《药物定量分析样品与分析方法验证ppt课件》由会员分享,可在线阅读,更多相关《药物定量分析样品与分析方法验证ppt课件(69页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、第四章第四章药物定量分析样品与分析方法验证药物定量分析样品与分析方法验证第一节定量分析样品的前处置第一节定量分析样品的前处置一、概述研讨对象:含金属或含卤素,硫,磷,硒等特殊元素药物分析前处置。二、不经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 一、概述一、概述原料原料: :不不经特殊特殊处置直接置直接测定定原料原料: :经有机破坏后有机破坏后测定定 制制剂: :排除排除处方中干方中干扰组分分药物物二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法一直接测定法一直接测定法1.1.配位滴定法配位滴定法2.2.氧化复原法氧化复原法二经水解后测定法二经水解后测定法1.1.碱水解后测定法碱水解后测定
2、法2.2.酸水解后测定法酸水解后测定法三经复原分解后测定三经复原分解后测定二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法一直接测定法一直接测定法1.1.配位滴定法配位滴定法 葡萄糖酸钙葡萄糖酸钙 【含量测定】【含量测定】 取本品取本品0.5g0.5g,精细称定,加水,精细称定,加水100ml100ml,微热使溶解,加氢氧化钠试液,微热使溶解,加氢氧化钠试液 15ml 15ml与与钙紫红素指示剂钙紫红素指示剂0.1g0.1g,用乙二胺四醋酸二钠滴,用乙二胺四醋酸二钠滴定液定液(0.05mol/L) (0.05mol/L) 滴定至溶液自紫滴定至溶液自紫 色转变为色转变为纯蓝色。每纯蓝色。每1
3、ml1ml乙二胺四醋酸二钠滴定液乙二胺四醋酸二钠滴定液0.05mol/L 0.05mol/L 相当于相当于22.42mg 22.42mg 的的 C12H22CaO14.H2OC12H22CaO14.H2O。 二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法一直接测定法一直接测定法2.2.氧化复原法氧化复原法 葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠 【含量测定】【含量测定】 取本品约取本品约0.3g0.3g,精细称定,置,精细称定,置具塞锥形瓶中,加水具塞锥形瓶中,加水100ml 100ml 、盐酸、盐酸15 ml15 ml与碘与碘化钾试液化钾试液10ml10ml,密塞,振摇后,在暗处静置,密塞,振摇后,
4、在暗处静置1010分钟,用硫代硫酸钠滴定液分钟,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mo l/L)(0.1mo l/L)滴定,滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定至蓝色至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消逝,并将滴定的结果用空白消逝,并将滴定的结果用空白 实验校正。每实验校正。每1ml1ml硫代硫酸钠滴定液硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于6.088mg 6.088mg 的的SbSb。 二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法二经水解后测定法二经水解后测定法1.1.碱水解后测定法碱水解后测定法 三氯叔丁醇三氯叔丁醇 【含量测定】【含量测定】 取本品
5、约取本品约0.1g0.1g,精细称定,加乙,精细称定,加乙醇醇5ml 5ml ,溶解后,加,溶解后,加2020氢氧化钠氢氧化钠 溶液溶液5ml 5ml ,加热回流,加热回流1515分钟,放冷至室温,加水分钟,放冷至室温,加水20ml20ml与与硝酸硝酸5ml 5ml ,精细加硝酸银滴定液,精细加硝酸银滴定液 (0.1mol/L)30ml(0.1mol/L)30ml,再加邻苯二甲酸二丁酯,再加邻苯二甲酸二丁酯5ml 5ml ,密塞,强力振摇后,加硫酸铁铵指示液,密塞,强力振摇后,加硫酸铁铵指示液 2ml 2ml ,用硫氰酸铵滴定液,用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定,并
6、将滴滴定,并将滴定的结果用空白实验校正。每定的结果用空白实验校正。每1ml1ml的的 硝酸银滴硝酸银滴定液定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于6.216mg 6.216mg 的的C4H7Cl3O.1/2H2OC4H7Cl3O.1/2H2O。 二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法二经水解后测定法二经水解后测定法2.2.酸水解后测定法酸水解后测定法 硬脂酸镁硬脂酸镁 【含量测定】【含量测定】 取本品约取本品约1g1g,精细称定,精细,精细称定,精细加硫酸滴定液加硫酸滴定液(0.05mol/L)50ml (0.05mol/L)50ml ,煮,煮 沸至油沸至油层廓清
7、,继续加热层廓清,继续加热1010分钟,放冷至室温,加甲分钟,放冷至室温,加甲基橙指示液基橙指示液1 1 2 2 滴,用氢氧化钠滴,用氢氧化钠 滴定液滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L) (0.05mol/L) 相当于相当于2.016mg 2.016mg 的的MgOMgO。 二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法三经复原分解后测定法1.碱性复原后测定2.酸性复原后测定3.利用可游离的金属离子的氧化性测定含量三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法一、湿法破坏一、湿法破坏二、干法破坏二、干法破坏
8、1. 1. 高温炽灼法高温炽灼法2. 2. 氧瓶熄灭法氧瓶熄灭法三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法一、湿法破坏一、湿法破坏 凯氏定氮法凯氏定氮法Kjeldahl nitrogen determination)Kjeldahl nitrogen determination)适用:含氨基或酰胺构造的药物适用:含氨基或酰胺构造的药物原理原理: : 含氮药物与硫酸共热含氮药物与硫酸共热, ,将有机氮转变将有机氮转变成无机氨成无机氨, ,然后测定氮的含量。然后测定氮的含量。 三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 一、湿法破坏一、湿法破坏 凯氏定氮法氏定氮法 双双氯非那胺非那胺
9、【含量【含量测定】定】 取本品取本品约0.3g0.3g,精,精细称定,称定,照氮照氮测定法附定法附录 D D 第一法第一法测定。定。 每每1ml1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L) (0.05mol/L) 相当于相当于15.26mg 15.26mg 的的C6H6Cl2N2O4S2 C6H6Cl2N2O4S2 。 三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 一、干法破坏一、干法破坏 氧瓶熄灭法氧瓶熄灭法适用适用含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、限制检查或含量测定及药物中杂质硒的检查。限制检查或含量测定及药物中杂质硒的检查。 三、经有机破
10、坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法一、干法破坏一、干法破坏 氧瓶熄氧瓶熄灭法法碘苯碘苯酯 【含量【含量测定】定】 取本品取本品约20mg20mg,精,精细称定,照氧瓶熄称定,照氧瓶熄灭法附法附录 C C进展有机破展有机破 坏,用坏,用氢氧化氧化钠试液液2ml 2ml 与水与水10ml10ml为吸收液,吸收液,俟吸收完全后,加溴醋酸溶液取醋酸俟吸收完全后,加溴醋酸溶液取醋酸钾 10g 10g ,加冰醋酸适量使,加冰醋酸适量使溶解,加溴溶解,加溴0.4ml 0.4ml ,再加冰醋酸使成,再加冰醋酸使成100ml100ml10ml10ml,密塞,振,密塞,振摇, 放置数分放置数分钟,加甲酸,加甲酸
11、约1ml 1ml ,用水洗,用水洗涤瓶口,并通入空气流瓶口,并通入空气流约3 3 5 5 分分钟以除去剩余的以除去剩余的 溴蒸气,加碘化溴蒸气,加碘化钾2g2g,密塞,密塞,摇匀,用硫匀,用硫代硫酸代硫酸钠滴定液滴定液(0.02mol/L) (0.02mol/L) 滴定,至近滴定,至近终点点 时,加淀粉指示液,加淀粉指示液,继续滴定至滴定至蓝色消逝色消逝, ,并将滴定的并将滴定的结果用空白果用空白实验校正。每校正。每1ml1ml硫硫代代 硫酸硫酸钠滴定液滴定液(0.02mol/L) (0.02mol/L) 相当于相当于1.388mg 1.388mg 的的C19H29IO2C19H29IO2。
12、第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点一、容量分析法一、容量分析法 1 1 适用于化学原料药的含量测定适用于化学原料药的含量测定 2 2容量分析法的有关计算容量分析法的有关计算 3 3含量测定含量测定二、光谱分析法二、光谱分析法三、色谱分析法三、色谱分析法 第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点一、容量分析法的特点一、容量分析法的特点 安装简单,操作简便、快速,方法耐用安装简单,操作简便、快速,方法耐用性高,测定结果准确性高,测定结果准确RSDRSD0.2%0.2%;专;专属性差,适用于含量较高的样品分析,属性差,适用于含量较高的样品分析,常用于化学原料药的含量测定。常
13、用于化学原料药的含量测定。 掌握含量测定的计算公式和方法。掌握含量测定的计算公式和方法。第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点二、光谱分析法二、光谱分析法1 1紫外分光光度法紫外分光光度法特点:特点: 1. 1.灵敏度高,灵敏度高,10-4 -10-7g/ml10-4 -10-7g/ml。 2. 2.准确度高,准确度高,RSD%RSD%:2%-5%2%-5%。 3. 3.仪器价廉物美,操作简便,易于普及。仪器价廉物美,操作简便,易于普及。 4. 4.运用广泛。运用广泛。第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点二、光谱分析法二、光谱分析法1 1紫外分光光度法紫外分光光度法
14、含量测定方法含量测定方法 1. 1.对照品比较法对照品比较法 2. 2.吸收系数法吸收系数法 3. 3.计算分光分度法。计算分光分度法。 4. 4.比色法比色法第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点二、光谱分析法二、光谱分析法2 2荧光分析法荧光分析法 特点特点1.1.灵敏度高,灵敏度高,10-10 10-12g/ml10-10 10-12g/ml。2.2.在低浓度溶液中进展。在低浓度溶液中进展。3.3.在测定供试品溶液时在测定供试品溶液时, ,用基准溶液替代对照品用基准溶液替代对照品溶液校正仪器的灵敏度。溶液校正仪器的灵敏度。4.4.用荧光衍生试剂用荧光衍生试剂, ,提高分析方法
15、的灵敏度和选提高分析方法的灵敏度和选择性。择性。 第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点三、色谱分析法三、色谱分析法 一高效液相色谱法一高效液相色谱法特点特点 高灵敏度高灵敏度 10-12 -10-15g/ml 10-12 -10-15g/ml 、高选择性、高效能、高速度及运用广泛。高选择性、高效能、高速度及运用广泛。 第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点三、色谱分析法三、色谱分析法 一高效液相色谱法一高效液相色谱法系统适用性系统适用性1 1实际板数实际板数 2 2分别度分别度 3 3反复性反复性 4 4拖尾因子拖尾因子含量测定方法含量测定方法1 1内标法内标法 2
16、2外标法外标法 第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证 目 的 证明建立和采用的方法适宜相应检测的要求。 内 容 准确度 精细度,专属性,检测限,定量限,线性,线性范围和耐用性 第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证一、准确度一、准确度Accuracy)Accuracy) 指方法测定的结果与真实指方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,用值或参考值接近的程度,用回收率表示。回收率表示。第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证二、精细度二、精细度Precision)Precision) 指平行测定的各丈量值指平行测定的各丈量值实验值之间相互接近的程实验值之间相
17、互接近的程度。度。第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证三、专属性三、专属性 指其它组分能够存在下,指其它组分能够存在下,采用的方法能准确测定出被采用的方法能准确测定出被测物的特性。测物的特性。第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证四、检测限四、检测限Limit of detection, Limit of detection, LOD)LOD) 指试样中被测物能被检测出的最指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。低浓度或量。第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证五、定量限五、定量限Limit of Limit of quantitation, LOQ)qu
18、antitation, LOQ) 指试样中被测物能被定量指试样中被测物能被定量测定的最低量。测定的最低量。第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证六、线六、线 性性 指在一定范围内,试样浓度指在一定范围内,试样浓度与呼应值呈正比。与呼应值呈正比。 第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证七、范七、范 围围 指一种分析方法的精细度,指一种分析方法的精细度,准确度都符合要求的实验结准确度都符合要求的实验结果成线性时供试物浓度的变果成线性时供试物浓度的变化范围。化范围。第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证 八、耐八、耐 用用 性性 指在测定条件有小的变动时,指在测定
19、条件有小的变动时,测定结果不受影响的接受程测定结果不受影响的接受程度,为于常规检验提供根据。度,为于常规检验提供根据。药品分析方法验证内容药品分析方法验证内容准确度准确度耐用性耐用性精细度精细度专属性专属性线性与线性范围线性与线性范围检测限与定量限检测限与定量限Text第四节第四节 体内药物分析简介体内药物分析简介 重要性:重要性: 为了到达药物在临床上的运用平安、合为了到达药物在临床上的运用平安、合理和有效,人们越来越要求了解和提供理和有效,人们越来越要求了解和提供药物在体内的更多信息,即需求对药物药物在体内的更多信息,即需求对药物及其制剂的体内吸收、分布、代谢和排及其制剂的体内吸收、分布、
20、代谢和排泄过程、作用机制及药物效应进展研讨,泄过程、作用机制及药物效应进展研讨,因此促使药物动力学、生物药剂学、临因此促使药物动力学、生物药剂学、临床药理学等一些新兴边缘学科的开展与床药理学等一些新兴边缘学科的开展与建立。建立。 第四节第四节 体内药物分析简介体内药物分析简介 定义:定义: 体内药物分析是经过分析手段了体内药物分析是经过分析手段了解药物在体内数量与质量的变化,解药物在体内数量与质量的变化,获得各种药物动力学参数,代谢获得各种药物动力学参数,代谢的方式和途径等信息。的方式和途径等信息。 第四节第四节 体内药物分析简介体内药物分析简介义务:义务: 1 1进展体内各种体液、组织,器官
21、和排泄物中药物及进展体内各种体液、组织,器官和排泄物中药物及代谢物的分别测定。代谢物的分别测定。 2 2进展新测定方法的研讨、开发,以供临床常规测定进展新测定方法的研讨、开发,以供临床常规测定之用。之用。 3 3进展分析质量管理任务,提高测定技术和效率,以进展分析质量管理任务,提高测定技术和效率,以便获得迅速,准确,可靠的测定结果。便获得迅速,准确,可靠的测定结果。 4 4进展方法学研讨,及时为相关学科的研讨提供合理进展方法学研讨,及时为相关学科的研讨提供合理的最正确分析条件与方法,估计、评定各种方法能到的最正确分析条件与方法,估计、评定各种方法能到达的灵敏、专属和准确的程度。达的灵敏、专属和
22、准确的程度。 5 5参与相关学科研讨中对获得的分析结果的阐明任务,参与相关学科研讨中对获得的分析结果的阐明任务,使所得的测定数据更有助于阐明问题。使所得的测定数据更有助于阐明问题。 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 一、样品的种类 凡是体内药物到达之处,如各种体液,器官组织和排泄物等,都是体内药物分析的对象。血液是最常用的生物样品。 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 一、样品的种类 (一)血液 (1)血浆 全血中参与抗凝剂(肝素、枸橼酸、草酸盐、EDTA等,经离心后取上清液。 2血清 全血不加抗凝剂,由血液中纤维蛋白原等影响下
23、,引起血液凝结而析出的廓清黄色液体,离心后取上清液。 3全血 参与抗凝剂混匀,以防凝血。 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求 一、样品的种类 (二)尿样 尿药测定主要用于药物剂量回收,药物肾去除率、药物体内代谢及 生物利用度研讨,也可用于乙酰化代谢快、慢型测定等。 尿样浓度与血样浓度相关性差。 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求 一、样品的种类 (三)唾液 唾液中的药物浓度通常与血液浓度相关,可用唾液中的药物浓度来反响血浆浓度。 唾液的采集普通是在漱口后15分钟,搜集,离心后,取上清液。第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品
24、分析方法的 根本要求根本要求 二、样品的储存 血浆和血清都必需在采血后即时分别。否那么,血凝后冰冻保管,那么因冰冻时引起细胞溶解,而妨碍血浆或血清的分出,同时因溶血而影响药物浓度变化。 尿样宜立刻测定,否那么应参与防腐剂或低温冷藏。第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求 三、生物样品分析前处置技术 微量药物存在于大量生物介质中,假设直接进展测定,内源性物质能够干扰,药物浓度太低将会达不到仪器灵敏度要求。因此,生物样品中的药物必需经过分别、纯化与浓集,必要时还需对待测组分进展化学改性处置,从而为最后测定发明良好的条件。 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方
25、法的 根本要求根本要求 三、生物样品分析前处置技术 (一) 蛋白质的去除 二缀合物的水解 三有机破坏 四分别、纯化和浓集 五化学衍生化法 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求( (一一) ) 蛋白质的去除蛋白质的去除目的:目的:1 1使于蛋白质结合的药物释放出来,以便准确地测定药使于蛋白质结合的药物释放出来,以便准确地测定药物及其代谢产物的浓度。物及其代谢产物的浓度。2 2减免后续溶剂萃取过程中乳化景象减免后续溶剂萃取过程中乳化景象3 3维护仪器性能维护仪器性能 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求( (一一) ) 蛋白质的去除方
26、法蛋白质的去除方法1 1参与与水混溶的有机溶剂参与与水混溶的有机溶剂 可使蛋白质分子内及分子间的氢可使蛋白质分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋键发生变化而使蛋 白质凝聚,进而使与之结合的药物白质凝聚,进而使与之结合的药物释放出来。释放出来。第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求2参与中性盐参与中性盐 可使溶液的离子强度发生变可使溶液的离子强度发生变化,能使蛋白质脱水后沉淀化,能使蛋白质脱水后沉淀下来,离心后可获得含有药下来,离心后可获得含有药物及其代谢物的上层清液。物及其代谢物的上层清液。第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求3参与强
27、酸参与强酸 使蛋白质分子的阳离子构成使蛋白质分子的阳离子构成不溶性盐而沉淀,条件是不溶性盐而沉淀,条件是pH值要低于蛋白质的等电点。值要低于蛋白质的等电点。第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求4参与含锌盐及铜盐的沉淀参与含锌盐及铜盐的沉淀剂剂 当当pH值高于蛋白质的等电点值高于蛋白质的等电点时,蛋白质分子中带负电荷时,蛋白质分子中带负电荷的羧基与金属离子构成不溶的羧基与金属离子构成不溶性的盐而沉淀。性的盐而沉淀。第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求酶解法酶解法 最常用蛋白水解酶:枯草菌最常用蛋白水解酶:枯草菌溶素溶素可使蛋白质分解
28、而放出药物。可使蛋白质分解而放出药物。 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求(二二) 缀合物的水解缀合物的水解 尿中药物多呈缀合形状。一些含尿中药物多呈缀合形状。一些含-OH,-COOH,-NH3,-SH的药物的药物可与内源性物质葡萄糖酸或硫酸构可与内源性物质葡萄糖酸或硫酸构成葡糖酸苷或硫酸缀合物。成葡糖酸苷或硫酸缀合物。1酸水解酸水解2酶水解酶水解 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求( (三三) ) 有机破坏有机破坏 尿中药物多呈缀合形状。一些含尿中药物多呈缀合形状。一些含-OH-OH,- -COOHCOOH,-NH3-NH3,
29、-SH-SH的药物可与内源性物质葡的药物可与内源性物质葡萄糖酸或硫酸构成葡糖酸苷或硫酸缀合物。萄糖酸或硫酸构成葡糖酸苷或硫酸缀合物。1 1酸水解酸水解2 2酶水解酶水解 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求(四四)分别、纯化与浓集分别、纯化与浓集1、生物样本的分别与纯化、生物样本的分别与纯化1液液-液萃取液萃取liquid-liquid extraction,LLE2液液-固萃取固萃取liquid-solid,LSE 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求1 1液液- -液萃取液萃取liquid-liquid extraction,L
30、LEliquid-liquid extraction,LLE亲脂性的药物与强极性的内源性水溶性物质,经亲脂性的药物与强极性的内源性水溶性物质,经过有机溶剂可以除去大部分干扰性物质。过有机溶剂可以除去大部分干扰性物质。留意:留意:1)1)所用溶剂对被测组分溶解度大所用溶剂对被测组分溶解度大, ,与水不混溶与水不混溶, ,无毒无毒, ,化学稳定化学稳定, ,不易乳化。不易乳化。常用:乙醚,叔丁基甲醚,氯仿,乙酸乙酯等常用:乙醚,叔丁基甲醚,氯仿,乙酸乙酯等2 2有机相:水相有机相:水相=1=1:1 12 2:1 13 3水相最正确水相最正确pHpH值的选择与药物的值的选择与药物的pKapKa有关有
31、关第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求(2(2液液- -固萃取固萃取LSELSE优点:优点:1)1)引入杂质少引入杂质少 2 2无乳化景象无乳化景象3 3萃取效率高,样品用量少萃取效率高,样品用量少4 4水作溶剂,平安性高水作溶剂,平安性高5 5速度快,室温下操作速度快,室温下操作缺陷:本钱高,重现性稍差缺陷:本钱高,重现性稍差分类:亲水性,疏水性分类:亲水性,疏水性第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求(生物样品在待测组分中的浓集生物样品在待测组分中的浓集生物样品在萃取过程中,微量待测组生物样品在萃取过程中,微量待测组分往往分布于较大
32、体积的萃取溶剂中,分往往分布于较大体积的萃取溶剂中,不能直接供和测定。不能直接供和测定。第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求(五化学衍生化法五化学衍生化法1使样品中的药物转化成具使样品中的药物转化成具有可被分别的性质有可被分别的性质2提高检测灵敏度提高检测灵敏度3加强药物的稳定性加强药物的稳定性4提高对光学异构体的分别提高对光学异构体的分别才干才干第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的 根本要求根本要求 三、生物样品分析方法的验证 (一) 特异性 二规范曲线与线性范围 三精细度与准确度 四灵敏度 五稳定性 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方
33、法的 根本要求根本要求三、生物样品分析方法的验证三、生物样品分析方法的验证 特异性特异性稳定性稳定性精细度与准确度精细度与准确度规范曲线规范曲线灵敏度灵敏度线性范围线性范围Text第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 三、生物样品分析方法的验证 (一) 特异性1空白生物样本性谱图2空白样品标样3服药后生物样本性谱图 第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 三、生物样品分析方法的验证 (三) 精细度与准确度1精细度日内精细度intra-day):同一天内,多次丈量的精细度日间精细度 (inter-day)不同时间内测定结果的变异性第四节第
34、四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 三、生物样品分析方法的验证 (三) 精细度与准确度1准确度绝对回收率:%.相对回收率: 又称方法回收率第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 三、生物样品分析方法的验证 (四) 灵敏度1检测限(LOD): S/N=3时的被测物的浓度.2) 定量限(LOQ):能满足测定个半衰期时样品中药物浓度或max的1/10-1/20时的药物浓度第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 三、生物样品分析方法的验证 (五) 稳定性1短期室温条件下的稳定性调查长期低温条件下的稳定性调查冷冻解冻冻融稳定
35、性调查第四节第四节 生物样品分析方法的生物样品分析方法的根本要求根本要求 三、生物样品分析方法的验证 (六) 质量控制样品七测定结果详细记录实验过程和结果思索题思索题一、一、简述含金属或含述含金属或含卤素,硫、磷、硒等特殊元素的素,硫、磷、硒等特殊元素的药物分析前物分析前处置方法有哪些?置方法有哪些?二、二、简述述凯氏定氮法的氏定氮法的实验原理原理, ,操作操作过程及适用范程及适用范围? ?方方法中法中为何要何要选用硼酸作吸收液用硼酸作吸收液? ?硼酸吸收液的硼酸吸收液的浓度能否度能否需求需求标定定? ?所取体所取体积能否必需准确量取能否必需准确量取? ?改用硫酸或改用硫酸或盐酸用吸收液酸用吸
36、收液, ,行行吗? ? 三、三、简述氧瓶熄述氧瓶熄灭法的法的实验原理、安装构成及适用范原理、安装构成及适用范围?四、四、简述容量分析法的特点及述容量分析法的特点及计算公式?算公式?五、紫外吸收光五、紫外吸收光谱有什么特征?哪些特征和常数可作有什么特征?哪些特征和常数可作为鉴定定药物的定性定量目的?物的定性定量目的? 思索题思索题六、六、简述紫外分光光度法在述紫外分光光度法在药质量量量量规范中的运范中的运用。用。七、七、简述述HPLCHPLC法中系法中系统适用性适用性实验的意的意义与内容。与内容。八、八、HPLCHPLC法定量的分析方法哪些?各人何特点?法定量的分析方法哪些?各人何特点?九、九、
37、药物分析方法的物分析方法的选择原那么?比原那么?比较几种定量几种定量分析方法的特点并指出适用范分析方法的特点并指出适用范围。十、十、简述准确度与准确度的定述准确度与准确度的定义以及它以及它们之之间的的关系?关系?十一、什么叫有效数字?如何正确运用有效数字十一、什么叫有效数字?如何正确运用有效数字的运算的运算规那么来表示分析那么来表示分析结果?果? 思索题思索题十二、十二、简述体内述体内药物分析的物分析的对象及特点。象及特点。十三、生物十三、生物样品分析前品分析前处置技置技术有哪些有哪些? ?简述各自特点。述各自特点。十四、十四、试比比较普通分析方法与体内普通分析方法与体内药物分物分析方法析方法
38、验证内容有何异同?各有何特点内容有何异同?各有何特点?习习 题题十五、用重十五、用重铬酸酸钾法法测得得FeSO4.7H2OFeSO4.7H2O中中铁的含量的含量为:20.03%,20.04%,20.05%20.03%,20.04%,20.05%和和20.06%20.06%计? ?算算1)1)分析分析结果的平均果的平均值? 2)? 2)平平均偏向均偏向 3) 3)相相对平均偏向平均偏向?4) ?4) 规范偏向范偏向5)5)相相对规范偏向范偏向 答案答案) ) 1)20.04%(2)0.12%(3)0.06%(4) 1)20.04%(2)0.12%(3)0.06%(4) 0.016%(5)0.08
39、%)0.016%(5)0.08%)。习习 题题十六、取十六、取维生素生素B2 20B2 20片片, ,精精细称得分量称得分量为1.6011g1.6011g,研,研细,精,精细称取片粉称取片粉0.1518g0.1518g,置于,置于000ml000ml量瓶中,溶解于量瓶中,溶解于444nm444nm波波优点点测得吸收度得吸收度为0.312,0.312,按按C17H20N4O6C17H20N4O6的吸光系数的吸光系数为323323计算。求算。求维生素的生素的标示百分含量示百分含量标示量示量mg/mg/片片(101.9%)(101.9%)。习习 题题十七、称取十七、称取维生素生素C 0.0500g,C 0.0500g,溶于溶于100ml100ml的的0.05mol/L0.05mol/L硫酸溶液中,再量取硫酸溶液中,再量取mlml,准,准确稀确稀释至至100ml,100ml,取此溶液在取此溶液在cmcm石英池石英池中,于中,于4 4nmnm波波优点点测得吸收度得吸收度为0.551,0.551,按吸光系数按吸光系数为560560计算。求算。求维生素生素C C的百分含量的百分含量(98.4%)(98.4%)。 Thank you!