《岛津LC-20A型液相色谱系统的使用和维护》由会员分享，可在线阅读，更多相关《岛津LC-20A型液相色谱系统的使用和维护（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国药科大学 生命科学与技术学院 岛津岛津 LC-20A 型液相色谱系统的使用和维护型液相色谱系统的使用和维护 一、 系统配置一、 系统配置 系统组成：本系统由 2 个 LC-20AT 溶剂输送泵分为 A,B 泵、手动进样器、C18 填料色谱柱、SPD-20A 紫外可见检测器、N2010 工作站等组成。 二、 准备工作二、 准备工作 流动相准备：使用前应待检样品的检验方法准备所需的流动相（水使用纯净水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于 20mmol/L）用合适的 0.45m 滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，有机相用尼龙，水相用纤维素） ，超声脱气 20min 以上
2、待用。 1、 色谱柱准备：根据待检测样品的需要选用合适色谱柱，柱进出口方向应与流动相流向一致（检查柱上“FLOW”流向） 2、 样品溶液配置：配置样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制） ，用合适0.45m 的样品过滤器过滤后待用。如检测 中发现检测峰拖尾严重，可稀释后使用。严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。 3、 检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 三、 开机、参数设定及平衡系统三、 开机、参数设定及平衡系统 1、 接通电源，依次开启稳压电源、A 泵、B 泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。 2、 排气泡或更换流动相的操作方法 （操作时
3、虑头必须全部浸入流动相中， 否则，可能带入气泡。 更换流动相时， 须先把泵关掉， 等柱压为零再拿出虑头更换。 ） 2.1. 将 A/B 管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中； 2.2. 逆时针转动A/B泵的排液阀 180o，打开排液阀； 2.3. 按 A/B 泵的purge键，pump 指示灯亮，泵大约以 9.9ml/min 的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止； 2.4. 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。 1中国药科大学 生命科学与技术学院 2.5. 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 2.6. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱人口处拆下连接管，放入废液瓶中设流速为
4、 5 ml/min，按 pump 键停泵，重新接上柱并将流速重设定为规定值。 3、参数设定 3.1、波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需波长值，按Enter键确认。按 CE键退出到初始屏幕。 3.2、流速设定：在 A 泵显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需流速 （柱在线时流速一般不超过 1ml/min） ， 按Enter键确认。 按 CE键退出。 3.3、流动相比例设定：在 A 泵显示初始屏幕时，按conc 键，用数字键输入流动相 B 的浓度百分数，按Enter键确认。按 CE键退出。 3.4、梯度设定 3.4.1. 在 A 泵显示初始屏幕时，按edit键
5、，Enter键； 3.4.2. 用数字键输入时间，Enter键，重复按func键选择所需功能（FLOW 设定流速，BCNC 设定流动相 B 的浓度） ，按Enter键，用数字键输入设定值，按Enter键， 3.4.3 重复上一步设定其他时间步骤； 3.4.4 用数字键输入停止时间，重复按func键直至拼命显示 STOP，按Enter键确认。按 CE键退出。 4、平衡系统、平衡系统 4.1. 按N2010 色谱数据工作站操作规程打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数。 4.2 等度洗脱方式 4.2.1 按 A 泵的pump键，A、B 泵将同时启动，pump 指示灯亮。用检验方
6、法规定的流动相冲洗系统，一般最少需 6 倍柱体积的流动相。 4.2.2.检查各管路连接处是否漏夜，如漏夜应予以排除 4.2.3.观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过 1MPa。如超过则可初步判断 2中国药科大学 生命科学与技术学院 为柱前管路仍有气泡，进行气泡排除操作 4.2.4.观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min,噪声为0.001mV 时，可认为系统已经达到平衡状态，可以进样。 4.3.梯度洗脱方式 4.3.1 以检查方法规定的梯度初始条件，按 4.6.2 项下方法平衡系统。 4.3.2 在进样前运行 12 次空白梯度。方法：按 A 泵的run键，prom.run 指
7、示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prom.run 指示灯灭。 4.4 如果使用前色谱柱只能中保存的流动相为纯甲醇或纯乙睛， 而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。 4.5.如系统为正相或反相交换使用， 应先将所有管路用异丙醇清洗后再换新流动相使用。 四、检测四、检测 1、进样前按检测器zero键调零 2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。 3、每次进样量要基本一致，进样针里不可有气泡，如有，及时赶去。 4、在进样阀处于“Inject”状态时，插入进样器，迅速旋转至 load 状态，注入样品，旋回 inject 位置，进样结束。 5
8、、至样品检测结束，在 N2010 色谱工作站软件上计算结果。 五、清洗系统关机五、清洗系统关机 1、手动进样器清洗： 用注射器吸 20ml 超纯水后套上冲洗头，将冲洗头轻轻顶在进样口上（不宜用力过大，否则容易损坏进样口） ，使进样阀保持在 load 位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。 2、色谱柱清洗： 继续以分析中使用流动相冲洗 10 分钟以上，待基线平稳后关闭检样器，冲洗色谱柱。 3中国药科大学 生命科学与技术学院 3、如果流动相不含缓冲盐，可以用甲醇：水70：30（或用纯甲醇）直接冲洗30 分钟以上后把流速设为零，然后关闭所有仪器设备，顺序为：先退出工作站软件，再依次关闭系统控制器、检测器、自动进样器、柱温箱、泵； 4、如流动相含缓冲盐可先用纯水冲洗 2030 分钟后再用甲醇：水70：30（或用纯甲醇）冲洗 30 分钟以上，流速设零后再关闭仪器各部分电源，然后关闭总电源离开实验室。 4
