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1、3.23.2体外受精和早期胚胎培养体外受精和早期胚胎培养1目的：良种牛快速大量繁殖2精子采集精子获能卵子采集卵子体外培养体外受精早期体外胚胎培养本地牛（子宫）试管牛一、试管动物技术一、试管动物技术概念：概念： 通过人工操作使卵子和精子在通过人工操作使卵子和精子在体外体外条件下条件下成熟和受精成熟和受精，并通过，并通过培养发育培养发育为早期胚胎为早期胚胎后，再经过后，再经过移植移植产生后代产生后代的技术的技术3一、试管动物技术一、试管动物技术试管动物技术的三步试管动物技术的三步 第一步：卵子和精子的成熟和受精第一步：卵子和精子的成熟和受精 第二步：培养为早期胚胎第二步：培养为早期胚胎 第三步：胚
2、胎移植第三步：胚胎移植4阅读教材，思考：阅读教材，思考：卵母细胞采集的方法有哪些？采集的卵母细胞都能直接和获能的精子受精吗？卵母细胞采集的方法有哪些？采集的卵母细胞都能直接和获能的精子受精吗？2 2、收集精子的方法有哪些？、收集精子的方法有哪些？体外使精子获能的方法有哪些？体外使精子获能的方法有哪些？3 3、一般在什么溶液中完成受精过程？、一般在什么溶液中完成受精过程？4 4、5 5、发育培养液的成分有哪些？胚胎早期培养的目的？、发育培养液的成分有哪些？胚胎早期培养的目的？1 1、教材教材7272页图页图3-143-14中，卵母细胞培养的目的？中，卵母细胞培养的目的？ 精子离心处理的目的？精子
3、离心处理的目的？（培养成熟，至减（培养成熟，至减中期）中期）（分离精子，便于获能处理）（分离精子，便于获能处理）5二、试管动物技术的过程二、试管动物技术的过程1、体外受精、体外受精卵母细胞的采集和培养卵母细胞的采集和培养采集方法：采集方法：采集方法：采集方法：超数排卵超数排卵超数排卵超数排卵: :用促性腺激素处理，从输卵管中冲取卵子。用促性腺激素处理，从输卵管中冲取卵子。用促性腺激素处理，从输卵管中冲取卵子。用促性腺激素处理，从输卵管中冲取卵子。注意：卵子能注意：卵子能注意：卵子能注意：卵子能直接直接直接直接与获能的精子在体外受精。与获能的精子在体外受精。与获能的精子在体外受精。与获能的精子在
4、体外受精。常用对象：实验动物如小鼠、兔，以及家畜猪、羊等常用对象：实验动物如小鼠、兔，以及家畜猪、羊等注意：要在体外经注意：要在体外经注意：要在体外经注意：要在体外经人工培养成熟人工培养成熟人工培养成熟人工培养成熟后，才能与精子结合完成受精。后，才能与精子结合完成受精。后，才能与精子结合完成受精。后，才能与精子结合完成受精。刚屠宰母畜的卵巢中取卵或活体动物卵巢中取卵。刚屠宰母畜的卵巢中取卵或活体动物卵巢中取卵。刚屠宰母畜的卵巢中取卵或活体动物卵巢中取卵。刚屠宰母畜的卵巢中取卵或活体动物卵巢中取卵。常用对象：大家畜或大型动物，如牛等常用对象：大家畜或大型动物，如牛等61、体外受精、体外受精精子的
5、采集和获能精子的采集和获能收集的方法：收集的方法：收集的方法：收集的方法：获能的方法：获能的方法：获能的方法：获能的方法：假阴道法、手握法、电刺激法假阴道法、手握法、电刺激法假阴道法、手握法、电刺激法假阴道法、手握法、电刺激法培养法培养法培养法培养法: : : :化学诱导法化学诱导法化学诱导法化学诱导法: : : :如：啮齿动物、家兔和猪等如：啮齿动物、家兔和猪等如：啮齿动物、家兔和猪等如：啮齿动物、家兔和猪等如：牛、羊等家畜如：牛、羊等家畜如：牛、羊等家畜如：牛、羊等家畜放入人工配制的获能液中放入人工配制的获能液中放入人工配制的获能液中放入人工配制的获能液中放在一定浓度的肝素或钙离子载体放在
6、一定浓度的肝素或钙离子载体放在一定浓度的肝素或钙离子载体放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187A23187A23187A23187溶液中溶液中溶液中溶液中7卵巢卵巢卵巢卵巢卵母卵母卵母卵母细胞细胞细胞细胞新鲜或解冻新鲜或解冻新鲜或解冻新鲜或解冻的精液的精液的精液的精液卵母细卵母细卵母细卵母细胞培养胞培养胞培养胞培养精子离精子离精子离精子离心处理心处理心处理心处理MMMM期卵母期卵母期卵母期卵母细胞细胞细胞细胞精子获能处理精子获能处理精子获能处理精子获能处理获能精子获能精子获能精子获能精子体外受精体外受精体外受精体外受精受精卵培养受精卵培养受精卵培养受精卵培养在获能溶液或专用受精在获能溶液或
7、专用受精在获能溶液或专用受精在获能溶液或专用受精溶液中完成受精过程溶液中完成受精过程溶液中完成受精过程溶液中完成受精过程受精受精受精受精受精标志：透明带与卵细胞膜受精标志：透明带与卵细胞膜之间观察到两个极体之间观察到两个极体82 2 2 2、胚胎的早期培养、胚胎的早期培养、胚胎的早期培养、胚胎的早期培养培养液成分：培养液成分：培养液成分：培养液成分：早期培养的目的：早期培养的目的：两盐、两素、两酸、血清等两盐、两素、两酸、血清等两盐、两素、两酸、血清等两盐、两素、两酸、血清等检查受精状况和受精卵的发育能力检查受精状况和受精卵的发育能力9牛、羊：桑椹胚或囊胚阶段牛、羊：桑椹胚或囊胚阶段牛、羊：桑
8、椹胚或囊胚阶段牛、羊：桑椹胚或囊胚阶段试管婴儿：试管婴儿：试管婴儿：试管婴儿：8-168-168-168-16个细胞阶段个细胞阶段个细胞阶段个细胞阶段胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。3、胚胎移植、胚胎移植不同动物胚胎移植时间不同。不同动物胚胎移植时间不同。不同动物胚胎移植时间不同。不同动物胚胎移植时间不同。10体外受精体外受精早期胚胎培养早期胚胎培养卵母细胞的卵母细胞的采集采集精子的获取精子的获取
9、受精：受精：条件：条件：培养液成分：培养液成分：假阴道法假阴道法手握法手握法电刺激法电刺激法方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从输卵方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从输卵 管中冲管中冲取卵子取卵子方法二：从屠宰母畜卵巢中采集方法二：从屠宰母畜卵巢中采集 方法三：直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞方法三：直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞受精卵在发育培养液中培养受精卵在发育培养液中培养 无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等血清等 获能的精子获能的精子 培养成熟的卵子培养成熟的卵子 完成受精完成受精课内小结课内小结11有性
10、生殖 无性生殖 核移植技术、胚胎移植遵循 不遵循体外受精体外受精胚胎移植胚胎移植 试管动物 克隆动物生殖方式技术手段遗传物质遗传规律比较试管动物和克隆动物比较试管动物和克隆动物来自2个个体 主要来自核供体 12巩固练习巩固练习巩固练习巩固练习1 1 1 1、下列关于试管动物技术的叙述正确的是：、下列关于试管动物技术的叙述正确的是：、下列关于试管动物技术的叙述正确的是：、下列关于试管动物技术的叙述正确的是：A A A A、应用该技术繁育后代的过程属于无性繁殖类型、应用该技术繁育后代的过程属于无性繁殖类型、应用该技术繁育后代的过程属于无性繁殖类型、应用该技术繁育后代的过程属于无性繁殖类型B B B
11、 B、应用该技术繁育后代的过程属于有性繁殖类型、应用该技术繁育后代的过程属于有性繁殖类型、应用该技术繁育后代的过程属于有性繁殖类型、应用该技术繁育后代的过程属于有性繁殖类型C C C C、试管动物技术是利用体细胞繁育后代的技术、试管动物技术是利用体细胞繁育后代的技术、试管动物技术是利用体细胞繁育后代的技术、试管动物技术是利用体细胞繁育后代的技术D D D D、试管动物技术培育动物过程全部在体外进行、试管动物技术培育动物过程全部在体外进行、试管动物技术培育动物过程全部在体外进行、试管动物技术培育动物过程全部在体外进行B B132 、 哺乳动物体外受精的过程是哺乳动物体外受精的过程是 () 卵母细
12、胞的采集卵母细胞的采集精子的采集精子的采集 卵母细胞的人工培养卵母细胞的人工培养精子的获能处理精子的获能处理 精子与成熟的卵子在受精溶液中共同培养精子与成熟的卵子在受精溶液中共同培养 用用CaCl2处理精子处理精子用一定浓度的肝素溶液处理卵母细胞用一定浓度的肝素溶液处理卵母细胞 体外受精体外受精受精卵培养受精卵培养B143 3、胚胎工程是一、胚胎工程是一项综合性的合性的动物繁育技物繁育技术，可在畜牧，可在畜牧业和制和制药业等等领域域发挥重要作用。下重要作用。下图是是通通过胚胎工程培育胚胎工程培育试管牛的管牛的过程。程。(1)从良种母牛采集的卵母从良种母牛采集的卵母细胞，都需要胞，都需要进行体外
13、培养，其目的是行体外培养，其目的是 ；从良种公；从良种公牛采集的精子需牛采集的精子需_后才能后才能进行受精作用。行受精作用。(2)在体外培育受精卵在体外培育受精卵时，除了，除了给予一定量的予一定量的O2以以维持持细胞呼吸外，胞呼吸外，还需要提供需要提供 气体以气体以维持持 。(3)图中中过程程A称称为_， 它在胚胎工程中的它在胚胎工程中的意意义在于在于 。(4)研研制制能能够产生生人人类白白细胞胞介介素素的的牛牛乳乳腺腺生生物物反反应器器，需需将将目目的的基基因因导入入牛牛受受精精卵卵，最最 常常 用用 的的 导 入入 方方 法法 是是 ； 获 得得 转 基基 因因 母母 牛牛 后后 ， 如如 果果 即即说明目的基因已明目的基因已经表达。表达。使使卵母细胞成熟卵母细胞成熟获能能5%的的CO2培养液的培养液的pH胚胎移植胚胎移植提高提高优良母畜的繁殖力良母畜的繁殖力显微注射法微注射法牛奶中含有人牛奶中含有人类白白细胞介素胞介素15
