《Virus de la Hepatitis B：病毒性肝炎b de la》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Virus de la Hepatitis B：病毒性肝炎b de la（57页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、Diagnstico VirolgicoBioq. Alejandro KucBioq. Alejandro KucServicio de Inmunologa - Hospital Servicio de Inmunologa - Hospital “Dr. Julio C. Perrando“Dr. Julio C. PerrandoCtedra de Virologa - FaCENA - Ctedra de Virologa - FaCENA - UNNEUNNErea de Inmunologa - IMR - UNNErea de Inmunologa - IMR - UNNEIm
2、portanciaDeterminar una intervencin teraputicaDefinir el pronstico en la evolucin de un paciente Indicar la necesidad de una vacunacinAdoptar medidas de salud pblica en una comunidad: epidemiologa.Tendencia: Sensibilidad y RapidezMtodos de DiagnsticoDirectos: presencia de presencia de virusvirus en
3、muestras clnicas en muestras clnicas Agente infeccioso:Agente infeccioso: aislamiento viral aislamiento viral P Partculaartcula viral: viral: microscopa electrnica microscopa electrnica A Antgenos virales:ntgenos virales: inmunomarcacin inmunomarcacin GGenomas virales: biologa molecularenomas virale
4、s: biologa molecularIndirectos: respuesta respuesta de de anticuerposanticuerpos especficos especficos antivirales en el suero del pacienteantivirales en el suero del pacienteTipo de MuestrasVirus respiratorios: aspirado nasofarngeoaspirado nasofarngeoLesiones Cutneas: raspado e hisopadoraspado e hi
5、sopadoSangre: aislamiento viralaislamiento viralSuero: bsqueda de anticuerpos (serologa)bsqueda de anticuerpos (serologa)Materia Fecal: enterovirusenterovirusOrina: aislamiento de CMVaislamiento de CMVLCR: enterovirus y parotiditisenterovirus y parotiditisMuestras oculares: hisopadohisopadoTejidos:
6、aislamiento viral o inmunohistoqumicaaislamiento viral o inmunohistoqumicaTransporte y conservacinAislamientoAislamiento Inmediatamente (inactivacin Inmediatamente (inactivacin y contaminacin)y contaminacin) No congelarNo congelarConservacinConservacin Temp amb: horasTemp amb: horas 4C: 1-2 das4C: 1
7、-2 das -20C: meses-20C: meses -70C: aos-70C: aosMtodos Directos1- Aislamiento ViralHuevos, Animales o ClulasTipos de cultivos celularesPrimario: directamente del tejido humano o Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajesanimal; 1-2 subpasajesDiploide: derivado del tejido fetal
8、 o de RN; Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; 20-50 subpasajes20-50 subpasajesHetroploide: extradas de tejido tumoral o Hetroploide: extradas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajestranformado; infinitos subpasajesVariacin en susceptibilidadEs indispensable el Diagnstico presu
9、ntivoEs indispensable el Diagnstico presuntivoInoculacin e incubacin (ATB)Decontaminar muestras no estrilesDecontaminar muestras no estrilesInocular en tubos de cultivo: 200-300 Inocular en tubos de cultivo: 200-300 L de L de muestra en medio con ATBmuestra en medio con ATB1 hr a 37 para permitir la
10、 adsorcin1 hr a 37 para permitir la adsorcinAadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-Aadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-3 das.3 das.Deteccin de los efectos de los virusAccin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y Accin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y cultivocultivoDeteccin de
11、los efectos de los virusAccin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y Accin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y cultivocultivoHemadsorcinHemadsorcinDeteccin de los efectos de los virusAccin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y Accin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y cultivoc
12、ultivoHemadsorcinHemadsorcinHemaglutinacinHemaglutinacinDeteccin de los efectos de los virusDeteccin de los efectos de los virus Accin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y cultivoAccin citopatognica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo HemadsorcinHemadsorcin HemaglutinacinHemaglutinacin Interf
13、erenciaInterferencia Dx presuntivo: debe confirmarseDx presuntivo: debe confirmarseIdentificacinIdentificacin InmunofuoresenciaInmunofuoresencia ImunoperoxidasaImunoperoxidasaCuantificacin de virusCuantificacin de virus Titulacin de punto finalTitulacin de punto final Plaqueo bajo agarosaPlaqueo baj
14、o agarosa2- Microscopa ElectrnicaMtodosInmunoelectromicroscopaInmunoelectromicroscopaColoracin negativaColoracin negativaVentajasRpido Rpido (pocas muestras)(pocas muestras)DesventajasCosto del MECosto del MEBaja SensibilidadBaja Sensibilidad3- Inmunoflourescencia TcnicaTcnica DirectaDirecta Indirec
15、taIndirectaVentajasVentajas Muestra estableMuestra estable Muy SensibleMuy Sensible Muy EspecficaMuy Especfica RpidoRpidoDesventajasDesventajas Costo del MFCosto del MF Observador experimentadoObservador experimentadoIFIIFIIFIIFIIFIIFI4- AglutinacinVentajasVentajas SencilloSencillo RpidoRpido No req
16、uiere No requiere equipamientoequipamientoDesventajasDesventajas Poco especificaPoco especifica5- Enzimoinmunoensayo (EIA)VentajasVentajas Muy SensibleMuy Sensible No se necesita observador experimentadoNo se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultneamenteGran numero de mues
17、tras simultneamente AutomatizableAutomatizableDesventajasDesventajas Falsos Positivos (necesita confirmacin)Falsos Positivos (necesita confirmacin)ELISAEnzymeLinkedImmuno-SorbentAssayTests Rpidos en un solo paso5- Radioinmunoensayo (RIA)Fundamento idntico a ELISAFundamento idntico a ELISAVentajasVen
18、tajas Similar al ELISASimilar al ELISADesventajasDesventajas Reactivos InestablesReactivos Inestables Residuos RadiactivosResiduos Radiactivos Relativamente mas CostosoRelativamente mas CostosoMtodos IndirectosMtodos IndirectosDeteccin de IgMDeteccin de IgM Infeccin agudaInfeccin aguda Infeccin cong
19、nitaInfeccin congnita FR: f+FR: f+ IgG: f- IgG: f- IgM CapturaIgM CapturaDeteccin de IgGDeteccin de IgGSeroconversinSeroconversinRecin NacidosRecin NacidosAvidezAvidez 4 ttulosTcnicasAglutinacin de Aglutinacin de partculaspartculasIFI IFI EIAEIA ELISAELISA LIALIARIARIAWestern BlottWestern BlottWestern BlotMuy especificaMtodo confirmatorio1234Western Blot
