显微摄影基本操作程序显微摄影基本操作程序选定条件、清理光路相关部件选定条件、清理光路相关部件调整

70、光轴中心灯丝、聚光镜对中调整光轴中心灯丝、聚光镜对中调整聚光镜位置、电压、光阑、滤光片调整聚光镜位置、电压、光阑、滤光片达到最佳照度和色温达到最佳照度和色温调整载物台、焦距，选择摄影区域调整载物台、焦距，选择摄影区域拉动分光棱镜推杆，切换显微镜光路拉动分光棱镜推杆，切换显微镜光路n n对照电脑屏幕图像，调节显微镜微调旋对照电脑屏幕图像，调节显微镜微调旋钮，使显示图像达到清晰为止钮，使显示图像达到清晰为止n n利用软件功能键（白平衡、对比度、曝利用软件功能键（白平衡、对比度、曝光时间、增益等）进一步提高图像质量光时间、增益等）进一步提高图像质量n n摄影摄影n n加注标尺加注标尺n n存盘（最好

71、按所用软件定义格式储存）存盘（最好按所用软件定义格式储存）n n在没有中间放大倍率（放大镜）的前提下,照像目镜与其至照像装置的投射长度（厂家给定系数，一般为1）n n照像M物镜倍数照像目镜倍数n n软件给定标尺（最佳）显微图像放大倍数的表述显微图像放大倍数的表述内内 容容n n光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜的种类及结构特征n n光学显微镜主要光学部件及性能光学显微镜主要光学部件及性能n n与显微摄影有关的基本光学概念与显微摄影有关的基本光学概念 n n显微摄影系统的基本构成显微摄影系统的基本构成n n显微摄影基本操作程序显微摄影基本操作程序n n影响显微成像质量的因素影响显微成像质量的因素组化图像背景偏黄组化图像背景偏黄 解决方法：用淡青色滤光片滤除黄解决方法：用淡青色滤光片滤除黄光；若效果仍不满意或无淡青色滤光片，则适当调高电压光；若效果仍不满意或无淡青色滤光片，则适当调高电压(约高于约高于9V)，以图像分辨率不受影响、画面对比度适宜，以图像分辨率不受影响、画面对比度适宜为度。电压过高则背景偏青。为度。电压过高则背景偏青。光柱不正光柱不正视场光阑过小视场光阑过小