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1、张张 鹏鹏 主任技师主任技师天津医科大学肿瘤医院天津医科大学肿瘤医院人体癌症地图人体癌症地图 在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合 成、释放、或者是宿主对肿瘤反应产生的成、释放、或者是宿主对肿瘤反应产生的 一类生化物质一类生化物质 在血液、体液及组织中肿瘤标志物的定量在血液、体液及组织中肿瘤标志物的定量 或定性检测可以作为肿瘤筛查（仅或定性检测可以作为肿瘤筛查（仅AFPAFP与与 PSAPSA用于高危人群）、鉴别诊断、用于高危人群）、鉴别诊断、治疗后治疗后 病情监测及预后判断的标志与依据病情监测及预后判断的标志与依据肿瘤标志物肿瘤标志物 【tumor mar
2、kers TM】肿瘤标志物应用的一般准则肿瘤标志物应用的一般准则是是大大分分子子物物质质( (多多为为糖糖蛋蛋白白或或脂脂蛋蛋白白成成分分) ), ,其其在在外外周周血血 和和 / /或或 其其 他他 体体 液液 中中 的的 表表 达达 和和 浓浓 度度 变变 化化 与与 恶恶 性肿瘤的发生、发展关系密切性肿瘤的发生、发展关系密切在肿瘤细胞表面或肿瘤细胞内合成，或通过其它细胞诱在肿瘤细胞表面或肿瘤细胞内合成，或通过其它细胞诱 导而成导而成用用 于于 诊诊 断断 的的“ 理理 想想 标标 志志 物物” 应应 具具 备备 ： 仅仅 在在 细细 胞胞 恶恶 变变 后后 才才 产产 生生 、 分分 泌
3、泌 到到 血血 中中 ， 浓浓 度度 可可 达达 被被 检检 测测 到；一经检测即可知肿瘤发生的部位到；一经检测即可知肿瘤发生的部位目前临床应用肿瘤标志物现状目前临床应用肿瘤标志物现状理想形式理想形式特异性特异性100%真阴性真阴性100%假阳性假阳性 0%健健康康人人临界值临界值敏感性敏感性100%真阳性真阳性100%假阴性假阴性 0%肿肿瘤瘤患患者者实际状况实际状况假阴性假阴性假阳性假阳性临界值临界值敏感性敏感性100%特异性特异性- 60%健健康康人人肿肿瘤瘤患患者者特异性特异性100%敏感性敏感性- 50%敏感性上升敏感性上升特异性上升特异性上升肿瘤标志物参数在健康人和肿瘤患者两组人群
4、间的区别肿瘤标志物参数在健康人和肿瘤患者两组人群间的区别实际状态：假阴性和假阳性在选择临界值中的作用：实际状态：假阴性和假阳性在选择临界值中的作用：特异性越高，敏感特异性越高，敏感性越低，反之亦然性越低，反之亦然肿瘤标志物检测质量标准肿瘤标志物检测质量标准 TMTM的诊断数值取决于其敏感性和特异性的诊断数值取决于其敏感性和特异性 TMTM的特异性是：在健康人或良性疾病患者的特异性是：在健康人或良性疾病患者 所检测到的真阴性结果发生率，即所检测到的真阴性结果发生率，即假阳性假阳性 结果百分率越低，特异性越好结果百分率越低，特异性越好 TMTM的敏感率是肿瘤患者检测阳性结果的百分率的敏感率是肿瘤患
5、者检测阳性结果的百分率4TM敏感性和特异性在诊断上的意义敏感性和特异性在诊断上的意义关键依赖于肿瘤分期和对照组的选择，只有关键依赖于肿瘤分期和对照组的选择，只有 肿瘤分期确定后，敏感性的数据才是可靠的肿瘤分期确定后，敏感性的数据才是可靠的只有对照组有明确限定特征，其特异性才有只有对照组有明确限定特征，其特异性才有 意义意义目前研究结果不仅是特异性和敏感性，还应目前研究结果不仅是特异性和敏感性，还应 指出群体研究中的个体结果以及普遍的分类指出群体研究中的个体结果以及普遍的分类TM的临界值设定原则的临界值设定原则 临临 界界 值值 是是 指指 某某 一一T M在在 正正 常常 人人 或或 良良 性
6、性 疾疾 病病 患患 者者 中中 的假定上限值的假定上限值 临临 界界 值值 无无 固固 定定 数数 值值 ， 可可 随随 试试 验验 的的 目目 的的 而而 改改 变变 ；鉴鉴 定定 尽尽 可可 能能 多多 的的 肿肿 瘤瘤 患患 者者 ， 降降 低低 临临 界界 值值 以以 增增 加加 其其 敏敏 感性（假阳性感性（假阳性，特异性，特异性） 最最 大大 可可 能能 地地 指指 示示 出出 肿肿 瘤瘤 发发 生生 ， 临临 界界 值值 可可 设设 定定 得得 高高 些些 ， 以以 增增 加加 其其 特特 异异 性性 （ 假假 阴阴 性性 ， 敏敏 感感 性性 ） T M的的 诊诊 断断 价价
7、 值值 很很 大大 程程 度度 上上 取取 决决 于于 临临 界界 值值 的的 选选 择择 ； 在在 相相 对对 于于 健健 康康 人人 和和 良良 性性 疾疾 病病 患患 者者 特特 异异 性性 为为9 5 %的的 临临 界界 值值 水水 平平 上上 比比 较较 其其 数数 据据 ， 可可 提提 高高 此此T M的的 敏敏 感感 性性特异性、敏感性及阴性和阳性预期值定义特异性、敏感性及阴性和阳性预期值定义特异性特异性=真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数+假阳性结果数假阳性结果数敏感性敏感性=真阴性结果数真阴性结果数真阳性结果数真阳性结果数+假阴性结果数假阴性结果数阳性预期值阳性
8、预期值=真阳性结果数真阳性结果数真阳性结果数真阳性结果数+假阳性结果数假阳性结果数阴性预期值阴性预期值=真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数+假阴性结果数假阴性结果数临床实验室选用肿瘤标志物试验的要求临床实验室选用肿瘤标志物试验的要求可靠性和重复性可靠性和重复性批内变异批内变异 5%批间变异批间变异10%宽分析范围宽分析范围合理收费和减轻工作人员负担合理收费和减轻工作人员负担高特异性高特异性95%高敏感性高敏感性50%最佳阳性和阴性预期值（最佳阳性和阴性预期值（PV）与肿瘤大小的相关性与肿瘤大小的相关性本地区适合的试剂和批号本地区适合的试剂和批号敏感性（敏感性（%）特异性（特异性（
9、%）10080-60-40-20-0100 80 60 40 20 0标志标志A标志标志B两条两条ROC（接受器工作特性）曲线，（接受器工作特性）曲线，A在对照组和恶性肿瘤之间分布好，在对照组和恶性肿瘤之间分布好，B不能进行分布不能进行分布肿瘤胚胎性抗原肿瘤胚胎性抗原 甲胎蛋白（甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（）、癌胚抗原（CEA）异位激素异位激素 绒毛膜促性腺激素（绒毛膜促性腺激素（HCG）、促肾上腺皮质激素）、促肾上腺皮质激素 （ACTH）、降钙素）、降钙素酶和同工酶酶和同工酶 乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDH） 神经元特异性烯醇化酶（神经元特异性烯醇化酶（NSE） 前列腺酸性磷酸酶（前列腺酸
10、性磷酸酶（PAP）血浆蛋白血浆蛋白 2巨球蛋白（巨球蛋白（PsM）细胞代谢产物细胞代谢产物 脂质相关涎酸脂质相关涎酸肿瘤抗原肿瘤抗原 CAl99、CAl25癌基因和抑癌基因蛋白产物癌基因和抑癌基因蛋白产物 cmyc、ras、p53、Rb微量元素微量元素 砷、铜、铁、硒、锌砷、铜、铁、硒、锌肿瘤标志物分类肿瘤标志物分类生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4560%糖，电泳糖，电泳迁移率，迁移率，6个个 抗原决定基抗原决定基分子量：分子量： 180,000发生部位：发生部位： 胚胎及胎儿肠黏膜胚胎及胎儿肠黏膜参考值范围：参考值范围：3ng/ml临床应用：临床应用： 监测结直肠癌、胃癌、乳腺癌和支
11、气管监测结直肠癌、胃癌、乳腺癌和支气管 癌病程及疗效癌病程及疗效影响因素：影响因素： 5%吸烟者检测值可至吸烟者检测值可至2.55ng/ml， 1%至至1020ng/ml；肝炎疾病可使；肝炎疾病可使CEA 水平短暂升高水平短暂升高癌胚抗原癌胚抗原 【CEA】99mTc(鍀）标记抗癌胚抗原单抗C50片段Fab生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4%糖，电泳糖，电泳-1-迁移率迁移率分子量：分子量： 70，000发生部位：发生部位： 卵黄囊、胚胎肝卵黄囊、胚胎肝参考值范围：参考值范围：15ng/ml临床应用：临床应用： 发现原发性肝细胞癌发现原发性肝细胞癌,监测治疗效果监测治疗效果;用用 于诊断
12、生殖细胞肿瘤于诊断生殖细胞肿瘤影响因素：影响因素： 肝炎疾病可使肝炎疾病可使AFP水平短暂升高水平短暂升高;AFP可通过胎盘可通过胎盘,妊娠妊娠3236周周可达高峰；羊水中可达高峰；羊水中AFP浓度与胎儿身长与孕周呈负相关（其浓度与胎儿身长与孕周呈负相关（其95%参考上限参考上限5500200ng/ml，2441孕周），于正常提示胎儿畸形、死胎、无脑儿和开孕周），于正常提示胎儿畸形、死胎、无脑儿和开放性神经缺损等放性神经缺损等甲胎蛋白甲胎蛋白【AFP】肝癌细胞AFP+HCC患者外周血AFP mRNA RT-PCR （反转录）产物电泳图谱生化特性：生化特性： 单链糖蛋白，前列腺分泌产物单链糖蛋白
13、，前列腺分泌产物分子量：分子量： 36，000发生部位：发生部位： 前列腺分泌腺管前列腺分泌腺管参考值范围：参考值范围：3.7ng/ml临床应用：临床应用： 监测前列腺癌监测前列腺癌影响因素：影响因素： 具有组织特异性，但不是肿瘤所特异具有组织特异性，但不是肿瘤所特异 的，注意：应在的，注意：应在直肠癌指诊前取血直肠癌指诊前取血， 前列腺癌患者多高于前列腺癌患者多高于10ng/ml前列腺特异抗原前列腺特异抗原 【 t-PSA】PCR及重叠延伸产物的琼脂糖凝胶电泳 构建抗前列腺特异抗原(PSA)单链 抗 体（scFv）/人羧肽酶A（hCPA） 融合 基因 总PSA（t-PSA）中80%以结合形式
14、存在，称复合PSA（c-PSA）；20%以游离形式存在，称游离PSA（f-PSA）；t-PSA及f-PSA升高，而f-PSA/t-PSA比值降低，提示前列腺癌当总PSA在3.010.0ng/ml时，f-PSA/t-PSA比值低于0.190.10时，前列腺癌的可能性较大生化特性生化特性： 糖蛋白，由两个单克隆抗体：糖蛋白，由两个单克隆抗体： 1.115D8抗乳脂膜及抗乳脂膜及2.DF3抗乳腺癌抗乳腺癌 细胞系所证实细胞系所证实分子量：分子量： 115D8： 400，000；DF3290，000发生部位：发生部位： 乳腺癌细胞和某些上皮细胞乳腺癌细胞和某些上皮细胞参考值范围：参考值范围：28U/m
15、l临床应用：临床应用： 监测乳腺癌疗效监测乳腺癌疗效影响因素：影响因素： 与与CEA联合检测联合检测癌抗原癌抗原15-3 【CA15-3】糖与多肽连接的两种方式 ？是是1984年由年由Kufer和和Hilkens发现，是由鼠抗人乳腺癌肝发现，是由鼠抗人乳腺癌肝细胞转移株的膜的单克隆抗体细胞转移株的膜的单克隆抗体DF3制备的制备的生化特性：生化特性： 糖脂糖脂,Lewis()血型决定基半抗原血型决定基半抗原分子量：分子量： 抗原抗原:36,000;粘蛋白粘蛋白:106D发生部位：发生部位： 各种肿瘤各种肿瘤,在胎儿胃肠道上皮细胞在胎儿胃肠道上皮细胞,许多许多 粘膜细胞粘膜细胞参考值范围：参考值范
16、围：37U/ml临床应用：临床应用： 监测胰腺癌疗效监测胰腺癌疗效影响因素：影响因素： 结直肠结直肠TM的第二选择的第二选择糖类抗原糖类抗原19-9 【CA19-9】是是1981年由年由Koprowski从大肠腺癌细胞系和从大肠腺癌细胞系和免疫鼠杂交瘤产物分离而成免疫鼠杂交瘤产物分离而成生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,以卵巢癌细胞系免疫所获以卵巢癌细胞系免疫所获 单克隆抗体所证实单克隆抗体所证实分子量：分子量： 200,000发生部位：发生部位： 卵巢癌卵巢癌(膜结合物膜结合物),胎儿和成人支气胎儿和成人支气 管正常上皮细胞管正常上皮细胞参考值范围：参考值范围：35U/ml (65U/ml
17、)临床应用：临床应用： 监测卵巢癌病程及疗效，透明细胞癌，子宫内膜癌、输卵监测卵巢癌病程及疗效，透明细胞癌，子宫内膜癌、输卵 管埃及未分化卵巢癌明显升高管埃及未分化卵巢癌明显升高影响因素：影响因素： 来源于体腔上皮细胞衍生物的分化抗原来源于体腔上皮细胞衍生物的分化抗原(Mller管上皮管上皮),特特 异性低；血清浓度轻微升高正常妇女，以及良性卵巢疾患，异性低；血清浓度轻微升高正常妇女，以及良性卵巢疾患， 怀孕前怀孕前3个月、行经期、肝硬化、子宫纤维变性、急性输卵个月、行经期、肝硬化、子宫纤维变性、急性输卵 管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。 糖类抗原糖类抗原125
18、 【 CA125】1981年由年由Bast发现的由鼠抗人乳头状囊性卵巢上皮细胞系发现的由鼠抗人乳头状囊性卵巢上皮细胞系OC125制备而成制备而成生化特性：生化特性： 烯醇化酶二聚体烯醇化酶二聚体分子量：分子量： 87,000发生部位：发生部位： 神经系统的神经元和神经内分泌细胞神经系统的神经元和神经内分泌细胞,红细胞红细胞,血小板血小板参考值范围：参考值范围：12.5ng/ml 临临床床应应用用： 神神经经元元特特异异性性烯烯醇醇化化酶酶是是小小细细胞胞肺肺癌癌(SCLC)和和神神经经母母细细胞胞瘤瘤的的肿肿瘤瘤标标志志物物，可可用用于于鉴鉴别别诊诊断断、病病情情监监测测、疗疗效效评评价价和和
19、复复发发预预报报。用用神神经经元元特特异异性性烯烯醇醇化化酶酶监监测测小小细细胞胞肺肺癌癌的的复复发发，比比临临床床确确定定复复发发要要早早412周周。神神经经元元特特异异性性烯烯醇醇化化酶酶还还可可用用于于神神经经母母细细胞胞瘤瘤和和肾肾母母细细胞胞瘤瘤的的鉴鉴别别诊诊断断，前前者者神神经经元元特特异异性性烯烯醇醇化化酶酶异异常常增增高高而而后后者者增增高高不不明明显显。增增高高：见见于于小小细细胞胞肺肺癌癌（最最敏敏感感最最特特异异的的肿肿瘤瘤标标志志物物之之一一） 、神神经经母母细细胞胞瘤瘤、神神经经内内分分泌泌细细胞胞肿肿瘤瘤（如如嗜嗜铬铬细细胞胞瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤）等瘤、胰岛细
20、胞瘤、黑色素瘤）等影响因素：影响因素： 不要将血放置太久，否则将出现假高值；一不要将血放置太久，否则将出现假高值；一 小时内离心；检测小时内离心；检测SCLC时，与时，与CEA联合应用联合应用神经特异性烯醇化酶神经特异性烯醇化酶 【 NSE】生化特性：生化特性： 糖蛋白激素，由两个非共价结合的亚单糖蛋白激素，由两个非共价结合的亚单 位组成，位组成，a a ，分子量：分子量： a a：14,000；：24,000发生部位：发生部位： 胎盘合体滋养层胎盘合体滋养层,滋养层组织中的胚细胞滋养层组织中的胚细胞 肿瘤肿瘤,合体滋养层巨细胞合体滋养层巨细胞(精原细胞来源精原细胞来源 许多中空器官的上皮细胞
21、成分许多中空器官的上皮细胞成分)参考值范围：参考值范围：男性男性:05mU/ml 临床应用：临床应用： 非精原细胞瘤胚芽细胞瘤非精原细胞瘤胚芽细胞瘤(4886%),睾睾 丸或胎盘绒毛膜肿瘤丸或胎盘绒毛膜肿瘤(100%),胞虫囊状胞虫囊状 痣痣(97%),精原细胞瘤精原细胞瘤(合并肿瘤合并肿瘤)(714%)人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素【HCG】RNA的甲醛变性胶电泳结果，可见清晰的18S、28S两条带及其距加样孔的距离 PCR扩增后进行PAGE电泳及放射自显影结果箭头所示条带T26只在绒癌中显示，在正常绒毛中不显示 生化特性：生化特性： 增生性抗原增生性抗原,多肽，由多肽，由B1、B2和
22、和C三个亚基组成，其三个亚基组成，其 活性主要在活性主要在B1分子量：分子量： 17,00043,000发生部位：发生部位： 卵黄囊卵黄囊,胚胎肝胚胎肝参考值范围：参考值范围：80U/L临临床床应应用用： 膀膀胱胱癌癌？正正常常人人阳阳性性率率4.7%。但但有有相相当当一一部部分分非非恶恶性性肿肿瘤瘤患患者者血血清清中中有有TPA存存在在，其其阳阳性性率率约约为为14%35%，以以下下呼呼吸吸道道、肝肝及及尿尿路路感感染染者者多多见见，故故TPA亦亦非非肿肿瘤瘤所所特特有有的的标标志志。但但在在恶恶性性肿肿瘤瘤者者中中，TPA的的增增高高往往往往是是持持续续性性的的，因因此此，若若进进行行连连
23、续续监监测测，常常常常有有利利于于恶恶性性肿瘤与非恶性病变的鉴别肿瘤与非恶性病变的鉴别 影响因素：影响因素： 测定值测定值80:膀胱、支气管、卵巢、胃癌，可能为肝，肾，膀胱、支气管、卵巢、胃癌，可能为肝，肾，肺等疾病；特异性低肺等疾病；特异性低组织多肽抗原组织多肽抗原【TPA】生化特性：生化特性： 多肽（多肽（32个氨基酸）个氨基酸）分子量：分子量： 3,500发生部位：发生部位： C细胞，胸腺也有分泌降钙素的机能细胞，胸腺也有分泌降钙素的机能 参考值范围：参考值范围： 100pg/ml临床应用：临床应用： 甲状腺髓样癌甲状腺髓样癌：此种癌起源于：此种癌起源于甲状腺甲状腺滤泡旁细胞（滤泡旁细胞
24、（C细胞），可产生多种生物活性物质，其中以降钙素为主。患者血清细胞），可产生多种生物活性物质，其中以降钙素为主。患者血清降钙素水平高于正常数十到数百倍。如经手术治疗，则降钙素水平降钙素水平高于正常数十到数百倍。如经手术治疗，则降钙素水平恢复正常恢复正常影响因素：影响因素： 适用于危险人群筛查和辅助诊断；适用于危险人群筛查和辅助诊断；肺小细胞癌可产生肺小细胞癌可产生多种激素，其中包括降钙素多种激素，其中包括降钙素 降钙素降钙素生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,即由两个单克隆抗体所识别的即由两个单克隆抗体所识别的 TAG72:1:CC49,2:B72-3分子量：分子量： 400,000发生部位：
25、发生部位： 上皮细胞上皮细胞参考值范围：参考值范围： 3U/ml临床应用：临床应用： 胃癌胃癌,卵巢粘液癌卵巢粘液癌影响因素影响因素: 与与CEA联合检测胃癌联合检测胃癌,卵巢癌的卵巢癌的 第二选择标志物第二选择标志物癌抗原癌抗原72-4 【 CA72-4】1989年由年由Gero首先测定首先测定生化特性：生化特性： 与与IgG分子的重链和轻链的分子的重链和轻链的C片段同型片段同型,与与 HLA共同片段的部分相同共同片段的部分相同分子量：分子量： 11,800发生部位：发生部位： 淋巴细胞淋巴细胞,巨嗜细胞和一些上皮细胞表面巨嗜细胞和一些上皮细胞表面参考值范围：参考值范围：1.22.5mg/l
26、临床应用：临床应用： 多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤,非何杰金氏淋巴瘤（非何杰金氏淋巴瘤（NHL）影响因素：影响因素： 在肾脏疾病诊断中也有重要意义在肾脏疾病诊断中也有重要意义 -2-微球蛋白微球蛋白 【 -2-m】生化特性生化特性： 糖蛋白糖蛋白,肿瘤抗原肿瘤抗原T4分子量：分子量： 48,000发生部位：发生部位： 主要存在于子宫颈鳞状细胞癌主要存在于子宫颈鳞状细胞癌,正常正常 鳞状上皮鳞状上皮参考值范围：参考值范围：2.5ng/ml临床应用：临床应用： 监测宫颈、耳、鼻、喉、肺和食管鳞监测宫颈、耳、鼻、喉、肺和食管鳞 状细胞癌病程及治疗状细胞癌病程及治疗影响因素：影响因素： 被皮肤或唾液污染后
27、可导致假性高值被皮肤或唾液污染后可导致假性高值鳞状上皮细胞癌抗原鳞状上皮细胞癌抗原 【 SCC】生化特性：生化特性： 细胞角蛋白片段细胞角蛋白片段19分子量：分子量： 30,000发生部位：发生部位： 存在于许多组织中，特别是肺中存在于许多组织中，特别是肺中参考值范围：参考值范围： 3.3ng/ml临床应用：临床应用： 非小细胞肺癌非小细胞肺癌影响因素：影响因素： 被唾液污染后可导致假性高值被唾液污染后可导致假性高值细胞角蛋白组分细胞角蛋白组分19 【 CYFRA21-1】细胞角蛋白阳性细胞肺癌脑转移糖类抗原糖类抗原50 【CA50】生化特性：生化特性：糖类抗原糖类抗原CA50是一种以唾液酸酯
28、和唾液酸糖蛋白为主是一种以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白为主 的肿瘤标志物的肿瘤标志物参考范围：参考范围： 23U/ml临床意义：临床意义：糖类抗原糖类抗原CA50是一种非特异性的广谱肿瘤标志物，与是一种非特异性的广谱肿瘤标志物，与癌抗原癌抗原19-9有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、结肠直肠有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌的辅助诊断，其中胰腺癌病人增高最明显。增高：见于癌、胃癌的辅助诊断，其中胰腺癌病人增高最明显。增高：见于胰腺癌（阳性率可达胰腺癌（阳性率可达87）、结肠直肠癌、胃癌、肺癌。肝癌。）、结肠直肠癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结肠炎、肝硬化、
29、黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结肠炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高糖类抗原糖类抗原242 【 CA242】CA242是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原1993年年Pujol等等采采用用迟迟缓缓铕铕镧镧荧荧光光分分析析技技术术测测定定102例例NSCLC患患者者血血清清CA242浓浓度度，CA242血血清清浓浓度度阈阈值值为为20.0U/ml，结结果果其其敏敏感感性性及及特特异异性性分分别别为为28.5%和和95.6%。肺肺鳞鳞癌癌患患者者血血清清CA242水水平平显显著著低低于于非非鳞鳞
30、癌癌(腺腺癌癌和和大大细细胞胞肺肺癌癌)患患者者，发发生生远远处处转转移移者者的的CA242浓浓度度高高于于未未转转移移者者，且且期期浓浓度度逐逐渐渐增增加加。从从整整体体角角度度看看，CA242水水平平与与生生存存不不相相关关，但但是是，在在不不能能手手术术切切除除的的NSCLC患患者者中中，CA242浓浓度度升升高高患患者者的的生生存存期期较较浓浓度度低低于于20U/ml患患者者显显著著短短。由由于于CA242敏敏感感性性较较低低，对对NSCLC的的诊诊断断无无意意义义CA242可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，其灵敏度与可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，其灵敏度与CA19-9相仿
31、，但特异性、诊断效率则优于相仿，但特异性、诊断效率则优于CA19-9参考值：参考值： 25U/mlCA549也是乳腺癌的标志物，它是一种酸性也是乳腺癌的标志物，它是一种酸性 糖蛋白糖蛋白大部分健康女性大部分健康女性11 UmL异常升高者比例并不高，可见于异常升高者比例并不高，可见于50%乳腺乳腺 癌、卵巢癌、癌、卵巢癌、40%前列腺癌、前列腺癌、33%肺癌患肺癌患 者。由此，作为乳腺癌的早期诊断，者。由此，作为乳腺癌的早期诊断，CA则则 还较欠缺，应联合应用其它还较欠缺，应联合应用其它TM糖类抗原糖类抗原594【CA549】血清碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶【ALP 或AKP 】是一组底物特异性较低
32、，在碱性环境中能水解很多磷酸单酯化合物的酶是一组底物特异性较低，在碱性环境中能水解很多磷酸单酯化合物的酶AFP在器官组织的含量：在器官组织的含量：肝肾胎盘小肠骨磷酸对硝基酚磷酸对硝基酚（底物）2-氨基氨基-2-甲基甲基-1-丙酮丙酮（受体）+ALP对硝基酚对硝基酚+碱性溶液碱性溶液405nm变黄色，连续监测法参考值：女性：参考值：女性：112岁岁500U/L；15岁，岁，40150U/L 男性：男性：112岁岁500U/L；1215岁，岁，750U/L 15岁，岁，40150U/LAFP活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。升高
33、：骨升高：骨Paget病、胆道梗阻、病、胆道梗阻、恶性肿瘤骨转移或肝转移恶性肿瘤骨转移或肝转移、佝偻病、骨软化、佝偻病、骨软化、成骨细胞瘤成骨细胞瘤、甲状旁腺功能亢进及骨折愈合期、甲状旁腺功能亢进及骨折愈合期降低：少见，呆小症、磷酸酶过少症、维生素降低：少见，呆小症、磷酸酶过少症、维生素C缺乏症。甲功低下、恶性贫血缺乏症。甲功低下、恶性贫血临临床床意意义义阻塞性黄疸、肝硬化、肝坏死，碱性磷酸酶明显升高（肝细胞性黄阻塞性黄疸、肝硬化、肝坏死，碱性磷酸酶明显升高（肝细胞性黄疸则升高不明显）疸则升高不明显） 原发性和继发性肝癌时碱性磷酸酶亦明显升高，与癌组织中或癌肿原发性和继发性肝癌时碱性磷酸酶亦明
34、显升高，与癌组织中或癌肿周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，提示可能有肝脏转移酸酶增高时，提示可能有肝脏转移 变形性骨炎、成骨细胞癌、佝偻病、骨软化、甲状腺及甲状旁腺功变形性骨炎、成骨细胞癌、佝偻病、骨软化、甲状腺及甲状旁腺功能亢进、肾小管性酸中毒、遗传性磷酸酶过多症能亢进、肾小管性酸中毒、遗传性磷酸酶过多症 很多药物可使碱性磷酸酶增高，如巴比妥类、抗生素（红霉素、庆很多药物可使碱性磷酸酶增高，如巴比妥类、抗生素（红霉素、庆大霉素、氯霉素、
35、卡那霉素、氨苄青霉素等大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨苄青霉素等 常见于重症慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质、儿童甲状腺功能不常见于重症慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质、儿童甲状腺功能不全或减退、维生素全或减退、维生素C缺乏症坏血病）。营养不良、呆小症、遗传性缺乏症坏血病）。营养不良、呆小症、遗传性低磷酸酶血症。低磷酸酶血症。 增增 高高减减 低低血清碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶【ALP 或AKP 】酸性磷酸酶测定酸性磷酸酶测定【ACP】磷酸麝香草酚酞（YMP）ACP麝香草酚酞 + 无机磷碱液终止反应麝香草酚酞 呈蓝色595nm- -磷酸萘胺磷酸萘胺 ACP 酸性条件-萘胺萘胺 + 磷酸磷酸固红TR盐重氮
36、化合物重氮化合物总酸性磷酸酶活性总酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性=前列腺酸性磷酸酶活性前列腺酸性磷酸酶活性酒石酸抑制405nm参考值：成人总酶活性为参考值：成人总酶活性为09U/L，前列腺酸性磷酸酶活性为，前列腺酸性磷酸酶活性为03U/LACP含量无性别差异，新生儿出生后含量无性别差异，新生儿出生后1个月血清酶活性甚高，随年龄增长而逐渐个月血清酶活性甚高，随年龄增长而逐渐下降；青春期又可出现一活性峰值，至下降；青春期又可出现一活性峰值，至20岁降至成人水平岁降至成人水平ACP主要用于前列腺癌的辅助诊断及疗效观察指标，特别是转移时，血清主要用于前列腺癌的辅助诊断及疗效
37、观察指标，特别是转移时，血清ACP可可明显增高明显增高溶血性疾病、变形性骨炎、急性尿潴留及近期做过直肠检查者，此酶也可增高溶血性疾病、变形性骨炎、急性尿潴留及近期做过直肠检查者，此酶也可增高临临床床意意义义P53蛋蛋白白是是一一种种由由393个个氨氨基基酸酸组组成成的的含含磷磷蛋蛋白白，位位于于细细胞胞核核。研研究究发发现现在在癌癌旁旁正正常常和和鳞鳞状状化化生生的的支支气气管管上上皮皮未未见见P53蛋蛋白白表表达达，在在轻轻中中重重度度不不典典型型增增生生、原原位位癌癌、浸浸润润癌癌中中，P53蛋蛋白白 表表 达达 的的 阳阳 性性 率率 逐逐 渐渐 升升 高高 ， 表表 明明P 5 3基基
38、 因因 与与 肺肺 癌癌 发发生有关生有关对对P53基基因因的的不不同同类类型型肿肿瘤瘤中中突突变变频频率率检检测测结结果果，鳞鳞癌癌为为63.6%，腺腺癌癌为为65%，发发现现P53蛋蛋白白在在不不同同分分化化程程度度肺肺癌癌组组织织之之间间无无显显著著性性差差异异，但但在在肺肺鳞鳞癌癌组组织织中中随随分分化化程程度度降降低低P53表表达达却却增增强强，认认为为P53蛋蛋白白与与肺肺鳞鳞癌癌的的关关系系可可能能较较肺肺腺腺癌癌更更为为密密切切。而而且且在在肺肺鳞鳞癌癌伴伴有有和和不不伴伴有有淋淋巴巴结结转转移移病病例例中中，P53表表达达无无显显著著性性差差异异，而而肺肺腺腺癌癌中中伴伴有有
39、与与不不伴伴有有淋淋巴巴结结转转移移者者P53表表达达 具具 有有 显显 著著 性性 差差 异异 ， 提提 示示P 5 3过过 度度 表表 达达 与与 肺肺 腺腺 癌癌 淋淋巴结转移有关巴结转移有关P53蛋白蛋白鳞癌鳞癌P53细胞核阳性细胞核阳性bcl-2蛋蛋白白是是原原癌癌基基因因bcl-2编编码码的的一一种种能能调调节节细细胞胞死死亡亡而而不不影影响响细细胞胞增增殖殖的的蛋蛋白白质质，1993年年Pezzella等等研研究究bcl-2在在NSCLC患患者者中中的的表表达达与与预预后后之之间间的的关关系系。该该实实验验采采用用bcl-2特特异异性性单单克克隆隆抗抗体体及及免免疫疫组组化化染染
40、色色测测定定80例例肺肺鳞鳞癌癌及及42例例肺肺腺腺癌癌患患者者肿肿瘤瘤组组织织中中bcl-2蛋蛋白白。结结果果25%(20/80)的的鳞鳞癌癌患患者者及及12%(5/42)的的腺腺癌癌患患者者bcl-2蛋蛋白白阳阳性性，在在邻邻近近的的正正常常呼呼吸吸道道上上皮皮中中，bcl-2蛋蛋白白仅仅存存在在于于基基底底细细胞胞。bcl-2蛋蛋白白阳阳性性患患者者的的5年年生生存存率率高高于于阴阴性性患患者者(P0.1)，年年龄龄为为60岁岁或或60岁岁以以上上bcl-2蛋蛋白白阳阳性性患患者者的的预预后后最最好好(P0.02)。该该研研究究表表明明，原原癌癌基基因因bcl-2在在肺肺癌癌患患者者中中
41、发发生生异异常常表表达达，其其表表达达与与预预后后有有一一定定关关系系原癌基因原癌基因bcl-2蛋白蛋白肿瘤标志物的组合应用肿瘤标志物的组合应用-标志标志 CEA ARP CA19-9 CA72-4 CA125 CA15-3 SCC HCG 肿瘤肿瘤结肠结肠 胰腺胰腺 胃胃 食道食道 肝脏肝脏 胆囊胆囊 乳腺乳腺 卵巢卵巢 子宫颈子宫颈 绒毛膜绒毛膜 肿瘤标志物的组合应用肿瘤标志物的组合应用-标志标志 CEA ARP NSE SCC CYFRA21-1 HCG PSA TPA Calcitonin HTG 肿瘤肿瘤肺（肺（SCLC） 肺（肺（NSCLS） 胚胎细胞胚胎细胞 前列腺前列腺 膀胱膀
42、胱 甲状腺甲状腺 C-细胞细胞 耳鼻咽喉耳鼻咽喉 临床检测肿瘤标志物试验方法进展临床检测肿瘤标志物试验方法进展单相琼脂扩散法单相琼脂扩散法双相琼脂扩散法双相琼脂扩散法血凝法血凝法对流电泳法对流电泳法火箭电泳法火箭电泳法放射免疫法放射免疫法（RIA）免疫放射法免疫放射法（IRMA） ELISA法法斑点法斑点法金标法金标法荧光免疫法荧光免疫法化学发光法化学发光法（CLIA）电化学发光法电化学发光法（ECLIA）分子生物学分子生物学双相琼脂扩散法双相琼脂扩散法单相琼脂扩散法单相琼脂扩散法抗抗体体与与凝凝胶胶混混合合后后，装装于于小小玻玻璃璃管管中中，待待凝凝固固后后加加入入抗抗原原溶溶液液，使使其其
43、扩扩散散入入凝凝胶胶与与抗抗体体反反应应形形成成环环状状乳乳白白色色沉沉淀淀带带 一一种种抗抗原原或或抗抗体体混混合合物物成成分分的的定定性性与与定定量量的的分分析析方方法法。通通常常采采用用凝凝胶胶作作为为支支持持介介质质，让让抗抗原原与与抗抗体体混混合合物物在在介介质质中中互互相相扩扩散散，相相 互互 反反 应应 形形 成成 沉沉 淀淀 弧弧 线线 或或 沉沉 淀淀 弧弧 带带 血凝法血凝法细菌和红细胞等颗粒性抗原，当细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异结合后，在适量与相应抗体特异结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称集，出
44、现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应为凝集反应。反应中的抗原称为。反应中的抗原称为凝集原（凝集原（agglutinogen），抗体），抗体称为凝集素（称为凝集素（agglutinin）根据凝集反应的原理，以后又发根据凝集反应的原理，以后又发展建立了，各种间接凝集试验、展建立了，各种间接凝集试验、间接凝集抑制试验以及固相免疫间接凝集抑制试验以及固相免疫吸附血凝试验等新方法吸附血凝试验等新方法 胶乳微粒免疫检测技术胶乳微粒免疫检测技术是是在在胶胶乳乳凝凝集集定定性性试试验验基基础础上上发发展展建建立立的的-种种非非放放射射性性均均相相免免疫疫测测定定法法，可可以以对对各各种种微微量量的的抗抗原原物物质
45、质和和小小分分子子半半抗抗原原(加加药药物物、团团体体激激素素等等)进进行行精精确确的的定定量量测测定定。根根据据特特异异性性抗抗体体致致敏敏的的胶胶乳乳微微粒粒(一一般般为为直直径径约约1m的的聚聚苯苯乙乙烯烯胶胶乳乳)，与与待待测测标标本本中中的的相相应应抗抗原原相相遇遇时时发发生生凝凝集集反反应应，胶胶乳乳凝凝集集程程度度与与被被测测物物的的浓浓度度呈呈函函数数关关系系，由由此此可可测测出出标标本本中中待待测测物物的的含含量量。测测定定方方法法主主要要有有粒粒子子计数法和浊度法两种计数法和浊度法两种 对流免疫电泳对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis,
46、CIEP) 是是将将双双向向免免疫疫扩扩散散与与电电泳泳相相结结合合的的一一种种技技术术。在在pH8.6的的缓缓冲冲液液中中，蛋蛋白白质质抗抗原原带带负负电电荷荷向向正正极极泳泳动动；而而抗抗体体大大部部分分属属于于Ig，由由于于分分子子量量大大，暴暴露露的的极极性性基基团团较较少少，在在离离子子琼琼脂脂中中泳泳动动缓缓慢慢，同同时时受受电电渗渗作作用用的的影影响响向向负负极极泳泳动动 (电电渗渗是是指指在在电电场场中中液液体体对对于于一一个个固固定定固固体体的的相相对对移移动动。琼琼脂脂是是一一种种酸酸性性物物质质，在在碱碱性性溶溶液液中中带带负负电电荷荷，而而与与它它接接触触的的溶溶液液带
47、带正正电电荷荷，因因此此液液体体向向负负极极泳泳动动，产产生生电电渗渗) 在在抗抗原原抗抗体体相相遇遇的的最最适适比比例例处处形形成成乳乳白白色色沉沉淀淀线线。由由于于电电场场的的作作用用，限限制制了了抗抗原原、抗抗体体的的自自由由扩扩散散，而而使使其其定定向向泳泳动动，因因而而增增加加了了试试验验的的灵灵敏敏度度，并并缩缩短短反反应应时时间间。此此法法操操作作简简便便，仅仅需需3060分分钟钟，灵灵敏敏度度比比双双向向扩扩散散 高高1 0 1 5倍倍 ； 但但 缺缺 点点 是是 特特 异异 性性不如双向琼脂扩散高不如双向琼脂扩散高 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(rocketimmunoelect
48、rophoresis，RIEP)是是将将单单向向免免疫疫扩扩散散和和电电泳泳相相结结合合的的一一种种定定量量检检测测技技术术。电电泳泳时时，含含于于琼琼脂脂凝凝胶胶中中的的抗抗体体不不发发生生移移动动，而而在在电电场场的的作作用用下下促促使使样样品品中中的的抗抗原原向向正正极极泳泳动动。当当抗抗原原与与抗抗体体分分子子达达到到适适当当比比例例时时，形形成成一一个个形形状状如如火火箭箭的的不不溶溶性性免免疫疫复复合合物物沉沉淀淀峰峰，峰峰的的高高度度与与捡捡样样中中的的抗抗原原浓浓度度呈呈正正相相关关。因因此此，当当琼琼脂脂中中抗抗体体浓浓度度固固定定时时，以以不不同同稀稀释释度度标标准准抗抗原
49、原泳泳动动后后形形成成的的沉沉淀淀峰峰为为纵纵坐坐标标，抗抗原原浓浓度度为为横横坐坐标标，绘绘制制标标准准曲曲线线。根根据据样样品品的的沉沉淀淀峰峰长长度度即即可可计计算算出出待待测测抗抗原原的的含含量量；反反之之，当当琼琼脂脂中中抗抗原原浓浓度度固固定定时时，便便可可测测定定待待测测抗抗体体的的含含量量(即即反反向向火火箭箭免免疫疫电电泳泳) 竞争法竞争法双抗体夹心法双抗体夹心法间接法间接法 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验1971年年瑞瑞典典学学者者Engvail和和Perlmannn,荷荷兰兰学学者者Van Weerman和和Schuurs分分别别报报道道将将免免疫疫技技术术发发展展为为
50、检检测测体体液液中中微微量量物物质质的的固固相相免免疫疫测测定定方方法法，称称为为酶酶联联免免疫疫吸吸附附试试验验)。最最初初发发展展的的免免疫疫酶酶测测定定方方法法。是是使使酶酶与与抗抗体体或或抗抗原原结结合合，用用以以检检查查组组织织中中相相应应的的抗抗原原或或抗抗体体的的存存在在。后后来来发发展展为为将将抗抗原原或或抗抗体体吸吸附附于于固固相相载载体体，在在载载体体上上进进行行免免疫疫酶酶染染色色，底底物物显显色色后后用用肉肉眼眼或或分分光光光光度度计计判判定定结结果果。这这种种技技术术就就是是目目前前应应用用最最广广的的酶酶联联免免疫疫吸吸附试验，俗称附试验，俗称ELISA (enzy
51、me linked immunosorbant assay) 免疫印迹技术免疫印迹技术免免疫疫印印迹迹(immunoblotting)又又称称蛋蛋白白质质印印迹迹(Western blotting)，是是一一种种借借助助特特异异性性抗抗体体鉴鉴定定抗抗原原的的有有效效方方法法。该该法法是是在在凝凝胶胶电电泳泳和和固固相相免免疫疫测测定定技技术术基基础础上上发发展展起起来来的的一一种种新新的的免免疫疫生生化化技技术术。将将含含有有目目标标蛋蛋白白(抗抗原原)的的样样品品首首先先用用SDS-聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳(SDS-PAGE)或或非非变变性性电电泳泳(Native-PAGE)等
52、等分分离离后后，通通过过转转移移电电泳泳原原位位转转印印至至硝硝酸酸纤纤维维素素膜膜或或其其它它膜膜的的表表面面，然然后后将将膜膜表表面面的的蛋蛋白白质质再再用用抗抗原原抗抗体体反反应应进行特异性检测进行特异性检测 免疫微粒技术免疫微粒技术是是利利用用高高分分子子材材料料合合成成一一定定粒粒度度大大小小的的固固相相微微粒粒作作为为载载体体，包包被被上上具具有有特特异异性性亲亲和和力力的的各各种种免免疫疫活活性性物物质质(抗抗原原或或抗抗体体)，使使其其致致敏敏为为免免疫疫微微粒粒，用用于于免免疫疫学学及及其其他他生生物物学学检检测测与与分分离离的的一一项项技技术术。作作为为载载体体的的微微粒粒
53、通通常常是是以以某某种种高高分分子子有有机机单单体体为为原原料料，经经过过乳乳液液聚聚合合、悬悬浮浮聚聚合合及及辐辐照照聚聚合合等等高高分分子子聚聚合合方方法法制制备备而而成成。由由于于制制备备材材料料及及工工艺艺不不同同，微微粒粒的的种种类类繁繁多多，现现已已制制成成惰惰性性微微粒粒如如聚聚苯苯乙乙烯烯胶胶乳乳微微粒粒、活活性性微微粒粒如如羧羧化化聚聚苯苯乙乙烯烯微微粒粒、磁磁性性微微粒粒及及标标记记微微粒粒(用用同同位位素素、荧荧光光素素或或酶酶标标记记)等等四四大大类类微微粒粒，数数量量多多达达几几十十种种。将将制制备备好好的的微微粒粒与与抗抗原原(或或抗抗体体)经经物物理理吸吸附附、化
54、化学学偶偶联联及及生生物物素素亲亲合合亲亲桥桥联联法法等等致致敏敏方方法法形形成成免免疫疫微微粒粒。广广泛泛应应用用于于各各种种可可溶溶性性大大分分子子物物质质的的检检测测、分分离离与与纯纯化化、细细胞胞标标记记与与识识别别等等。近近年年来来，微微粒粒技技术术在在核核酸酸分分子子杂杂交交、DNA与与RNA的的 分分 离离 及及PCR等等 研研 究究 领领 域域亦显示出广阔的应用前景亦显示出广阔的应用前景 免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学技术是是采采用用荧荧光光素素标标记记的的已已知知抗抗体体(或或抗抗原原)作作为为探探针针，检检测测待待测测组组织织、细细胞胞标标本本中中的的靶靶抗抗原原(或
55、或抗抗体体)，形形成成的的抗抗原原抗抗体体复复合合物物带带有有荧荧光光素素，在在荧荧光光显显微微镜镜下下，由由于于受受高高压压汞汞灯灯光光源源的的紫紫外外光光照照射射，荧荧光光素素发发出出明明亮亮的的荧荧光光，这这样样就就可可以以分分辨辨出出抗抗原原(或或抗抗体体)的的所所在在位位置置及及其其性性质质，并并可可利利用用荧荧光光定定量量技技术术计计算算抗抗原原的的含含量量，以以达达到到对对抗抗原原物物质质定定位位、定定性性和和定定量量测测定定的的目目的的 免疫组织化学技术免疫组织化学技术又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原的特异性
56、抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，抗体反应和组织化学的呈色反应，对相对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术项新技术。把免疫反应的特异性、组织。把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜包括荧光显微镜、电子显微镜)的的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等激素、病原体以及受体等) 。全过程包。全过程包括：括：抗原的提取与纯化
57、；抗原的提取与纯化； 免疫动物免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；的纯化； 将显色剂与抗体结合形成标将显色剂与抗体结合形成标记抗体；记抗体； 标本的制备；标本的制备； 免疫细胞化免疫细胞化学反应以及呈色反应；学反应以及呈色反应； 观察结果观察结果 免疫电镜技术免疫电镜技术( I m m u n e e l e c t r o n microscopy，IEM)是是将将抗抗原原抗抗体体反反应应的的特特异异性性与与电电子子显显微微镜镜的的高高分分辨辨力力相相结结合合，在在亚亚细细胞胞和和超超微微结结构构水水平平上上对对抗抗原原物物质质进进行行定定位位
58、 分分 析析 的的 一一 种种 高高 度度 精精 确确 、灵灵敏敏的的方方法法。特特异异性性抗抗体体用用电电子子致致密密物物质质，如如铁铁蛋蛋白白、胶胶体体金金等等标标记记后后，使使之之与与组组织织超超薄薄切切片片中中的的抗抗原原结结合合，在在电电镜镜下下观观察察到到标标记记物物所所在在位位置置，即即为为抗抗原原抗抗体体反反应应的的部部位位。首首创创此此 项项 技技 术术 的的 是是Singer (1959)，他他最最先先使使用用铁铁蛋蛋白标记抗体的方法白标记抗体的方法 流式细胞仪流式细胞仪(Flow cytometer，FCM)能能快快速速、精精确确地地测测量量通通过过检检测测区区液液流流中
59、中的的各各种种粒粒子子。这这些些粒粒子子可可以以是是细细胞胞、大大分分子子、乳乳胶胶滴滴或或其其他他粒粒子子。流流式式细细胞胞术术是是对对单单细细胞胞定定量量分分析析和和分分选选的的新新技技术术。通通常常是是应应用用一一个个激激光光和和有有关关的的光光学学检检测测系系统统来来收收集集这这些些信信号号以以供供分分析析。其其检检测测速速度度之之快快，统统计计学学精精度度之之高高，是是其其他他方方法法无无法法比比拟拟的的。它它可可以以研研究究一一个个细细胞胞从从新新生生到到死死亡亡，从从细细胞胞膜膜到到脑脑浆浆和和核核内内物物质质及及染染色色体体，还还可可以以探探讨讨不不同同物物质质之之间间的的关关
60、系系。它它在在免免疫疫学学、肿肿瘤瘤学学、细细胞胞遗遗传传学学、病病理理学学、放放射射生生物物学学 等等 学学 科科 中中 已已形形 成成了了 独独立的学科分支立的学科分支 使用程序使用程序 免疫磁性微粒分离与纯化技术免疫磁性微粒分离与纯化技术 磁磁 性性 微微 粒粒(magnetic microspheres, MMS) 是是80年年代代初初，用用高高分分子子材材料料和和金金属属离离子子为为原原料料，聚聚合合而而成成的的一一种种以以金金属属离离子子为为核核心心，外外层层均均匀匀地地包包裹裹高高分分子子聚聚合合体体的的固固相相微微粒粒。在在液液相相中中，受受外外加加磁磁场场的的吸吸引引作作用用
61、，MMS可可快快速速沉沉降降而而自自行行分分离离，无无需需进进行行离离心心沉沉淀淀。因因此此，将将MMS应应用用于于免免疫疫检检测测，可可使使操操作作过过程程大大为为简简化化。经经过过特特异异性性抗抗体体包包被被制制成成免免疫疫MMS，与与检检样样中中的的抗抗原原结结合合形形成成免免疫疫MMS-靶靶分分子子(或或靶靶细细胞胞)复复合合体体，通通过过外外加加磁磁场场的的作作用用即即可可与与其其他他成成分分分分离离开开来来。再再以以适适当当方方式式使使复复合合体体解解离离，在在磁磁场场吸吸引引下下除除去去游游离离的的免免疫疫MMS， 即即可可获获得得纯纯化化的的靶靶分分子子或或细细胞胞 放射免疫技
62、术放射免疫技术 是利用放射性核素可探测的灵敏度、精确度和抗原抗体反应特异是利用放射性核素可探测的灵敏度、精确度和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及性相结合的一种免疫技术。灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量小是其优点；但核素的放射性，对工作人员和环境易造成危试剂用量小是其优点；但核素的放射性，对工作人员和环境易造成危害和污染，是其缺点害和污染，是其缺点 放射免疫分析放射免疫分析【RIA】是是标记抗原标记抗原（Ag*）和非标记抗原（）和非标记抗原（Ag）对有限量的）对有限量的特异性抗体特异性抗体竞争性结合反应竞争性结合反应Ag*AgAb Ag*A
63、bAg* AgAb第二Ab法聚乙二醇沉淀法PR法活性炭吸附法分离 免疫放射分析免疫放射分析【IRMA】是是非竞争性免疫结合反应非竞争性免疫结合反应，用过量的放射性核素，用过量的放射性核素标记抗体标记抗体（Ab*）与待测抗原反应，待充分反应后，除去游离的与待测抗原反应，待充分反应后，除去游离的Ab*，AgAb*Ab*结合结合物的放射性强度与待测抗原呈正比关系物的放射性强度与待测抗原呈正比关系AgAb*=AgAb*Ab*Ag双点位IRMA单点位IRMAAg固相抗原Ag放射免疫分析放射免疫分析【RIA】模式模式放射免疫分析广义还包括放射受体分析及放射配体结合分析放射免疫分析广义还包括放射受体分析及放
64、射配体结合分析放射免疫分析常用的放射性核素有放射免疫分析常用的放射性核素有125I、130I、3H、14C等等化学发光免疫分析化学发光免疫分析化化学学发发光光免免疫疫分分析析包包含含两两个个部部分分, 即即免免疫疫反反应应系系统统和和化化学学发发光光分分析析系系统统。化化学学发发光光分分析析系系统统是是利利用用化化学学发发光光物物质质经经催催化化剂剂的的催催化化和和氧氧化化剂剂的的氧氧化化, 形形成成一一个个激激发发态态的的中中间间体体, 当当这这种种激激发发态态中中间间体体回回到到稳稳定定的的基基态态时时, 同同时时发发射射出出光光子子(hM) , 利利用用发发光光信信号号测测量量仪仪器器测
65、测量量光光量量子子产产额额。免免疫疫反反应应系系统统是是将将发发光光物物质质(在在反反应应剂剂激激发发下下生生成成激激发发态态中中间间体体) 直直接接标标记记在在抗抗原原(化化学学发发光光免免疫疫分分析析) 或或抗抗体体(免免疫疫化化学学发发光光分分析析) 上上, 或或酶作用于发光底物酶作用于发光底物 进样系统进样系统反应池反应池PMT放大器放大器记录仪记录仪负高压负高压 检测系统检测系统化学发光分析法仪器方框图化学发光分析法仪器方框图PMT:光电倍增管 电化学发光技术电化学发光技术用先进的电化学发光技术用先进的电化学发光技术(ECL),是一种在电是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反
66、应极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上实际上包括了电化学和化学发光两个过程包括了电化学和化学发光两个过程,由电启动发光反应由电启动发光反应,因此可对反应进行精确因此可对反应进行精确控制控制,其采用其采用Ru(bpy)32+作为标记物作为标记物,结合结合了标记物的生物分子与配体发生特异的结合了标记物的生物分子与配体发生特异的结合反应后进入流动测量室反应后进入流动测量室,此时此时,电发光过程被电发光过程被启动。基本过程如下启动。基本过程如下:含三丙胺含三丙胺(TPA)的缓冲的缓冲液进入测量室液进入测量室,同时电极加电同时电极加电,化学发光剂化学发光剂基因芯片技术基因芯片技术基因芯片（基因
67、芯片（Gene Chip）通常指）通常指DNA芯片，其芯片，其基本原理是将指大量寡核苷酸分子固定于支持基本原理是将指大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量 蛋白芯片技术蛋白芯片技术蛋蛋白白芯芯片片是是将将大大量量蛋蛋白白质质分分子子按按预预先先设设置置的的排排列列固固定定于于一一种种载载体体表表面面行行成成微微阵阵列列，根根据据蛋蛋白白质质分分子子间间特特异异性性结结合合的的原原理理，构构建建微微流流体体生生物物化化学学分分析析系系统统，以以实实现
68、现对对生生物物分分子子的的准准确确、快快速速、大大 信信 息息 量量 的的 检检 测测605040302010 0肿瘤患者肿瘤患者 % 7.0 7.0 4.2 7.0 7.4临界值临界值 (ng/ml)5033282722在实体肿瘤患者中在实体肿瘤患者中,CEA特异性为特异性为95%时的敏感性时的敏感性参考值范围：参考值范围：3ng/ml在实体肿瘤患者中在实体肿瘤患者中CEA表达状况表达状况100 80 60 40 20(%)959127142293900 15 15100 1001000 100010,000 10,000100,000原发性肝细胞癌原发性肝细胞癌肝转移癌肝转移癌AFP(ng
69、/ml) 原发性肝细胞癌原发性肝细胞癌和其他恶性肿瘤肝转移癌中和其他恶性肿瘤肝转移癌中AFP表达状况表达状况参考值范围：参考值范围：15ng/ml巨型快多结节型介入介入原发性肝细胞癌和肝转移癌原发性肝细胞癌和肝转移癌AFP和和CEA的表达的表达100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 095992507213(%)AFP15ng/mlCEA3ng/mlCEA10ng/ml原发性肝细胞癌原发性肝细胞癌肝转移癌肝转移癌参考值范围：参考值范围：3ng/ml参考值范围：参考值范围：15ng/ml肺癌中肿瘤标志物的应用肺癌中肿瘤标志物的应用治疗前治疗前治疗后复查治疗后复查组织类型不明
70、确组织类型不明确腺癌腺癌鳞状细胞癌鳞状细胞癌小细胞肺癌小细胞肺癌大细胞肺癌大细胞肺癌胃癌单项或联合测定胃癌单项或联合测定CEA、CA19-9及及CA72-4的敏感性的敏感性80604020 0敏感性（敏感性（%）272966406672CEA （ 10.1 ）CA19-9 （ 96 ）CA72-4 （ 2.4 ）CA19-9 （ 107 ）CEA （ 10.1 ）CA72-4 （ 2.4 ）CA19-9 （ 260 ）CA72-4 （ 2.4 ）CEA （ 10.4 ）胃癌特异性胃癌特异性95%时时核医学核医学用用ROC曲线解读肺鳞状细胞癌曲线解读肺鳞状细胞癌TM的特异性的特异性1.00.80
71、.60.40.2 01.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0敏感性敏感性(%)特异性特异性(%)CYFRA21-1 CEASCCNSECYFRA21-1对于鳞状细胞肺癌的敏感性可达对于鳞状细胞肺癌的敏感性可达60%，高于，高于SCC，也优于，也优于其他两种其他两种TM，是非小细胞肺癌的，是非小细胞肺癌的TM下面积越大，敏感性与特异性越好血清血清2-m浓度对于生存时间的影响浓度对于生存时间的影响100 80 60 40 20 00 2 4 6 8 10 122-m3.0mg/L3.0 2-m5mg/L2-m5mg/L生存率生存率(%)第一次调查后的年数第一次调查后的年数参考值范围：参考值范围：
72、1.22.5mg/L各种类型肿瘤发生率各种类型肿瘤发生率 (不考虑性别不考虑性别)100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0271318751252124597073843475467肺肺乳乳腺腺结结直直肠肠胃胃前前列列腺腺卵卵巢巢胰胰腺腺膀膀胱胱宫宫颈颈发生率发生率5年生存率年生存率数据来自数据来自the American Cancer Society肿瘤标志物测定的频率肿瘤标志物测定的频率首次治疗前首次治疗前(手术、放疗、化疗、激素治疗）手术、放疗、化疗、激素治疗）各种治疗后，如术后各种治疗后，如术后210天天（根据肿瘤生物周期而定）（根据肿瘤生物周期而定）首次治疗后
73、首次治疗后12年年3个月检查一次个月检查一次首次治疗后首次治疗后35年年6个月检查一次个月检查一次任何治疗前任何治疗前怀疑有复发或转移怀疑有复发或转移重新分期重新分期肿瘤标志物明显增高后肿瘤标志物明显增高后46周周影响肿瘤标志物浓度的因素影响肿瘤标志物浓度的因素 肝肾功能衰竭、胆道淤积，肝肾功能衰竭、胆道淤积，CA19-9浓度可达浓度可达3000U/ml 直肠指检、膀胱镜、留置尿管等可导致直肠指检、膀胱镜、留置尿管等可导致PSA、PAP值增高值增高 化疗药物作用使肿瘤标志物释放，影响化疗药物作用使肿瘤标志物释放，影响TM检测浓度检测浓度 吸烟者血清吸烟者血清CEA可高达可高达1020ng/ml
74、 储存不当可使碱磷酶水平下降储存不当可使碱磷酶水平下降 放置时间超过放置时间超过1小时，小时，NSE由于血小板释放明显增高由于血小板释放明显增高 溶血时红细胞可释放溶血时红细胞可释放NSE；黄疸可使；黄疸可使PSA假阳性增加假阳性增加 唾液污染标本对唾液污染标本对SCC、CA19-9的影响大的影响大 顺铂、丝裂霉素、雌二醇、顺铂、丝裂霉素、雌二醇、VitC等导致等导致PSA假性增高假性增高临床用于筛查和判断预后价值的临床用于筛查和判断预后价值的TMAFPAFP用于肝硬化患者的筛查用于肝硬化患者的筛查降钙素用于可疑甲状腺髓样癌的筛查降钙素用于可疑甲状腺髓样癌的筛查AFPAFP和和HCGHCG用于
75、可疑胚胎细胞肿瘤的筛查用于可疑胚胎细胞肿瘤的筛查单克隆单克隆IgIg及本周氏蛋白对可疑多发性骨髓瘤的筛查及本周氏蛋白对可疑多发性骨髓瘤的筛查PSAPSA对对5050岁以上有前列腺疾病患者的筛查岁以上有前列腺疾病患者的筛查CEACEA对大肠癌治疗跟踪对大肠癌治疗跟踪AFPAFP和和HCGHCG对胚胎细胞肿瘤的治疗跟踪对胚胎细胞肿瘤的治疗跟踪2-M2-M对多发性骨髓瘤的治疗跟踪对多发性骨髓瘤的治疗跟踪科学应用科学应用杜绝浪费杜绝浪费避免伤害避免伤害正确分析、解释肿瘤标志物结果正确分析、解释肿瘤标志物结果检查治疗效果检查治疗效果 根据根据TMTM变化可提早反映临床治疗是否有效变化可提早反映临床治疗是
76、否有效监测疾病进程监测疾病进程 如如CEACEA对大肠癌可提早对大肠癌可提早6 6个月提示复发和转移个月提示复发和转移鉴别残余肿瘤鉴别残余肿瘤 卵巢癌术后卵巢癌术后CA125CA125持续或继发性增高持续或继发性增高早期发现早期发现 肝硬化、前列腺癌、大肠多发性息肉等肝硬化、前列腺癌、大肠多发性息肉等判断某些肿瘤预后判断某些肿瘤预后 如多发性骨髓瘤预后直接干预治疗方案如多发性骨髓瘤预后直接干预治疗方案结结 语语 正确使用肿瘤标志物对于患者帮助正确使用肿瘤标志物对于患者帮助巨大，甚至可以降低费用，相反，若巨大，甚至可以降低费用，相反，若使使用错误，则会给患者造成沉重的经济负用错误，则会给患者造成沉重的经济负担和心理创伤。不能正确地评价检测结担和心理创伤。不能正确地评价检测结果甚至会导致错误的治疗策略果甚至会导致错误的治疗策略天津医科大学附属肿瘤医院检验科天津医科大学附属肿瘤医院检验科
