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1、课题课题33酵母细胞的固定酵母细胞的固定化化温故知新温故知新：1 1、洗衣粉中添加洗衣粉中添加_，可以可以更有效地清除更有效地清除顽渍。常用的。常用的酶制制剂有有_四四类。2 2、影响影响酶活性的因素有活性的因素有_、_和和_。酶制制剂存在的缺陷：存在的缺陷：11、通常、通常对强酸酸、强碱、高温和碱、高温和有机溶有机溶剂等条件非常敏感，容易失等条件非常敏感，容易失活；活；22、溶液中的、溶液中的酶很很难回收，不能回收，不能被再次利用，提高了生被再次利用，提高了生产成本；成本；33、反、反应后会混在后会混在产物中，可能物中，可能影响影响产品品质量。量。 如果你是工程技如果你是工程技术人人员，你，
2、你如何解决如何解决这个个问题？ 阅读阅读P49-50P49-50，并思考：，并思考：1 1、解决酶应用中存在问题的方法是？、解决酶应用中存在问题的方法是？2 2、这种方法的优点是什么？、这种方法的优点是什么？3 3、什么是高果糖浆？使用它有何好处、什么是高果糖浆？使用它有何好处？4 4、生产高果糖浆需要什么酶？其作用、生产高果糖浆需要什么酶？其作用是什么？这种酶有何特点？是什么？这种酶有何特点？5 5、了解高果糖浆生产过程。、了解高果糖浆生产过程。一、固定化酶的应用实例一、固定化酶的应用实例1 1、固定化酶技术。即将酶固定在、固定化酶技术。即将酶固定在一定空间内的技术（如固定在不溶一定空间内的
3、技术（如固定在不溶于水的载体上）。于水的载体上）。2 2、固定化酶技术的优点：、固定化酶技术的优点：（1 1）使酶既能与反应物接触，又）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；能与产物分离；（2 2）固定在载体上的酶可以被反）固定在载体上的酶可以被反复利用。复利用。3 3、高果糖浆是果糖含量为、高果糖浆是果糖含量为42%42%左右左右的糖浆。作为蔗糖的替代品，高果的糖浆。作为蔗糖的替代品，高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖尿病、龋齿和心血管病，对人的健尿病、龋齿和心血管病，对人的健康有利。康有利。你能写出果糖的分子式吗你能写出果糖的分子式吗? ?它属于什么糖它属于什
4、么糖? ?4 4、生产高果糖浆需要、生产高果糖浆需要葡萄糖异构葡萄糖异构酶酶；其作用是将葡萄糖转化为果；其作用是将葡萄糖转化为果糖；这种酶稳定性好，可持续发糖；这种酶稳定性好，可持续发挥作用。挥作用。5 5、固定化酶技术生产高果糖浆的图示：、固定化酶技术生产高果糖浆的图示：注意反应柱的注意反应柱的各部分名称。各部分名称。你能说出反应你能说出反应柱的优点吗？柱的优点吗？反应柱能连续使用半年，大大反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高果糖的降低了生产成本，提高果糖的产量和质量。产量和质量。优点：优点：练习：练习：1 1、下列说法不正确的是（、下列说法不正确的是（ ）A A、葡萄糖与固定化葡
5、萄糖异构酶接触，、葡萄糖与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成的是果糖转化成的是果糖B B、从固定化酶反应柱下端流出的是果、从固定化酶反应柱下端流出的是果糖糖C C、高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖尿病、龋齿和心血管病糖尿病、龋齿和心血管病D D、酶溶解于葡萄糖溶液，可以从糖浆、酶溶解于葡萄糖溶液，可以从糖浆中回收中回收D2 2、研究认为，用固定化酶技术处理污、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中成制剂，可以用来降
6、解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（其作用不需要适宜的（ ）A A、温度、温度 B B、PHPHC C、水分、水分 D D、营养、营养D3 3、目前，日用化工厂大量生产的、目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自酶制剂，其中的酶大都来自A A、化学合成、化学合成 B B、动物体内、动物体内 C C、植物体内、植物体内 D D、微生物体内、微生物体内 D在生在生产实际中使用固定化中使用固定化酶技技术有无不足有无不足? ?如有不足如有不足, ,怎么怎么办? ?有。一种酶只能催化一种化学有。一种酶只能催化一种化学反应，而在生
7、产实际中很多产反应，而在生产实际中很多产物的形成都通过一系列的酶促物的形成都通过一系列的酶促反应才能进行，所以操作比较反应才能进行，所以操作比较麻烦。麻烦。可采用固定化细胞技术。可采用固定化细胞技术。二、固定化细胞技术二、固定化细胞技术1 1、概念：、概念：利用物理或化学方法将利用物理或化学方法将细胞固胞固定在一定空定在一定空间的技的技术。细胞中含有一系列酶，在细胞细胞中含有一系列酶，在细胞正常生命活动的过程中，通过正常生命活动的过程中，通过代谢产生所需要的代谢产物。代谢产生所需要的代谢产物。阅读阅读P50P50：思考第二段的问题：思考第二段的问题2.2.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化
8、的方法将将酶（或（或细胞）包胞）包埋在埋在细微网格里微网格里将将酶（或（或细胞）胞）相互相互连接起来接起来将将酶（或（或细胞）吸胞）吸附在附在载体表面上体表面上包埋法包埋法化学结合法化学结合法吸附法吸附法酶和细胞固定方法的选择酶和细胞固定方法的选择酶适合采用化学适合采用化学结合和物合和物理吸附法固定理吸附法固定细胞适合采用包埋法固定胞适合采用包埋法固定（1 1）、方法）、方法（2 2）、原因）、原因细胞个大，胞个大，酶分子很小分子很小个体大的个体大的细胞胞难以被吸附或以被吸附或结合而合而个小的个小的酶容易从包埋的材料中漏出容易从包埋的材料中漏出3 3、固定化细胞常用的载体、固定化细胞常用的载体
9、常用的不溶于水的多孔性载体常用的不溶于水的多孔性载体有哪些？有哪些？明胶、琼脂糖、海藻酸钠、明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等 如果反如果反应底物是大分底物是大分子物子物质，能否用固定化，能否用固定化细胞技胞技术? ?为什么？什么？那那应该采用何种技采用何种技术? ?练习：练习：1.1.使用固定化细胞的优点是使用固定化细胞的优点是( )( )。A.A.能催化大分子物质的水解能催化大分子物质的水解 B.B.可催化一系列化学反应可催化一系列化学反应C.C.与反应物易接近与反应物易接近 D.D.有利于酶在细胞外发挥作用有利于酶在细胞外发挥作用B2.2.酶的固定方
10、法不包括酶的固定方法不包括( )( )。A.A.将酶吸附在固体表面上将酶吸附在固体表面上 B B将酶相互连接起来将酶相互连接起来C C将酶包埋在细微网格里将酶包埋在细微网格里 D D将酶制成固体酶制剂，如加酶洗将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶衣粉中的酶D3 3、如果反应物是大分子物质，采、如果反应物是大分子物质，采用那种方法催化受限制用那种方法催化受限制( )( )。A A直接使用酶直接使用酶 B B使用化学方法结合的酶使用化学方法结合的酶C C使用固定化细胞使用固定化细胞 D D使用物理吸附法固定的酶使用物理吸附法固定的酶C4 4、下列关于酶和细胞的固定叙述、下列关于酶和细胞的固定叙述
11、不正确的是不正确的是( )( )。A A酶分子很小，易采用包埋法酶分子很小，易采用包埋法 B B酶分子很小，易采用化学结合酶分子很小，易采用化学结合或物理吸附法固定的酶或物理吸附法固定的酶C C细胞个大，难被吸附或结合细胞个大，难被吸附或结合 D D细胞易采用包埋法固定细胞易采用包埋法固定A5. 5. 关于固定化酶的叙述不正确的是关于固定化酶的叙述不正确的是 ( )( )。A A既能与反应物接触，又能与反应既能与反应物接触，又能与反应 物分离物分离 B B固定在载体上的酶可被反复利用固定在载体上的酶可被反复利用C C可催化一系列反应可催化一系列反应 D D酶的活性和稳定性受到限制酶的活性和稳定
12、性受到限制C6 6、固定化细胞对酶的活性影响最小，、固定化细胞对酶的活性影响最小，根本原因是根本原因是( )( )。A A避免了细胞破碎、酶的提取纯化避免了细胞破碎、酶的提取纯化过程过程 B B固定化细胞在多种酶促反应中连固定化细胞在多种酶促反应中连续发挥作用续发挥作用C C促化反应结束后，能被吸收和重促化反应结束后，能被吸收和重复利用复利用D D细胞结构保证了各种酶在细胞内细胞结构保证了各种酶在细胞内化学反应中有效的发挥作用化学反应中有效的发挥作用D三、实验操作三、实验操作（一）制备固定化酵母细胞（一）制备固定化酵母细胞阅读P5051P5051思考下列思考下列问题：（1 1）制备过程包括哪几
13、个步骤？）制备过程包括哪几个步骤？（2 2）你认为哪个步骤的操作是最）你认为哪个步骤的操作是最重要的一环？重要的一环？1 1、酵母细胞的活化、酵母细胞的活化思考：思考： 关于酵母菌你有哪些知识？关于酵母菌你有哪些知识？ 什么是活化？什么是活化？ 怎样活化？怎样活化？ 应注意什么？应注意什么？活化：活化： 让处于休眠状态的微生物重让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态；新恢复正常的生活状态；本质：本质： 加快新陈代谢；加快新陈代谢；方法：方法： 加入适量的水。加入适量的水。 取取1g1g干酵母，放干酵母，放入入50ml50ml的小烧杯的小烧杯中，加入蒸馏水中，加入蒸馏水10ml10ml，用
14、玻璃棒，用玻璃棒搅拌，使酵母细搅拌，使酵母细胞混合均匀，成胞混合均匀，成糊状，放置糊状，放置1h1h左左右使其活化右使其活化思考：思考： 你认为酵母的活化操作有你认为酵母的活化操作有哪些注意事项？哪些注意事项？1 1、所用容器要大一些；、所用容器要大一些；2 2、要保证酵母菌的活性；、要保证酵母菌的活性；2 2、配制物质的量浓度为、配制物质的量浓度为0.05mol/L0.05mol/L的的CaClCaCl2 2溶液溶液称取无水称取无水CaClCaCl2 2 0.83g 0.83g。放入。放入200mL200mL的烧杯中，加入的烧杯中，加入150mL150mL的蒸的蒸馏水，使其充分溶解，待用。馏
15、水，使其充分溶解，待用。3 3、配制海藻酸钠溶液、配制海藻酸钠溶液操作：操作： 称取称取0.7g0.7g海藻酸钠，放入海藻酸钠，放入50mL50mL小烧杯中小烧杯中. .加人加人10mL10mL水，用酒精灯加水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至定容至10mL10mL。注意，。注意，加热时要用小加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止到海藻酸钠溶化为止 加热使海藻酸钠溶化是操作中加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要最重要的一环，涉及到实验的成败，的
16、一环，涉及到实验的成败，一定要按照教材的提示进行操作。一定要按照教材的提示进行操作。海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。数目少，影响实验效果。应当注意什么问题？应当注意什么问题？4 4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 将溶化好的海藻酸钠溶液冷将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的醉母细却至室温，加入已活化的醉母细胞，进行充分搅拌，使其混
17、合均胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。匀，再转移至注射器中。为什么海藻酸钠溶液要冷却为什么海藻酸钠溶液要冷却？5 5、固定化酵母细胞、固定化酵母细胞 以以恒定的速度缓慢地恒定的速度缓慢地将注射将注射器中的溶液器中的溶液滴滴加到配制好的加到配制好的CaClCaCl2 2溶液中，观察液滴在溶液中，观察液滴在CaClCaCl2 2溶溶液中形成凝胶珠的情形。将这些液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在凝胶珠在CaClCaCl2 2溶液中溶液中浸泡浸泡30 30 minmin左右。左右。 刚形成的凝胶珠应在刚形成的凝胶珠应在CaClCaCl2 2溶液中溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构
18、。浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。 检验凝胶珠的质量是否合格，可以检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法：使用下列方法： 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。作成功。 二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。的凝胶珠是成功的。这一阶段成功与否呢？怎样评价？这一阶段成功与否呢？怎样评价？观察凝胶珠的颜色和形状观察凝胶珠的
19、颜色和形状:如果制作的凝胶珠如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白颜色过浅、呈白色色，说明海藻酸钠的浓度，说明海藻酸钠的浓度偏低偏低，固，固定的酵母细胞数目定的酵母细胞数目较少较少；如果形成；如果形成的凝胶珠的凝胶珠不是圆形或椭圆形不是圆形或椭圆形，则说，则说明海藻酸钠的浓度偏明海藻酸钠的浓度偏高高，制作失败，制作失败，需要再作尝试。需要再作尝试。（二）用固定化细胞发酵（二）用固定化细胞发酵1 1、将固定好的酵母细胞、将固定好的酵母细胞( (凝胶凝胶珠珠) )用蒸馏水冲洗用蒸馏水冲洗2-32-3次。次。 2 2、 将将150mL150mL质量分数为质量分数为10%10%的的葡萄糖溶液转移到葡萄糖溶液转
20、移到200mL200mL的锥形的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于胞，置于2525下发酵下发酵24h24h。这一阶段成功与否呢？怎这一阶段成功与否呢？怎样评价？样评价？观察发酵的葡萄糖溶液；观察发酵的葡萄糖溶液；利用固定的酵母细胞发酵产生利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味。泡，同时会闻到酒味。还有其他方法吗？还有其他方法吗？请思考思考课后后练习P52P52类型类型优点优点不足不足直直接接使使用用酶酶催化效率高，低耗催化效率高，低耗能、低污染等。能、低污染等。对环境条件非常敏感，容对环境条件非常敏感，容易
21、失活；溶液中的酶很难易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影酶会混在产物中，可能影响产品质量。响产品质量。固固定定化化酶酶酶既能与反应物接酶既能与反应物接触，又能与产物分触，又能与产物分离，同时，固定在离，同时，固定在载体上的酶还可以载体上的酶还可以被反复利用。被反复利用。一种酶只能催化一种化学一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到系列的酶促反应才能得到的。的。固固定定化化细细胞胞成本低，操成本低，操作更容易。
22、作更容易。固定后的酶或细胞与固定后的酶或细胞与反应物不容易接近，反应物不容易接近，可能导致反应效果下可能导致反应效果下降等。降等。类类型型优点优点不足不足练习练习:1、制备固定化酵母细胞的过程中错误的、制备固定化酵母细胞的过程中错误的是（是（ ）A、取干酵母，加入蒸馏水，使其活化、取干酵母，加入蒸馏水，使其活化B、配制海藻酸钠时，加热用大火，直、配制海藻酸钠时，加热用大火，直到海藻酸钠溶化为止到海藻酸钠溶化为止C、将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室、将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的酵母细胞温，加入已活化的酵母细胞D、将凝胶珠在、将凝胶珠在CaCl2 2溶液中浸泡溶液中浸泡30 min左右左右B2、下列叙述不正确的是（、下列叙述不正确的是（ ）A、从操作角度来考虑，固定化细胞、从操作角度来考虑，固定化细胞比固定化酶容易比固定化酶容易B、固定化细胞比固定化酶对酶的活、固定化细胞比固定化酶对酶的活性影响更小性影响更小C、固定化细胞固定的是一种酶、固定化细胞固定的是一种酶D、将微生物的发酵过程变成连续的、将微生物的发酵过程变成连续的酶反应应选择固定化细胞技术酶反应应选择固定化细胞技术C谢谢大家谢谢大家
