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1、耐有机溶剂菌株的筛选及耐有机溶剂菌株的筛选及芒果苷衍生物生物合成的芒果苷衍生物生物合成的初步探索初步探索1研究背景：研究背景：芒果苷芒果苷具有广泛的药理活性，如广泛的药理活性，如抗氧化，抗炎抗氧化，抗炎等，芒果苷对等，芒果苷对治疗糖尿病，降血脂，免疫调节以及治疗糖尿病，降血脂，免疫调节以及抗肿瘤治疗抗肿瘤治疗有很好的有很好的应用前景。但由于其应用前景。但由于其溶解性和跨膜通透性均很弱溶解性和跨膜通透性均很弱, ,生物利生物利用度低用度低, , 制约了芒果苷药理作用的发挥，为了改善其不足，制约了芒果苷药理作用的发挥，为了改善其不足，提高生物利用度，通常在其结构基础上添加提高生物利用度，通常在其结
2、构基础上添加基团基团或者是制或者是制备成其备成其单钠盐单钠盐的形式，即芒果苷衍生物。的形式，即芒果苷衍生物。芒果苷化学结构式芒果苷化学结构式2芒果苷生物转化芒果苷生物转化芒果苷的生芒果苷的生物转化物转化羟基化羟基化反应反应糖基化糖基化反应反应提高水溶性提高水溶性抗氧化活性等抗氧化活性等提高水溶性提高水溶性生物利用度等生物利用度等3芒果苷衍生物合成方法微生物转化法微生物转化法步骤多，副产物多，污染严重，条件步骤多，副产物多，污染严重，条件苛刻。苛刻。条件温和、反应类型多样、无污染、成本低、副产物少 ，能定位反应。化学合成法化学合成法4有机溶剂耐受菌有机溶剂耐受菌: :一类新的能与有害影响能与有害
3、影响因素竞争因素竞争并能在有机溶剂有机溶剂中茁壮生长的微生物5有机介质中酶有机介质中酶催化反应优点催化反应优点增加底物溶解性度增加底物溶解性度提高酶热稳定性提高酶热稳定性提高反应温度提高反应温度加速反应加速反应改变反应平改变反应平衡移动的方向衡移动的方向可控制底物专一性可控制底物专一性产物分离产物分离通过通过溶剂体系溶剂体系调调节中药有效成分节中药有效成分进行进行定向的转化定向的转化或修饰或修饰等等6实验研究步骤实验研究步骤采集土样采集土样耐有机溶剂耐有机溶剂菌的筛选菌的筛选建立耐有机建立耐有机溶剂菌库溶剂菌库底物复筛底物复筛分析分析7采集土样采集土样初筛初筛以15%的叔丁醇为筛选压力。8转接
4、，稀释涂布，划线单离：转接，稀释涂布，划线单离：9富集与冻存：富集与冻存：10筛得耐有机溶剂菌落以及菌株形态（部分）：筛得耐有机溶剂菌落以及菌株形态（部分）：编号编号菌落形态菌落形态菌体形态菌体形态NJ-2-1菌落小，乳白色，圆形。菌落小，乳白色，圆形。长杆，革兰氏阳性。长杆，革兰氏阳性。NJ-3-2菌落小，淡黄色，圆形。菌落小，淡黄色，圆形。长杆，革兰氏阴性。长杆，革兰氏阴性。NJ-4-2菌落大，白色，假根状。菌落大，白色，假根状。长杆，革兰氏阴性。长杆，革兰氏阴性。NJ-5-2菌落中等，白色，不规则。菌落中等，白色，不规则。粗短杆，革兰氏阴性。粗短杆，革兰氏阴性。NJ-6-1菌落极小，红色
5、，圆形。菌落极小，红色，圆形。细短杆，革兰氏阳性。细短杆，革兰氏阳性。NJ-7-1菌落大，白色圆形，有褶皱。菌落大，白色圆形，有褶皱。短杆，革兰氏阴性。短杆，革兰氏阴性。NJ-8-2菌落小，乳白色，圆形。菌落小，乳白色，圆形。短杆，革兰氏阳性。短杆，革兰氏阳性。共筛得共筛得5959株耐有机溶剂菌，分别有株耐有机溶剂菌，分别有2020株株G G+ +， 3939株株G G- - 。菌株以杆状为主，有。菌株以杆状为主，有6 6株球状。株球状。11底物复筛： 菌种的活化发酵产酶TLC 及HPLC分析转化12薄层检测：展层剂：正丁醇：水：乙酸 5： 4 ： 1对照 NJ-8-2 NJ-3-213高效液
6、相色谱分析：高效液相色谱分析：对照菌株菌株NJ-8-2NJ-8-2芒果苷衍生物10%芒果苷芒果苷对照：对照：条件：30%甲醇、流速1.0ml/min、波长316nm。 14实验小结：成功筛选出成功筛选出59株耐叔丁醇的菌株。株耐叔丁醇的菌株。 对这些菌株进行了转化实验，筛选出对这些菌株进行了转化实验，筛选出2株有株有可能催化芒果苷生物合成芒果苷衍生物的可能催化芒果苷生物合成芒果苷衍生物的菌株。菌株。15展望在本实验的基础上还可以展开以下研究：在本实验的基础上还可以展开以下研究：(1)(1)进一步验证所得的菌株能够催化芒果苷合进一步验证所得的菌株能够催化芒果苷合成芒果苷衍生物；成芒果苷衍生物；(2)(2)确认该芒果苷衍生物的结构及生理活性；确认该芒果苷衍生物的结构及生理活性；(3) (3) 通过发酵条件的优化提高芒果苷衍生物的通过发酵条件的优化提高芒果苷衍生物的产率。产率。1617
