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1、化妆品微生物五项检验n菌落总数（Aerobic bacterial count）：化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数。菌落总数检验菌落总数的测定便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。 48小时出结果（30-300）：测试流程数据数据处理处理混混合合平平板板的制备的制备细细菌菌的的培培养养检检查查结结果果、观察与计数观察与计数供试液供试液的制备的制备书写检验书写检验记录单记录单n为便于区别化妆品中的
2、颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。TTC亦不可多加会抑制菌落生长n推荐了解：n人员培训能力掌握的检验重要指标。n有条件可做视具体样品测试结果。n在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方法的有效性。接种阳性菌计算回收率n未检出2天，检出3-4天n耐热大肠菌群 Thermotolerant coliform bacteria系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5培养24h48h能发酵乳糖产酸并产气。n该菌主要
3、来自人和温血动物粪便，可作为粪便污染指标来评价化妆品的卫生质量, 推断化妆品中有否污染肠道致病菌的可能。耐热大肠菌群检验操作流程产酸：黄色产酸：黄色产气：气泡产气：气泡产酸产气产酸产气书写检验书写检验记录单记录单不产酸不产气不产酸不产气增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备配培配培养基养基和稀和稀释液释液检查检查结果结果判断判断44.50.544.50.524-24-48h48h分离培养分离培养蛋蛋白白胨胨水水培养培养最终结最终结果判断果判断44.50.544.50.5 2424 2h2h靛基质靛基质特特征征菌菌落落361 361 1824h1824h双倍胆盐乳糖双倍胆盐乳糖EMBEMB琼脂
4、琼脂液面玫瑰红色液面玫瑰红色紫黑色紫黑色粪大肠菌群检查流程图粪大肠菌群检查流程图镜检镜检结果报告根据发酵乳糖产酸产气，平根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检质试验阳性，则可报告被检样品中检出耐热大肠菌群。样品中检出耐热大肠菌群。n未检出2天，检出4天n铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在 421条件下能生长。 铜绿假单胞菌检验操作流程该菌对人有致病力，可使伤处化
5、脓，引起败血症等。在自然界中分布甚广，空气、水、土壤最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液革兰染色、镜检革兰染色、镜检 氧化酶试验氧化酶试验 绿脓菌素试验绿脓菌素试验生化试验生化试验 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 4242生长试验生长试验 明胶液化试验明胶液化试验铜绿假单胞菌检查流程图铜绿假单胞菌检查流程图SCDLPSCDLP培养基培养基十六烷三甲基十六烷三甲基溴化铵琼脂溴化铵琼脂3613611824h1824h3613611824h1824h特征菌落特征菌
6、落灰白色、扁灰白色、扁平、周围有平、周围有水溶性蓝绿水溶性蓝绿色素色素镜检镜检十六烷三甲基溴化铵平板十六烷三甲基溴化铵平板SCDLPSCDLP培养基培养基黄绿色黄绿色菌膜菌膜灰白色灰白色湿润湿润氧化酶试验氧化酶试验粉红粉红/ /紫紫红色红色绿脓菌素试验绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验硝酸盐还原产气试验N N2 2明胶液化明胶液化试验试验明胶培养基（高层）明胶培养基（高层）明胶液化明胶液化被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还
7、原产气和42生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。结果报告未检出2天，检出3天金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。金黄色葡萄球菌检验操作流程该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。革兰染色、镜检革兰染色、镜检 生化试验生化试验: :血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试品的品的处理处理书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征
8、菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液361361361361SCDLPSCDLP培养基或培养基或7.5%NaCl7.5%NaCl肉汤肉汤242422h hBaird ParkersBaird Parkers或血琼脂或血琼脂2448h2448h特征菌落特征菌落金黄色葡萄球菌检查流程图金黄色葡萄球菌检查流程图镜检镜检耐盐分耐盐分Baird ParkersBaird Parkers平板平板灰灰/ /黑色黑色血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验血浆凝块血浆凝块液态血浆液态血浆甘露醇高盐琼脂凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被
9、检样品检出金黄色葡萄球菌。结果报告n 霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。n本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置282培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。（5-50）霉菌和酵母菌检验操作流程 革兰氏染色操作流程n设备：n 恒温培养设备n 高压灭菌器（验证）n 超净工作台（生物安全柜）n 均质器(旋涡混合器)n 天平（0.1g）n 显微镜（可要可不要无硬性要求）保证检验结果正确
10、常规洁净工作台设置目前大部分微生物实验室布局n人员操作方面：n 无菌操作，避免污染；n 一定专业技术或工作经验（招聘与外部审核时）n 相互协作；n 测试结果的证明。n日常维护：n 设备的计量与保证；n 超净台及时清洁与杀菌（操作前后半小时）；n 检验后材料的及时处理；n 环境卫生（沉降菌的检测每周）。油性样品如何处理稀释液生理盐水-极性溶剂、液体石蜡-非极性溶剂、吐温80-非离子型表面活性剂，分子一端是亲水基团，一端是亲油基团，常用作增溶剂和油/水乳化剂。决定了加入的顺序。问题2微生物许可检验项目问题3检验项目非特殊用途化妆品特殊用途化妆品育发 类染发类烫发类脱毛类美乳类健美类除臭类祛斑类防晒类菌落总数 耐热大肠菌群 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 霉菌和酵母菌 一个样品包装内有两个以上独立小包装或分隔（如粉饼、眼影、腮红等），且只有一个产品名称，原料成分不同的样品，应当分别检验相应项目；非独立小包装或无分隔部分，且各部分除着色剂以外的其他原料成分相同的样品，应当按说明书使用方法确定是否分别进行检验。重点 谢 谢 大 家！
