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1、实验四实验四细菌的分布与外界因素对细菌的影响细菌的分布与外界因素对细菌的影响 目的要求目的要求vv1 1了解细菌在自然界和正常人体的分布；了解细菌在自然界和正常人体的分布；vv2 2掌握物理因素、化学因素、生物因素对掌握物理因素、化学因素、生物因素对细菌的不利影响；细菌的不利影响；vv3 3理解消毒、灭菌及无菌操作的重要意义；理解消毒、灭菌及无菌操作的重要意义； 基本概念基本概念vv1、消消毒毒：用用物物理理或或化化学学方方法法杀死死物物体体上上病病原原微微生生物物的的方方法法。如如注注射射前前用用2%的的碘碘酒酒在在局局部部皮皮肤肤涂涂擦擦；用用75%的的酒酒精精棉棉球球擦擦拭拭体体温温表表
2、等等。用用于于消消毒毒的的化化学学药物物称称为消毒消毒剂。vv2、灭菌：用物理或化学方法清除或菌：用物理或化学方法清除或杀灭物体上所有微生物（包括病原微生物、物体上所有微生物（包括病原微生物、非病原微生物、繁殖体和非病原微生物、繁殖体和细菌的芽胞）菌的芽胞）的方法。的方法。vv3、无菌操作：防止微生物、无菌操作：防止微生物进入机体或物入机体或物体的操作方法，称无菌操作或无菌技体的操作方法，称无菌操作或无菌技术。如外科手如外科手术，细菌接种等。菌接种等。 实验材料实验材料vv菌种：金黄色葡萄球菌、大菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌；杆菌、枯草杆菌；vv培养基：普通平板、液体培养管培养基：
3、普通平板、液体培养管vv试剂：2%碘酒棉球、碘酒棉球、75%酒精棉球、酒精棉球、药敏敏纸片、无菌生理片、无菌生理盐水水vv器材：接种器材：接种环、酒精灯、酒精灯、镊子等子等实验内容与方法实验内容与方法一、细菌分布一、细菌分布（一）细菌在自然界的分布（一）细菌在自然界的分布（二）细菌在正常人体的分布（二）细菌在正常人体的分布二、外界因素对细菌的不利影响二、外界因素对细菌的不利影响（一）湿热对细菌的杀灭作用（一）湿热对细菌的杀灭作用（二）紫外线对细菌的杀灭作用（二）紫外线对细菌的杀灭作用（三）消毒剂对细菌的杀灭作用（三）消毒剂对细菌的杀灭作用（四）抗生素对细菌的杀灭作用（四）抗生素对细菌的杀灭作用
4、一、细菌的分布一、细菌的分布vv1 1、空气中的细菌检查（、空气中的细菌检查（1 1块平板）块平板）vv2 2、水（自来水）中细菌的检查（、水（自来水）中细菌的检查（1 1块平块平板）板）vv3 3、周围环境中细菌检查（、周围环境中细菌检查（1 1块平板）块平板）自由发挥（如笔、硬币）自由发挥（如笔、硬币）自由发挥（如笔、硬币）自由发挥（如笔、硬币）vv4 4、皮肤（手）上细菌的检查（结合化学、皮肤（手）上细菌的检查（结合化学消毒剂试验）（消毒剂试验）（1 1块平板）块平板）vv5 5、咽喉中细菌的检查（、咽喉中细菌的检查（1 1块平板）块平板）二、外界因素对细菌的影响二、外界因素对细菌的影响
5、（一）湿热对细菌的杀灭作用（一）湿热对细菌的杀灭作用（二）紫外线对细菌的杀灭作用（二）紫外线对细菌的杀灭作用（三）消毒剂对细菌的杀灭作用（三）消毒剂对细菌的杀灭作用（四）抗生素对细菌的杀灭作用（四）抗生素对细菌的杀灭作用（一）温度对细菌的影响（一）温度对细菌的影响vv热力杀菌的原理：是通过加热脱水干燥和热力杀菌的原理：是通过加热脱水干燥和大分子变性。可使菌体蛋白质变性或凝固，大分子变性。可使菌体蛋白质变性或凝固，酶失去活性，新陈代谢发生障碍，细菌因酶失去活性，新陈代谢发生障碍，细菌因而死亡。而死亡。目的要求：目的要求：目的要求：目的要求： 认识高温（煮沸法）对细菌繁殖体和芽胞的作用认识高温（煮
6、沸法）对细菌繁殖体和芽胞的作用认识高温（煮沸法）对细菌繁殖体和芽胞的作用认识高温（煮沸法）对细菌繁殖体和芽胞的作用v材料：材料：材料：材料： 1 1 1 1、菌种：、菌种：、菌种：、菌种：枯草杆菌（有芽胞）枯草杆菌（有芽胞）枯草杆菌（有芽胞）枯草杆菌（有芽胞） 大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌 （无芽胞）（无芽胞）（无芽胞）（无芽胞） 2 2 2 2、肉汤培养基、水浴锅、肉汤培养基、水浴锅、肉汤培养基、水浴锅、肉汤培养基、水浴锅 实验方法方法vv检测对象：大象：大肠杆菌（或金黄色葡萄球菌）、杆菌（或金黄色葡萄球菌）、枯草杆菌枯草杆菌;vv步步骤：分：分别取上述两种取上述两种细菌，菌，设置置对照
7、照组后，后，分分别沸水浴沸水浴5-10min， 37培养培养24h，观察察结果。果。枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌金黄色葡金黄色葡金黄色葡金黄色葡菌球菌或菌球菌或菌球菌或菌球菌或大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌金黄色葡金黄色葡金黄色葡金黄色葡菌球菌或菌球菌或菌球菌或菌球菌或大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌100 100 100 100 10m 10m 10m 10m+ + + + + + +37373737培养培养培养培养24h24h24h24h后后后后37 24h枯枯枯枯草草草草杆杆杆杆菌菌菌菌枯枯枯枯草草草草杆杆杆杆菌菌菌菌大大大大肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌大大
8、大大肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌100100 5min5min100100 5min5min菌菌膜膜澄澄清清浑浊普通条件培养下普通条件培养下普通条件培养下普通条件培养下细细菌生菌生菌生菌生长长状况状况状况状况枯枯草草杆杆菌菌大大肠杆杆菌菌枯枯草草杆杆菌菌大大肠杆杆菌菌煮沸煮沸煮沸煮沸杀杀菌后菌后菌后菌后细细菌生菌生菌生菌生长长状况状况状况状况（二）紫外线对细菌的影响（二）紫外线对细菌的影响vv原理：紫外原理：紫外线可以可以诱发细菌菌DNA形成胸腺形成胸腺嘧啶二聚体，使二聚体，使细菌死亡。菌死亡。vv取有芽胞取有芽胞细菌（枯草杆菌）、无芽胞菌（枯草杆菌）、无芽胞细菌，菌，设置置对照后，以紫外照后，以紫外
9、线照射照射30min， 37培培养养24h，观察察结果。果。枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌枯草杆菌金黄色葡菌球金黄色葡菌球金黄色葡菌球金黄色葡菌球菌或大肠杆菌菌或大肠杆菌菌或大肠杆菌菌或大肠杆菌金黄色葡菌球金黄色葡菌球金黄色葡菌球金黄色葡菌球菌或大肠杆菌菌或大肠杆菌菌或大肠杆菌菌或大肠杆菌紫外线紫外线紫外线紫外线30min30min30min30min+ + + + + + +37373737培养培养培养培养24h24h24h24h后后后后接种大肠杆菌接种枯草杆菌班级、姓名/学号、大肠 枯草uv30培养箱紫外线杀菌的结果紫外线杀菌的结果（三）消毒（三）消毒剂对细菌的影
10、响菌的影响化化学学消消毒毒剂杀菌菌的的原原理理：使使微微生生物物蛋蛋白白质凝凝固固与与变性性，致致使使细菌菌代代谢发生生障障碍碍而而死死亡亡；干干扰微微生生物物酶系系统和和影影响响其其代代谢；损伤细胞胞膜膜：醇醇类、酚酚类、表表面面活活性性剂等等损伤细菌菌细胞胞膜膜，引引起起细胞胞膜膜的的渗渗透透性性改改变，导致致细菌菌死亡。死亡。 vv消毒消毒剂：2%碘酒棉球，碘酒棉球，75%酒精棉球。酒精棉球。vv方法：以碘酒（酒精棉球）消毒手指前后，方法：以碘酒（酒精棉球）消毒手指前后，分分别涂抹平板培养基，涂抹平板培养基， 37培养培养24h后，后，观察察结果。果。（四）抗生素对细菌的影响（药敏试验（
11、四）抗生素对细菌的影响（药敏试验（四）抗生素对细菌的影响（药敏试验（四）抗生素对细菌的影响（药敏试验 ）v原理原理影响影响细胞壁的合成：胞壁的合成：-内内酰胺胺类抗生素，如抗生素，如青霉青霉素、素、头孢曲松。曲松。影响影响细胞膜的功能胞膜的功能：多黏菌素、两性霉素多黏菌素、两性霉素B；影响蛋白影响蛋白质的合成：的合成：氨基糖苷氨基糖苷类、四、四环素素类、大、大环内内酯类。如。如庆大霉素大霉素为氨基糖苷氨基糖苷类。影响核酸代影响核酸代谢：喹诺酮类、利福霉素、利福霉素类、磺胺、磺胺类。 如丙氟如丙氟哌酸酸为第二代第二代喹诺酮类抗菌抗菌药；方方 法法v在超净工作台中或酒精灯旁，用无菌棉签或经酒精灯火
12、焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将菌液均匀涂布到平皿中的固体培养基表面。v然后用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压，使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果，要求药敏纸片均匀分布于培养基上，位置安排适中，防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm，可在平皿中央贴一片，外周等距离贴56片。记住每种药敏纸片的名称。v贴完纸片的平皿15分钟后再置于37温箱中培养1624小时，观察记录结果。以药敏纸片周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈，根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。药药敏敏敏敏纸纸片片片片vv庆大霉素、头孢曲松、青霉素、丙氟哌酸庆大霉素、头孢曲松、青霉素、
13、丙氟哌酸抑菌圈药敏试验结果判断药敏试验结果判断 药敏敏试验结果判定果判定标准准抑菌圈直径（毫米）敏感性抑菌圈直径（毫米）敏感性20mm极敏感极敏感15-20mm高敏感高敏感10-14mm中敏感中敏感10mm低敏感低敏感0不敏感不敏感葡葡萄萄球球菌菌大大肠杆杆菌菌 抗菌抗菌药物物中介中介敏感敏感vAMK9阿米卡星阿米卡星 30ug 14 15-16 17CLI 克林霉素克林霉素 2ug 14 15-20 21GEN庆大霉素大霉素 10ug 12 13-14 15OXA苯苯唑西林西林 1ug 10 11-12 13PEN青霉素青霉素 10U 28 - 29AMS舒巴坦舒巴坦 10/10ug 11 12-14 15AMP氨卞西林氨卞西林 10ug 13 14-16 17PIP哌拉西林拉西林 100ug 17 - 18FZN头孢唑碄 30ug 14 15-17 18CAZ头孢它定它定 30ug 14 15-17 18CIP环丙沙星丙沙星 5 ug 15 16-20 21ATM氨曲南氨曲南 30ug 15 16-21 22FRX头孢呋辛辛 30ug 14 15-17 18IMP亚氨配南氨配南 10ug 13 14-15 16 VAN万古霉素万古霉素 30ug 15SXT复方新复方新诺明明1.25/23.75ug10 11-15 16常用药物抑菌圈直径大小来判断结果的标准，如下
