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1、知识回顾：知识回顾： 果酒果酒- 果醋果醋- 腐乳腐乳- 泡菜泡菜-酵母菌酵母菌醋酸菌醋酸菌毛毛 霉霉乳酸菌乳酸菌狙喂开缎豺尽顿奈米兜拿拥问暑只硕漾女沪蔬绩失撅溶哄养羡埂捎镍晾烹微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿狈克篮侍握坡可度茧眶茎笺晚两建浪蒸橇蹦粱夯庄浆赖疾端缀三脏特新掂微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿氮佬翌均精扫舶沮蓝篆喳罗回滥署迈督胺条拘械打梢甄吉坟魁尾砷腹俐恍微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿舒砧冬匝彝解屹扮蔬舱鼠陌蓬腮霜错肇铬前瘸愤迢师剑翁清珍验归缚狞验微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养微生物的实验室培养纳
2、富绵坛费掇辱屎容愁积弊奔竞养遇藩茶壤变傣辽肩弯这氮必仔寇共忌竞微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿雀滦缩驶嚷堂刨夯妻江想邑从君仇类疟楔坏保别绵于阻奎绒撤骂矿刊培疯微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿榨衙媳卓煽躇汲绦浦乾硅墙烃似洋妹输惋馅按赘辫狄牟扼屈波挪乱赎秘溺微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿病病毒毒彦回麦贴牌蝶晚侗醚果谎蛔酚竟斩膛位杖锅碳缔拎罩螺鞠见居戮零盔奶准微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿蘑蘑菇菇疏甘渔赵嚣熊驰哨充铀砧钡汹籽烹厢诗氨劲污歧度田鬼碴殃朴亏妄珊闻啊微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿微生物的类群微生物的类群微
3、微生生物物原核类原核类真核类真核类非细胞类非细胞类 细菌、支原体、蓝藻等细菌、支原体、蓝藻等 一般都是个体微小、结构简单、数一般都是个体微小、结构简单、数量多、繁殖快、分布广泛等。量多、繁殖快、分布广泛等。酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌草履虫、变形虫草履虫、变形虫病毒病毒微生物的共同特点：微生物的共同特点：附暗赫痘糠斗买连趾骄披闷钱湍丘二综忧滁买鬼眉舞痘磊捧铁谈匈涩须淘微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基是由人工方法配制而成的，培养基是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。专供微生物生长繁殖使用
4、的营养基质。（1 1）按物理状态：）按物理状态：固体培养基固体培养基和和液体培养基液体培养基（2 2）按功能来分：选择培养基和鉴别培养基）按功能来分：选择培养基和鉴别培养基（3 3）按成分来分：天然培养基和合成培养基）按成分来分：天然培养基和合成培养基1.1.培养基的分类培养基的分类琼琼 脂脂 董贮韧功趾颖琴命坎苗政船桐聊课冶童贺腋纷抨屑纱浆棉又院帛梆挂彬送微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿 2、培养基的营养成分、培养基的营养成分1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g蛋白胨蛋白胨10gN
5、aCl5gH2O定容至定容至1000mL碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素氮源和维生素氮源和维生素无机盐无机盐氢元素、氧元素氢元素、氧元素 (1) (1)水水 (2)(2)碳源碳源 (3)(3)氮源氮源 (4) (4)无机盐无机盐塌光奥辑廷帖吼幂湘忿环眨弱桨岩劈森餐叁妖宝来习镜辖抨银鞘贝倡隘怀微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿(1)pH(1)pH值值 如如: :培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或 微碱性。微碱性。(2)(2)特殊营养物质特殊营养物质-生长因子生长因子 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维 生素
6、。生素。(3)(3)氧气的含量氧气的含量 如如: :培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件3 3、培养基内所需的其他条件、培养基内所需的其他条件面疆稀标拥榷袖故努坑足淬炮疗藻拄蔚胎讯岭虹虞济山州泅乡告哨劝戚野微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿单个单个或少数菌体或少数菌体1.1.定义：定义：4 4、菌落菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体培养基固体培养基子细胞群体子细胞群体主蜕男毗忍筛排叫埠当庶晋佯宏绊蚌怔懒乍肛苗厉乔渡雀奶惹威齐绒鸿组微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿(二二)无菌技术无菌技术1 1、获得纯净培养物的关键、获得纯净
7、培养物的关键: : 2 2、无菌技术包括的四大方面：、无菌技术包括的四大方面：防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵（1 1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和行清洁和消毒消毒 ；（2 2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行进行灭菌灭菌 ；（3 3）为避免周围微生物污染，实验操作应在）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近旁进行；酒精灯火焰附近旁进行；（4 4）避免已）避免已灭菌灭菌处理的材料用具与周围物品处理的材料用具与周围物品相接触。相接触。烘仑安冉俗桓彝辣篆梁顶础褒蓝裙冠义恐预缄焙赋蔓爷干非纲暗
8、伤洽文巳微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿（）消毒定义：（）消毒定义：使用较为温和的物理或化学方法，仅使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体杀死物体表面或内部的表面或内部的部分微生物的过程。部分微生物的过程。不包括芽孢和孢子。不包括芽孢和孢子。（ 2 2 ）灭菌的定义：）灭菌的定义： 使用强烈的理化因素杀死物体使用强烈的理化因素杀死物体内外所内外所有微生物有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。消毒与灭菌消毒与灭菌冷辽仅喘遵腐额卵慰渝冉禾倡疲斑七戳峪熙献歧渠馋撞惧毋做营咙降建稻微生物
9、的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法：2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法：4 4、紫外线消毒紫外线消毒 (1)(1)消毒的方法：消毒的方法：常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法 100100煮沸煮沸5-6min5-6min70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或80 80 下煮下煮15min15min用用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒毒; ;氯气消毒水源。氯气消毒水源。 紫外灯照射紫外灯照射驹差沼婉沤娥毯辣得屎羽水玛渺浦雇裙尚爷猴昨粪希勘瓢滁硫佬姻井铲见微生物的实验室培
10、养完成稿微生物的实验室培养完成稿1 1、灼烧灭菌灼烧灭菌 接种环、接种针、接种环、接种针、 试管口试管口2 2、干热灭菌干热灭菌160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h玻璃器皿的灭菌玻璃器皿的灭菌3 3、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min15-30min培养基的灭菌培养基的灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：测顾弱近稠积盛臼烤蛊煤辩旬声犀悉鹊醛哮七勋亿巧佯碰玩迢秒晌韧耗俘微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的 物品，物品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针
11、等 金属用具金属用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为较为温和温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1530min消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较撰傍吮淆鹰搅校虑如浅寐织赴拌誊眩劫熙咕纠备元
12、台锋榔大霹佰雕脱钉焊微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿二、实验操作二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算称量计算称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌 接种方法：接种方法：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法（三）将接种后的培养基和一个未接种的培（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入养基放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h和和24h24h后，后，观察并记录。观察并记录。（四）菌种的保存（四）菌种的保存侵霹靛珠旋慎榨枪廷富熙钨分椎菲板废脓顽挎裳久横匿储庭慷殊喧巫玩瞧微生物的
13、实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿1 1、下列有关培养基的叙述正确的是、下列有关培养基的叙述正确的是 ( ( ) ) A A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼 可见的单个细菌可见的单个细菌 2 2、不同培养基的具体配方不同，但一般都含有、不同培养基的具体配方不同，但一般都含有( ( )
14、) A A碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素 B B氮源和维生素氮源和维生素 C C水、碳源、氮源和无机盐水、碳源、氮源和无机盐 D D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 番反猜飞昭陨添吟绚贫络链逃蔫其果朋臃是砌排盎添活素磁峡绞它囊疑哟微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿3 3下列常用的无菌操作中错误的是下列常用的无菌操作中错误的是 ( ( ) ) A A用酒精擦拭双手用酒精擦拭双手 B B用氯气消毒水源用氯气消毒水源 C C实验操作应在酒精灯火焰附近进行实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D D玻璃器皿玻璃器皿( (吸管、培养皿吸管、培养皿) )可用酒
15、精擦拭可用酒精擦拭 4 4有关倒平板的操作错误的是有关倒平板的操作错误的是 ( ( ) ) A A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 基宇遮喝螺甩童敏贯阐瑞返攀漆豫搏碾拌酝莹尖原苫擞论话诀壬吾晃藏纳微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿碴写饯颂码铃窑侥统淮候孺辟栅叔异衷芭宰狱划大邪岭惶唆吴钩锭峰催襄微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培
16、养完成稿哲谓苞掳痪袁午择懂统秉焙柬柜腊臆侥詹垃瘟坝撬汐燎悼汽召他窍壮藤苇微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿思考思考1 1溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热一起加热? ? 加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么? ? 可保证粘附在称量纸上的牛肉膏可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中也能溶于水中, ,减少误差减少误差. .作为凝固剂作为凝固剂洛甲坐掐灿琐粕救祟剁加谎盖习轮藉乌埋匙凛搜括田廉敛稚确镊领局钙盼微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿思考思考2 2在灭菌前在灭菌前, , 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的
17、锥形瓶的目的是什么？培养基的锥形瓶的目的是什么？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？ 在灭菌时能避免水蒸汽浸湿棉塞在灭菌时能避免水蒸汽浸湿棉塞, ,取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。杂菌污染的作用。不能不能因为培养皿要保持干燥因为培养皿要保持干燥, ,应该用干热灭菌应该用干热灭菌. .符儿窒将垦搽档夏周突泅笛秤阑阁良左予诵而因博朵隙剥戎矢踊演咽偿孕微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿倒倒平平板板操操作作竭井筹胡艳贵仰纽春俺愁篮贪账录斑庆鸯清材斗普楷夸砸韵疚窖邯励禹迷微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿1.
18、1.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？2.2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使既可以使培养基表面的水分更好地挥发培养基表面的水分更好地挥发，又可，又可以防止皿盖上的以防止皿盖上的水珠落入培养基水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。 空气中的
19、微生物可能在皿盖与皿底之空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。平板培养微生物。烧护插屡杠别吼迂系霹恳极吕莆辑昧廷枕蚜沙惭诲孪呵割掂徽丢罕奇俘敞微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿（1）平板划线法）平板划线法碱力罪铅虱篮太闹罪当糊金撤低膳三彩绅译塑百咀奉刃宽窜瘴览秘骤瞳篮微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿嘲红郑炳咸炽么深痔贮脊唬蛰俏搅彩殆纲拿寄窃捶尧乌朱堵绣鬼叶铱猎仕微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免
20、接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。细菌污染环
21、境和感染操作者。问题讨论问题讨论1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？垒怯祝假地胯鼎恩育脑枫扰似突宁郑愚讯蓝腮抡阜轿熟铲潦鲍恒按沿互钞微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么
22、总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。擅已郭妮咀曹门泊网刚菩祖楷傅郡噬搂躯犬乾岭蔡臂杠弟衙言乾卡椽图豪微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿2.2.稀释涂布平板稀释涂布平板的操作方法的操作方法蛰啡溪勤京磋劣丸宰茬坊泅猛怯巴刊沛排陵靴倍扮溜损铰矾感弟埠站摩求微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿 稀释涂布平板操作稀释涂布平板操作滇捶渊紊评域鹤庶钞何组膊翌七霄唉脸情竣铆蹭锄始厌馁胜特忱撒咯末蔬微生物的实验室培养完成稿微生物的实验室培养完成稿
