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1、第第3 3章章高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法一、一、高效液相色谱高效液相色谱仪仪HPLC二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点feature of HPLC三、流程及主要部件三、流程及主要部件general process and main assembly of HPLC第一节第一节第一节第一节高效液相色谱的高效液相色谱的高效液相色谱的高效液相色谱的特点与仪器特点与仪器特点与仪器特点与仪器high performance liquid chromatographfeature and instrument of HPLC2024/7/23一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器 hi
2、gh performance liquid chromatograph2024/7/23液相色谱仪（液相色谱仪（2）2024/7/23液相色谱仪（液相色谱仪（3）2024/7/23液相色谱仪（液相色谱仪（4）2024/7/23二、二、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2024/7/23三、流程及主要部件三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC1.1.流程流程2024
3、/7/232.主要部件主要部件(1) 高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性2024/7/23(2)梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2024/7/23(3) 进样装置进样装置 流路中为高压力工作状
4、态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示：2024/7/23(4) 高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2024/7/23(5) 液相色谱检测器液相色谱检测器 a. 紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点：特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm 10mm ，容积 8L）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 2024
5、/7/23b. b. 光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展； 光光电电二二极极管管阵阵列列检检测测器器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。2024/7/232024/7/23光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器2024/7/23c. 示差折光检测器示差折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱； 偏转式、反射式和干涉型三种；2024/7/23示差折光检测器示差折光检测器2024/7/23d. 荧光检测器荧光检测器（fluorescence detector） 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；2024/7/23
