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1、放射性核素标记化合物放射性核素标记化合物Radionuclide Labeled CompoundsRadionuclide Labeled Compounds 放射性核素标记化合物是化合物放射性核素标记化合物是化合物分子中某一原子或某些原子被放射性分子中某一原子或某些原子被放射性核素原子所取代的化合物，是进行机核素原子所取代的化合物，是进行机体微量物质测定和示踪研究重要的分体微量物质测定和示踪研究重要的分析试剂和示踪剂。析试剂和示踪剂。要求要求：引入放射性核素后应该保持化引入放射性核素后应该保持化合物原有的理化、生物学性质不变合物原有的理化、生物学性质不变。 定义定义2标记物举例标记物举例3
2、 3H-TdRH-TdR，研究细胞增殖；研究细胞增殖；药物、蛋白、核酸的标记示踪研究；药物、蛋白、核酸的标记示踪研究；细胞标记：如细胞标记：如RBCRBC标记，将分离的标记，将分离的RBCRBC加入加入NaNa2 2 5151CrOCrO4 4约约1850-27751850-2775KBqKBq，室室温放置温放置3030分钟，以生理盐水洗涤，就分钟，以生理盐水洗涤，就得得5151Cr-RBCCr-RBC，可测血容量或研究可测血容量或研究RBCRBC寿寿命。命。3n一、放射性核素来源一、放射性核素来源 n 主要通过人工核反应，从主要通过人工核反应，从反应堆和加速器中产生，反应堆和加速器中产生，9
3、0%90%的放射性核素用于医学应用，的放射性核素用于医学应用，放射性核素必须经过必要的分放射性核素必须经过必要的分离纯化、等放射化学处理，经离纯化、等放射化学处理，经鉴定放射性核纯度，并测定比鉴定放射性核纯度，并测定比活度，才供使用。活度，才供使用。4二、标记化合物的概念二、标记化合物的概念：1、对放射性核素的选择：、对放射性核素的选择：半衰期；半衰期；射线类型和能量；射线类型和能量；价格、防护；价格、防护；标记难易程度；标记难易程度；同位素标记和非同位素标记。同位素标记和非同位素标记。5两个概念两个概念同位素标记：同位素标记： 选选用用化化合合物物中中原原有有元元素素的的同同位位素素标标记：
4、如记：如1414C C、3 3H H标记。标记。非同位素标记：非同位素标记： 采用非原化合物中所含元素的放射采用非原化合物中所含元素的放射性核素，进行标记，如蛋白质用性核素，进行标记，如蛋白质用131131I I或或125125I I标记。标记。 须严格控制标记方法使生物学行为须严格控制标记方法使生物学行为不改变或改变不大，方可用于示踪。不改变或改变不大，方可用于示踪。 62 2、标记位置及命名、标记位置及命名： 标标记记化化合合物物命命名名，通通常常先先指指出出标标记记部部位位再再指指出出标标记记核核素素，最最后后列列出出化化合合物物名名称称，三三部部分分中中以以二二短短横横线相联，如：线相
5、联，如：1-1-1414C-C-醋酸。醋酸。定位标记（符号定位标记（符号S S）1-1-1414C-C-醋酸醋酸 CHCH3 31414C00HC00H2-2-1414C-C-醋酸醋酸 1414CHCH3 3COOHCOOH二者示踪基团不同，合成路线不同。二者示踪基团不同，合成路线不同。 7准准定定位位标标记记（符符号号n）：预预测测可可能能在在某某一位置，但不以能保证。一位置，但不以能保证。非定位标记非定位标记均匀标记（符号 u）：放放射射性性原原子子均均匀匀地地分分布布于于分分子子中中；每一位置的标记概率相同每一位置的标记概率相同。全标记（符号G）： 如如同同位位素素交交换换制制备备氚氚标
6、标记记，既既不不均均匀匀，又又不不定定位位，某某一一类类原原子子被被取取代代的的概概率率不不相相同同，代代表表整整个个分分子子代代谢谢，比比活活度度高，制备方法多。高，制备方法多。8双标记及多标记双标记及多标记：指在化合物分子的不同部位，引入指在化合物分子的不同部位，引入一一种种或或二二种种以以上上元元素素的的同同位位素素原原子子或或引引入入一一种种元元素素的的两两种种或或两两种种以以上上的的同同位位素原子。素原子。多标记的特点是多标记的特点是：示示踪踪应应用用时时，可可在在同同一一机机体体或或离离体体组组织织中中同同时时观观察察两两个个指指标标，不不仅仅减减少少工工作作量量，还还可可排排除除
7、和和减减少少由由于于个个体体差差异异引引起起的的误误差。差。93 3、比比活活度度：每每毫毫摩摩尔尔所所含含放放射射性性活活度，度，mcimci或或ci/mmolci/mmol应用注意：应用注意： 1 1，利用分子量不同的化合物间比活度的比较。，利用分子量不同的化合物间比活度的比较。 2 2，当当某某些些化化合合物物分分子子量量不不确确定定时时，则则以以 单单位重量所含放射性活度来表示。位重量所含放射性活度来表示。制备和使用高比活度标记物注意：制备和使用高比活度标记物注意：a a、受原料比活度和制备方法的限制；受原料比活度和制备方法的限制； b b、比活度越高，制备操作越难；比活度越高，制备操
8、作越难； c c、比活度高时，氚标记物有辐射自分解。比活度高时，氚标记物有辐射自分解。 104 4、放射化学纯度放射化学纯度： 指指所所需需标标记记物物的的放放射射性性（特特定定化化学学态态）占占总放射性的百分值，一般要求总放射性的百分值，一般要求95%95%以上以上。5 5、标记化合物的不稳定性：标记化合物的不稳定性： 引入放射性原子增加了不稳定因素：引入放射性原子增加了不稳定因素： 放射性衰变；放射性衰变； 辐射自分解；辐射自分解； 放射性原子脱落、移位。放射性原子脱落、移位。11三、制备标记化合物基本方法三、制备标记化合物基本方法由由人人工工核核反反应应制制得得放放射射性性核核素素，均均
9、为为简简单单的的化化合合物物，为为制制得得合合适适的的分分析析试试剂剂或或示示踪踪试试剂剂，需需进进一一步步以以简简单单放放射射性性化合物为原料来制备或合成。化合物为原料来制备或合成。12AX+BXO=AXO+BX如：制备如：制备G-3H-河鱼屯毒素河鱼屯毒素可可逆逆反反应应，反反应应速速度度的的快快慢慢与与反反应应条条件件有有关关，常常以以交交换换半半值值期期作作为为选选择择最最适适反反应应条条件的指标。件的指标。交交换换半半值值期期的的物物理理意意义义：产产物物的的浓浓度度等等于于交交换换反应达到平衡时产物浓度的反应达到平衡时产物浓度的1/2所需时间。所需时间。1、同位素交换法、同位素交换
10、法13一般反应一般反应3-5个半值期即可。个半值期即可。影响交换反应速率的因素：影响交换反应速率的因素：温温度度、酸酸度度、压压力力，所所用用溶溶剂剂性性质质，反反应应的的浓浓度度及及选选用用合合适适的的催催化剂等。化剂等。14优点优点：简简便便，不不需需制制备备前前体体，无无复复杂合成步骤；杂合成步骤；待待标标记记化化合合物物用用量量少少，（适适于于标标记记稀稀有有昂昂贵贵的的复复杂杂有有机机物）；物）；可可获获较较高高比比活活度度，放放射射性性核核素利用率高。素利用率高。15缺点：缺点：a、中中心心原原子子往往往往用用该该法法难难以以标标记记上上，如如氚氚、碘碘常常用用于于交交换换标标记记
11、，而而14C标标记记化化合合物物由由于于反应条件高，不易用此法制备。反应条件高，不易用此法制备。b、通通常常条条件件下下能能交交换换的的系系统统，不不一一定定都都能能制备标记物。制备标记物。c、仅有几个位置可交换，专一性差。仅有几个位置可交换，专一性差。d、原原料料含含杂杂质质也也含含交交接接位位置置，易易形形成成放放射射性杂质性杂质。162 2、化学合成法、化学合成法：（常用（常用1414C C标记）标记）最主要的方法最主要的方法如如 H H2 23535SO4 +NaOH-NaSO4 +NaOH-Na3535SO4 +HSO4 +H2 2O O 与普通化学反应不同之处：与普通化学反应不同之
12、处：1 1、选用原料，简单无机物，选料受限。、选用原料，简单无机物，选料受限。2 2、选择合成路线，并做冷试验。、选择合成路线，并做冷试验。优优点点：高高比比活活度度，高高纯纯度度，而而又又是是定定位位标标记的标记物。记的标记物。17 全生物合成或酶促合成。全生物合成或酶促合成。如：如： 1414COCO2 2加入藻类细胞中加入藻类细胞中 产生的蛋白产生的蛋白 含有含有1616种标记的种标记的AAAA。3 3、生物合成法（常用、生物合成法（常用1414C C）18优点优点： 对对某某些些放放射射性性标标记记物物，特特别别是是一一些些构构造造复复杂杂，化化学学合合成成难难以以制制备备或或目目前前
13、尚尚不不可可能能制制备备的的有有机机化化合合物物进进行行标标记记的的有有用用手手段段。标标记记产产品品具具有有生生物物体体内内原原有有的的旋旋光光性性，特特别适合示踪。别适合示踪。缺点缺点：生成物复杂，较多分离纯化，放：生成物复杂，较多分离纯化，放射性原料利用率低，难于标记于特定位置射性原料利用率低，难于标记于特定位置上，标记率偏低。上，标记率偏低。 19 利利 用用 核核 反反 应应 的的 反反 冲冲 能能 ， 如如1414N N（n,pn,p）1414C C等等，1414C C具具有有反反冲冲能能与与周周围围化化合合物物可可进进行行相相互互作作用用而而形形成成标标记记物物。如如果果把把核核
14、素素加加速速，轰轰击击待待标标记记物物也也能能标标记。记。 优点：可制备复杂化合物。优点：可制备复杂化合物。缺点：得率低，较繁杂。缺点：得率低，较繁杂。4 4、热原子反冲标记、热原子反冲标记 及加速离子标记及加速离子标记20氚标记化合物合成（氚标记化合物合成（3H）1.1.3H介绍：介绍：，18.6KeV。2.2.氚氚的的优优点点：来来源源丰丰富富、弱弱-、ARG分分辨辨率率高高，可可观观察察亚亚细细胞胞形形态态，标标记记简简单单，得得率率高高、比比活活度度高高、T1/2长、易运输、贮存安全。长、易运输、贮存安全。3H同位素交换法：直直接接将将3 3H H气气体体引引入入待标记物，是不定位标记
15、。待标记物，是不定位标记。21优点优点：简单、方便。：简单、方便。缺缺点点：易易标标记记在在不不稳稳定定位位置置上上、化化学学键键易易断断、反反应应时时间间较较长长、比比活活度低、纯化困难。度低、纯化困难。 3H气曝射交换：将将化化合合物物涂涂于于管管底底，然然后后抽抽真真空空、通通入入氚氚气气，密密封封反反应应。如如秋秋水水仙仙碱碱、喜喜树树碱碱的的3H标记。标记。22该标记方法目前该标记方法目前有三项改进有三项改进：微波活化氚气；微波活化氚气；扩大样品反应截面；扩大样品反应截面；加入催化剂，提高比活度加入催化剂，提高比活度。23催化交换法标记催化交换法标记：将氚化溶液加入催化剂与待标将氚化
16、溶液加入催化剂与待标记物进行反应。记物进行反应。氚标化学合成法：氚标化学合成法：适合于含前体的化合物，先用适合于含前体的化合物，先用氧化剂使之脱氢制成不饱各前体。然后操作如下：氧化剂使之脱氢制成不饱各前体。然后操作如下：前体（如烯烃、炔烃等）前体（如烯烃、炔烃等）+ + 氚气氚气氚标化合物氚标化合物催化卤素置换法：催化卤素置换法：氚易在催化条件下与溴、碘原氚易在催化条件下与溴、碘原子发生置换反应。子发生置换反应。氚化金属还原法：氚化金属还原法：定位标记。定位标记。氚标生物化成法：氚标生物化成法：将氚标化合物经酶促作用，转将氚标化合物经酶促作用，转化为另外一种氚标记化合物。化为另外一种氚标记化合
17、物。 24四、一般实验室常用核素标记四、一般实验室常用核素标记 （一）放射性碘标记物的一些概念（一）放射性碘标记物的一些概念1 1、125125I I的特性：的特性： 半半衰衰期期适适中中，商商品品化化，易易贮贮存存，处理容易。处理容易。 类类似似低低能能射射线线，易易测测量量，辐辐射射自分解小，标记物稳定性好。自分解小，标记物稳定性好。2 2、 125125I I蛋蛋白白质质、多多肽肽的的放放射射性性碘碘标标技技术术：标标记记部部位位在在络络氨氨酸酸残残基基苯苯环环上上的氢（氢被碘替代）。的氢（氢被碘替代）。25影响因素影响因素蛋蛋白白质质分分子子中中络络胺胺酸酸残残基基的的数量及他们分子中
18、暴露程度。数量及他们分子中暴露程度。碘碘化化物物的的用用量量，反反应应条条件件（PHPH、温温度度、反反应应时时间间）、氧氧化剂的性质。化剂的性质。26（二）碘标记方法及分类：（二）碘标记方法及分类：1 1、氯胺、氯胺-T-T法：法： CH-TCH-T叫叫N-N-氯代对甲苯磺酰胺钠盐，氯代对甲苯磺酰胺钠盐，为温和氧化剂。它在水中产生次氯酸，为温和氧化剂。它在水中产生次氯酸，次氯酸可使碘离子变为碘分子次氯酸可使碘离子变为碘分子125125I I2 2, , 125125I I2 2可心置换酪氨酸残基苯环上的可心置换酪氨酸残基苯环上的H H，而加入偏重亚硫酸钠可中止氧化反应。而加入偏重亚硫酸钠可中
19、止氧化反应。标记原理标记原理275 5微克人生长激素微克人生长激素+74MBqNa+74MBqNa125125I+100I+100微克微克CH-TCH-T反应一分钟，反应一分钟，200200微克微克NaNa2 2S S2 2O O5 5 终止反应，终止反应，然后分离纯化即可。然后分离纯化即可。28本法优点：本法优点： 效效率率高高，重重复复性性好好，试试剂剂价价格格低低易易得得，是是常常用用碘碘标标法法。（注意标记物是混合物）（注意标记物是混合物）分离方法：透析或凝胶过滤分离方法：透析或凝胶过滤。29CH-TCH-T标记实验应注意的问题标记实验应注意的问题氯胺氯胺-T-T临时配制；临时配制；氯
20、胺氯胺-T-T用量要适宜，过大免疫活性和生物用量要适宜，过大免疫活性和生物活性低，反之，标记率低；活性低，反之，标记率低；加入氯胺加入氯胺-T-T后尽快混匀；后尽快混匀；反应时间：反应时间：0-240-24，1 1分钟左右；分钟左右；反应终止：反应终止：偏重亚硫酸钠，约偏重亚硫酸钠，约1.51.5倍倍CH-TCH-T量；量；反应体积小，使微量蛋白质保持高浓度，反应体积小，使微量蛋白质保持高浓度，保证碘化效应。保证碘化效应。PHPH值，根据不同的蛋白决定（值，根据不同的蛋白决定（7.3-7.87.3-7.8）。）。302、乳过氧化物酶法：、乳过氧化物酶法：乳过氧化物酶有促进微量过氧化氢对125I
21、-的氧化作用生成125I2，并标记在蛋白质酪氨酸分子上。本法应该注意：反应条件温和，H2O2只需要极低浓度（110-3 mM）因而通常能保持标记化合物原有的生物活性和免疫活性。缺点缺点：标记率低，标记率低，20-40%313、联接标记法、联接标记法：先先用用Na125I和和氧氧化化剂剂（CH-T）碘碘化化酰酰化化剂剂3-(对对-羟羟基基苯苯)丙丙酸酸-N琥琥珀珀亚亚胺胺酯酯（Bolton-Hunter试试剂剂或或BH）再再与与蛋蛋白白质质分分子子中中的的游游离离氨氨基酸相结合引入蛋白质中。基酸相结合引入蛋白质中。32优点：优点：避免蛋白质与氧化剂的接触；避免蛋白质与氧化剂的接触；避免蛋白质与放
22、射性碘的直接接触；避免蛋白质与放射性碘的直接接触；防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤；防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤；适适用用于于标标记记缺缺乏乏酪酪氨氨酸酸的的蛋蛋白白质质或或酪酪氨氨酸酸在在活活性性中中心心，引引入入碘碘原原子子后后会会引引起起蛋蛋白白质的失活。质的失活。缺缺点点：操操作作麻麻烦烦，二二步步反反应应，引引入入异物，放射性碘利用率受一定影响。异物，放射性碘利用率受一定影响。334 4、固相氧化法（、固相氧化法（ IodogenIodogen） IodogenIodogen 在在一一定定PHPH及及温温度度范范围围内内使使用用，在在水中溶解度极小。水中溶解度极小。 将将Iodo
23、genIodogen的的二二氯氯甲甲烷烷溶溶液液放放入入反反应应管管中中或或涂涂在在小小破破片片上上，微微微微加加热热，使使溶溶剂剂挥挥发发后后，反反应应管管下下部部或或小小玻玻片片上上就就形形成成IodogenIodogen薄薄膜膜，蛋蛋白白质质碘碘标标记记反反应应就就在在反反应应管管中中进进行行，或或将将小小波波片片“悬悬挂挂”入入加加有有NaNa125125I I的的细细胞胞培培养养液液中中，可可使细胞表面的蛋白碘化。使细胞表面的蛋白碘化。优点优点：碘化效率高，对标记物的损伤程度小。碘化效率高，对标记物的损伤程度小。345 5、核酸碘标记：、核酸碘标记： 即探针，原理同上。即探针，原理同
24、上。举例：举例：DNADNA的的125125I I标记技术。标记技术。操作程序操作程序DNADNA常规提取纯化；常规提取纯化；DNADNA加热（加热（7070），分为单股），分为单股DNADNA；用用TLCLTLCL3 3将将Na125INa125I氧化产生氧化产生125125I I2 2调调PH4.7PH4.7，125125I I将将取取代代嘧嘧啶啶环环上上第第5 5位位的的碳碳原原子子，形成共价结合的形成共价结合的DNADNA单链。单链。降温，恢复双股降温，恢复双股DNADNA得得125125I-DNAI-DNA；纯化。纯化。356 6、3232P P、3535P P、3333P P的标记
25、的标记： 这这三三核核素素主主要要用用于于标标记记核核苷苷酸酸，而而标标记记蛋蛋白白常常用用125125I I、3 3H H。36五五、放放射射性性标标记记化化合合物物的的纯纯化与鉴定化与鉴定（一）标记做完后需做三件事：（一）标记做完后需做三件事：1、标记率测定、标记率测定2、分离纯化；、分离纯化；3、产品质量鉴定；、产品质量鉴定；（二）标记率：（二）标记率：放射性核素标到标记放射性核素标到标记物的量占投料总放射性的百分数。物的量占投料总放射性的百分数。37常用测定方法：常用测定方法：1、纸纸层层析析法法：混混合合样样品品中中各各组组分分的的性性质质不不同同，在在固固定定相相上上的的吸吸附附能
26、能力力和和在在流流动动相相中中的的溶溶解解度度不不同同，因因此此它它们们各各自自的的移移动动速速度度不不同同，可可在在特特殊纸片上分离开。殊纸片上分离开。常用：比移值常用：比移值Rf表示各组分的移动速度快慢。表示各组分的移动速度快慢。意意义义：某某标标记记物物的的Rf值值在在相相同同条条件件下下稳稳定定不不变变。纸纸层层析析（薄薄板板）层层析析示示意意图图见见P90。标记率图见标记率图见P91P91Rf = 待测组分到原点的距离待测组分到原点的距离I 流动相前沿到原点距离流动相前沿到原点距离L382、薄层层析、薄层层析原理原理硅硅胶胶或或氧氧化化铝铝（固固定定相相）：根根据据混混合合物物各组分
27、的吸附力和分配系数不同而分开。各组分的吸附力和分配系数不同而分开。离离子子交交换换树树脂脂（固固定定相相）：根根据据各各组组分分离离子电荷的性质和数量不同而分开。子电荷的性质和数量不同而分开。聚聚酰酰胺胺：以以各各组组分分氢氢键键吸吸附附能能力力不不同同而而分开。分开。39展开实验注意问题展开实验注意问题层析纸长度，一般20cm左右，越长分离越好；展开剂要精心设计，选2-3种进行验证。要求：能把混合物很好的分开，用时还要组成简单，粘度小，展开快，展开后易挥发，价格低，易购买。点样斑大小适当。点样斑不能碰到展开剂的液体。层析缸要有盖，减少干扰。分段测量，段的大小要一致；起跑点所在段也要测量。高比
28、活度样品点要加载体，减少吸附。40避免反复点样，层析纸要自然晾干；最好能用标准样品做对照。各段剂量值必须减本底。标记率计算：标记率计算：P90（三）分离纯化（为什么）？三）分离纯化（为什么）？纯化方法纯化方法凝胶过滤法凝胶过滤法分离标记蛋白与无机碘分离标记蛋白与无机碘离子交换法离子交换法分离短肽标记物分离短肽标记物透透析析法法分离标记蛋白与小分子分离标记蛋白与小分子亲和层析法亲和层析法特异性好特异性好,保持生物活性保持生物活性ConA吸附法吸附法糖蛋白糖蛋白41标记化合物主要质量指标（标记化合物主要质量指标（5个）个）1，放射性核素纯度，2，放化纯度、3，放射性比活度、4，生物活性5，免疫活性
29、及标记位置放射性核素纯度及其检查放射性核素纯度及其检查所需放射性核素的活度所需放射性核素的活度放射性核素纯度放射性核素纯度（%）=-%样品的总放射性活度样品的总放射性活度42（三）（三）放化纯度及鉴定：放化纯度及鉴定：特定化学形态的放射性活度特定化学形态的放射性活度放化纯度放化纯度=-%样品总放射性活度样品总放射性活度放化纯度的测定原则放化纯度的测定原则：高效的化学分离与灵敏的放射性测量结合。高效的化学分离与灵敏的放射性测量结合。方法方法：放射层析法（色谱技术）放射层析法（色谱技术）放射层析法（色谱技术）放射层析法（色谱技术）层析谱放射性测量层析谱放射性测量层析谱放射性测量层析谱放射性测量放射
30、自显影（半定量）放射自显影（半定量）放射自显影（半定量）放射自显影（半定量）分段切取测量（放射性分布曲线）分段切取测量（放射性分布曲线）分段切取测量（放射性分布曲线）分段切取测量（放射性分布曲线）放射性扫描放射性扫描放射性扫描放射性扫描1放化纯度放化纯度%=-%1+2+3+4+543放射性高效液相层析法：特点：分析速度快、放射性高效液相层析法：特点：分析速度快、分离效率高、适用广。分离效率高、适用广。（四）（四） 化学纯度及化学量的测定化学纯度及化学量的测定 如如氚氚标标记记类类固固醇醇作作RIA分分析析试试剂剂，其其中中的的化化学学杂杂质质会会影影响响标标记记抗抗原原与与抗抗体体的的结结合合
31、，使灵敏度降低，因此须控制化学杂质含量。使灵敏度降低，因此须控制化学杂质含量。 冷试验、标记化合物（微量分析）冷试验、标记化合物（微量分析）44（五）（五）放射性比活度及测定放射性比活度及测定放射性活度放射性活度比活度比活度=-单位化学量单位化学量比活度的理论值比活度的理论值=N=0.693N/T1/2（理论上有多少原子核就应该有多少次衰变）理论上有多少原子核就应该有多少次衰变）测定：（测定：（1）直接测定直接测定（2）层析扫描面积计算法）层析扫描面积计算法45 注意：标记率测定用混合物点样；注意：标记率测定用混合物点样；放化纯度测定用纯化物点样。放化纯度测定用纯化物点样。标记率标记率= S1
32、+S2+S3 100% S1 若投入待标记物若投入待标记物W，且且100%成为标记物成为标记物 比活度比活度= W AY （A为总放射性）为总放射性） 46（3）自身取代法）自身取代法（将（将Bq/mg换算为换算为Bq/mol）：）：分三步进行分三步进行以以标标记记品品、标标准准品品与与抗抗体体竞竞争争结结合合做做一一条条B/F对对标准品依次递增的曲线。标准品依次递增的曲线。再再做做一一条条标标记记品品与与抗抗体体特特异异结结合合的的无无竞竞争争曲曲线线，B/F为纵坐标，标记品为纵坐标，标记品cpm依次递增为横坐标。依次递增为横坐标。将将两两条条曲曲线线放放在在同同一一坐坐标标系系，任任取取一
33、一点点对对应应的的横横坐标即为比活度。坐标即为比活度。 47六、生物活性、免疫活性测定六、生物活性、免疫活性测定：1、为什么？重要性、为什么？重要性2、测定要求、测定要求（生物活性与免疫性变化不平行）（生物活性与免疫性变化不平行）3、方法：、方法： 物物理理化化学学方方法法（如如标标记记的的受受损损蛋蛋白白质质电电泳泳时时泳泳动动下下降降）。特特异异结结合合试试验验（标标记记抗抗原原，非非标标记记抗抗原原与与抗抗体体亲亲和和力力）。生生物物特特性性测测定定（如如125I纤纤维维蛋蛋白白、凝血能力）等。凝血能力）等。48八、放射性标记化合物八、放射性标记化合物的稳定性与贮存的稳定性与贮存（一）放
34、射性标记化合物的辐射自分解（一）放射性标记化合物的辐射自分解1、定义：、定义：用作标记的放射性核素放出的射线，能使标用作标记的放射性核素放出的射线，能使标记化合物本身发生电离辐射分解，可形成化学杂质记化合物本身发生电离辐射分解，可形成化学杂质及放化杂质。及放化杂质。2、辐射自分解的方式：、辐射自分解的方式：初级内分解初级内分解（固有）固有）初级外分解初级外分解（比活度上升，标记分子集中）（比活度上升，标记分子集中）次级分解次级分解（水（水-自由基自由基-标记化合物）标记化合物）493、影响辐射自分解因素、影响辐射自分解因素1）与标记化合物吸收射线的效率有关，）与标记化合物吸收射线的效率有关，吸
35、收效率则与射线类型、能量有关。吸收效率则与射线类型、能量有关。2）与标记物比活度有关；）与标记物比活度有关；3）与标记物的纯度有关：开始时缓慢，）与标记物的纯度有关：开始时缓慢，随后加速，辐射自分解产物可加速随后随后加速，辐射自分解产物可加速随后的破坏。的破坏。50（二）辐射自分解的控制和贮存（二）辐射自分解的控制和贮存1、控制比活度适当（加入载体，、控制比活度适当（加入载体，同种化合物同种化合物分子）分子）2、贮存形式及溶剂选择、贮存形式及溶剂选择溶液状或不易产生自由基溶液状或不易产生自由基3、温度选择：、温度选择：1）射线能量较强，初级外分解作用小而自）射线能量较强，初级外分解作用小而自由基作用显著者，温度低好；由基作用显著者，温度低好；2）而射线能量低，如氚标者，则最好保存）而射线能量低，如氚标者，则最好保存在不使溶液冻结状态下的低温条件或是在低在不使溶液冻结状态下的低温条件或是在低于于-140度，迅速固化，溶质分子仍保持分散度，迅速固化，溶质分子仍保持分散和匀相。和匀相。5152
