《核增生李斯特氏菌检测概述ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《核增生李斯特氏菌检测概述ppt课件（47页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、单核增生李斯特氏菌检测概述1 1内容简介李斯特氏菌属单核增生李斯特氏菌生物学特性流行病学致病性实验室危害及其预防检测程序快速检测方法2 2李斯特氏菌属 李斯特氏菌属（李斯特氏菌属（ListeriaListeria ）普遍存在于）普遍存在于环环境中，最新境中，最新的分的分类类学研究表明，其分学研究表明，其分为为六个种：六个种：单单核增生李斯特氏菌（核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenesListeria monocytogenes）伊氏李斯特氏菌（伊氏李斯特氏菌（Listeria ivanoviiListeria ivanovii）无害李斯特氏菌（无害李斯特氏菌（Liste
2、ria innocuaListeria innocua）斯氏李斯特氏菌（斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeriListeria seeligeri）威氏李斯特氏菌（威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeriListeria welshimeri）格氏李斯特氏菌（格氏李斯特氏菌（Listeria grayiListeria grayi） 在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单单核核增生李斯特氏菌增生李斯特氏菌和和伊氏李斯特氏菌伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他可以引起老鼠和其他动动物物发发病。但是，其中通常只有病。但是，其中
3、通常只有单单核增生李斯特氏菌和人核增生李斯特氏菌和人类类的李斯特氏菌症（的李斯特氏菌症（listeriosislisteriosis）相关。因此，李斯特氏菌中）相关。因此，李斯特氏菌中最有最有检测检测意意义义的是的是单单核增生李斯特氏菌。核增生李斯特氏菌。 3 3生物学特性-菌体形态及染色特征革革兰兰氏氏阳性阳性；小的、小的、类类似球形似球形杆菌杆菌，0.40.40.50.520.50.52mm，在有在有些培养基中稍弯，两端些培养基中稍弯，两端钝圆钝圆，单单个、成短个、成短链链、细细胞彼此胞彼此连连成成V V形，或成群的形，或成群的细细胞沿胞沿长轴长轴方向平行排方向平行排列，在列，在较较老的或
4、生老的或生长长不良的培养物中，可能形成不良的培养物中，可能形成丝丝状；状；20-2520-25以以4 4根周生根周生鞭毛鞭毛运运动动，在，在3737只有只有较较少的少的鞭毛或鞭毛或1 1根鞭毛；根鞭毛；无芽无芽孢孢、无、无荚荚膜。膜。4 45 5生物学特性-培养特性兼性厌氧；在20-25培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。生长温度范围为2-42（也有报道在0能缓慢生长），最适培养温度为35-37。pH范围pH4.4-pH9.6。6 6生物学特性-培养特性在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。在5-7%
5、的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的-溶血环。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)琼脂上，用45角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。 7 7生物学特性-生化反应触触酶酶阳性，阳性，氧化氧化酶酶阴性。阴性。能能发发酵多种糖酵多种糖类类，产产酸不酸不产产气，如气，如发发酵葡萄糖、酵葡萄糖、乳糖、水乳糖、水杨杨素、麦芽糖、素、麦芽糖、鼠李糖鼠李糖、七叶苷七叶苷、蔗糖、蔗糖（迟发迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发发酵酵木木糖糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧侧金金盏盏花醇、棉花醇、棉子糖
6、、子糖、卫卫矛醇和矛醇和纤维纤维二糖。二糖。不利用枸不利用枸橼橼酸酸盐盐，40%40%胆汁不溶解，胆汁不溶解，吲哚吲哚、硫化、硫化氢氢、尿素、明胶液化、硝酸、尿素、明胶液化、硝酸盐还盐还原、原、赖赖氨酸、氨酸、鸟鸟氨酸均阴性，氨酸均阴性，VPVP、甲基、甲基红试验红试验和精氨酸水解阳性。和精氨酸水解阳性。 8 8生物学特性-血清型根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”。致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。 9
7、9生物学特性-抵抗力该该菌菌对对理化因素抵抗力理化因素抵抗力较强较强，在土壤、，在土壤、粪粪便、青便、青储饲储饲料和食品中能料和食品中能长长期存活；期存活；对对碱和碱和盐盐抵抗力抵抗力强强，60-7060-70经经5-20min5-20min可可杀杀死，死，70%70%酒精酒精5min5min、2.5%2.5%石炭酸、石炭酸、2.5%2.5%氢氢氧化氧化钠钠、2.5%2.5%福福尔马尔马林林20min 20min 可可杀杀死此菌；死此菌；湿湿热灭热灭菌（菌（121121，至少，至少15min15min）和干）和干热灭热灭菌菌（160-170160-170，至少，至少1hr1hr）可）可杀灭该杀
8、灭该菌，菌，对对紫外紫外线线和和 射射线线敏感敏感；该该菌菌对对青霉素、氨青霉素、氨苄苄青霉素、四青霉素、四环环素（已素（已产产生抗生抗性）、氨基糖苷性）、氨基糖苷类类、氯氯霉素均敏感。霉素均敏感。 1010流行病学分布：广泛存在于自然界中，土壤、地表水、污水、废水、青储饲料、动植物及其食品中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播寄主范围：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳类和昆虫1111流行病学据报道，有1-10%的人类肠道中存在单核增生李斯特氏菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。相关食品：鲜奶、巴氏消毒奶、奶
9、酪（尤其是软奶酪）、冰激凌、生的蔬菜、发酵过的生肉制作的香肠、生的和加工过的禽肉、各种生的肉类、生的和烟熏的鱼肉。约有85-90%的病例是由被污染的食品引起的。 121219961996年至年至19991999年，因单核增生李斯特氏菌回收的食年，因单核增生李斯特氏菌回收的食品种类（来源：品种类（来源：USDAUSDA及及FDAFDA报告）报告）1313致病性及其治疗该该病的病的临临床表床表现现，健康成人个体出，健康成人个体出现轻现轻微微类类似流似流感症状，新生儿、孕感症状，新生儿、孕妇妇、免疫缺陷患者表、免疫缺陷患者表现为现为呼呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓脓性性
10、结结膜炎、膜炎、发发热热、抽搐、昏迷、抽搐、昏迷、自然流自然流产产或死或死婴婴、脑脑膜炎、膜炎、败败血症直至死亡。血症直至死亡。由由该该菌造成的菌造成的脑脑膜炎的致死率可高达膜炎的致死率可高达70%70%，败败血血症的死亡率达症的死亡率达50%50%，围产围产期或新生儿感染的死亡期或新生儿感染的死亡率超率超过过80%80%，怀怀孕期孕期妇妇女的感染，母女的感染，母亲亲通常能存通常能存活下来。活下来。抗生素治抗生素治疗疗，用青霉素或氨，用青霉素或氨苄苄青霉素注射青霉素注射给药给药，或与氨基糖苷或与氨基糖苷类类抗生素一起用抗生素一起用药药。1414感染人群感染感染剂剂量未知，但与量未知，但与该该菌
11、的毒力和易感人群的年菌的毒力和易感人群的年龄龄、免疫状、免疫状态态有关。有关。易感者：易感者：孕孕妇妇/ /胎儿胎儿围产围产期和新生儿的感染；期和新生儿的感染；接受皮接受皮质质激素、抗癌激素、抗癌剂剂治治疗疗、器官移植、器官移植 治治疗疗、艾滋病患者等免疫缺艾滋病患者等免疫缺损损者；者； 癌症病人癌症病人 尤其是白血病的患者；尤其是白血病的患者；不太常不太常见见的的报报道道糖尿病、肝硬化、哮喘和糖尿病、肝硬化、哮喘和溃疡溃疡性性结肠结肠炎的患者；炎的患者；年年纪较纪较大的人；大的人；没有免疫缺陷的健康的人，食用没有免疫缺陷的健康的人，食用污污染染该该菌尤其是菌尤其是大量大量污污染染该该菌的食品
12、后，也有患病的危菌的食品后，也有患病的危险险。1515致病机理单单增李氏菌的抗原增李氏菌的抗原结结构与毒力无关，它的致病性构与毒力无关，它的致病性与毒力机理如下：与毒力机理如下： 1 1、寄生物介、寄生物介导导的的细细胞内增生，使它附着及胞内增生，使它附着及进进入入肠肠细细胞与巨噬胞与巨噬细细胞；胞； 2 2、抗活化的巨噬、抗活化的巨噬细细胞，胞，单单增李氏菌有增李氏菌有细细菌性菌性过过氧氧化物歧化化物歧化酶酶，使它能抗活化巨噬，使它能抗活化巨噬细细胞内的胞内的过过氧物氧物（为杀为杀菌的毒性游离基菌的毒性游离基团团）分解；）分解； 3 3、溶血素溶血素，即李氏杆菌素，即李氏杆菌素O O，可以从
13、培养物上清液，可以从培养物上清液中中获获得，有得，有 和和 两种，两种，为为毒力因子。毒力因子。1616实验室危害不是一种普遍的与实验室相关的传染病，目前只有少数有报道的案例发生；直接摄取是最普遍的一种感染方式，除此之外，暴露在该菌高浓度的气溶胶中，也可通过眼睛和破损的皮肤、粘膜进入体内造成感染。1717注意事项生物安全2级，操作时应有相应的防污染设施，在进行可能产生气溶胶的操作时，应在生物安全柜内完成；在直接接触有感染性的材料时，必须穿着实验服，戴手套和护目镜；怀孕的妇女应避免接触传染物。1818操作要求溅洒：使气溶胶沉降，穿着防护服装，用纸巾轻轻覆盖溅洒处，加入1%次氯酸钠溶液，由周边向中
14、心加，在清理之前要留充足的接触时间（30min）；废弃：在废弃前应先采取净化措施，高压蒸汽灭菌、化学消毒、焚烧等；储存：在有适当标记的密封容器内储存。1919检测程序-增菌 目前常用的单核增生李斯特氏菌检测增菌肉汤主要有半量Fraser肉汤、 Fraser肉汤（FB）、UVM（Modified University of Vermont broth，也叫UVM1）、LEB（Listeria enrichment broth）和BLEB（buffered Listeria enrichment broth） 2020半量Fraser肉汤和Fraser肉汤具有具有选择选择性性和和区区别别性性。加入
15、加入柠柠檬酸檬酸铁铵铁铵和和七叶灵七叶灵，起到区，起到区别别的作用。李斯特的作用。李斯特氏菌可以水解七叶灵，与培养基中的氏菌可以水解七叶灵，与培养基中的铁铁离子反离子反应应，使，使培养基培养基变变黑，可直黑，可直观观的从培养液的的从培养液的颜颜色就可以判断是色就可以判断是否有否有单单核李斯特氏菌的生核李斯特氏菌的生长长。氯氯化化锂锂、吖啶吖啶黄黄和和萘啶酮萘啶酮酸酸作作为选择为选择性因子。性因子。半量半量FraserFraser肉肉汤汤与与FraserFraser肉肉汤汤所用的添加所用的添加剂剂一一样样 半量半量FraserFraser肉肉汤汤：萘啶酮萘啶酮酸酸10mg/L10mg/L，吖啶吖
16、啶黄黄12.5mg/L12.5mg/L Fraser Fraser肉肉汤汤：萘啶酮萘啶酮酸酸20mg/L20mg/L，吖啶吖啶黄的黄的25mg/L 25mg/L 2121UVMUVM只有选择性没有区别性加入萘啶酮酸和盐酸吖啶黄，作为选择性因子。虽然其中含有七叶灵，但是没有添加柠檬酸铁铵，不能发生黑色的颜色反应。2222LEB和BLEB只有选择性没有区别性LEB是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入的丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；不含七叶灵和柠檬酸铁铵，无颜色反应BLEB是在LEB基础上加入缓冲体系：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠2323检测程序-分离分离培养基有
17、：分离培养基有：OXAOXA、PALCOMPALCOM、LPMLPM、MOXMOX等，等，但首但首选选仍然是仍然是OXAOXA。分离原理主要是基于李斯特。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有氏菌具有 D D葡萄糖苷葡萄糖苷酶酶的活性，能水解培养的活性，能水解培养基中的七叶灵，基中的七叶灵，产产生七叶苷，与生七叶苷，与铁铁离子离子产产生生颜颜色色反反应应而，使菌落而，使菌落为为棕褐色，并棕褐色，并带带有褐色有褐色晕晕圈，而圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能致病性和非致病性李斯特氏菌病都能发发生生这这种反种反应应还还有一些有一些选择选择性性显显色培养基，如色培养基，如BCMBCM、ALOAALOA
18、、CHROMagar listeriaCHROMagar listeria、RapidRapid L. monoL. mono等，其原理等，其原理主要是主要是检测检测由毒力基因由毒力基因编码编码的的溶血素溶血素，而此种溶，而此种溶血素只存在于血素只存在于单单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特属氏菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特属的其他种分开。的其他种分开。2424 OXA平板单核增生李斯特氏菌 ATCC 1911748h，35培养2525 OXA平板无害李斯特氏菌ATCC 3309048h，35培养2626检测程序-鉴定蓝蓝色
19、菌落色菌落检验检验（Henry illuminationHenry illumination）典型运典型运动动：相差：相差显显微微镜镜，轻轻微旋微旋转转或翻跟或翻跟头头 动动力力试验试验：7 7天，天，伞伞形生形生长长过过氧化氧化氢酶氢酶试验试验：阳性：阳性革革兰兰氏染色氏染色：阳性短杆菌：阳性短杆菌溶血溶血试验试验：穿刺接种血平板：穿刺接种血平板硝酸硝酸盐还盐还原原试验试验：5 5天，阴性天，阴性糖糖发发酵酵试验试验：葡萄糖、麦芽糖和七叶灵，李斯特：葡萄糖、麦芽糖和七叶灵，李斯特菌属反菌属反应应均均为为阳性，除格氏李斯特甘露醇阴性，阳性，除格氏李斯特甘露醇阴性，李斯特其他种甘露醇阴性，李斯特
20、其他种甘露醇阴性，木糖木糖和和鼠李糖鼠李糖最有最有检检测测意意义义2727动力试验2828 血平板单核增生李斯特氏菌 ATCC 1911736h，35培养2929 血平板无害李斯特氏菌 ATCC 3309036h，35培养3030 血平板伊氏李斯特氏菌 ATCC 1911924h，35培养3131单核增生李斯特氏菌检测流程25g样品样品+225ml BLEB基础（加入丙酮酸钠）基础（加入丙酮酸钠） 加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮 30 4hr划线接种划线接种OXA平板平板30 24hr和和48hr 科玛嘉李氏菌显色培养基科玛嘉李氏菌显色培养基TSA-YE分
21、纯分纯 35 24hr-48hr 35 24hr过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发酵试验（木糖、鼠李糖）酵试验（木糖、鼠李糖） API Listeria 35 24-48hr报告结果报告结果 35 18-24hr3232方法名称方法名称一次增菌一次增菌二次增菌二次增菌分离分离鉴定鉴定快速方法快速方法SN 0184-1993加工MBP30，18-24hEB30，24/48hMMA/OXA（35，24-48h）蓝色菌落；典型运动；过氧化氢酶；革兰氏染色；溶血试验；尿素酶试验；硝酸盐还原；MR-VP；三糖铁；糖发酵；动力试验；协同溶血*；血清学检验*
22、；小鼠毒力试验*无未加工EB（30，24/48h）GB/T 4789.30-2003EB（301，48h）MMA（301，24-48h）蓝色菌落；三糖铁；动力试验；染色镜检（革兰氏染色、典型运动）；生化特性（溶血反应、硝酸盐还原、尿素酶、MR-VP、糖发酵）；小鼠毒力试验；协同溶血无LB1（301，24h）LB2（301，24h）FDABLEB+Phy（30，4h）BLEB+Phy+三种抑菌剂（30，20/44h）OXA/PALOM/MOX/LPM+七叶灵+Fe3+推荐BCM /ALOA / RapidLmono /CHROMagar Listeria蓝色菌落*；典型运动或动力试验；过氧化氢酶
23、；革兰氏染色；溶血试验；硝酸盐还原*；糖发酵；协同溶血；血清学检验；小鼠毒力试验*筛选、鉴定都可以使用快速方法USDAUVM（302，222h）FB（352，26-482h）MOX（352，26-482h）初步鉴定：纯菌菌落形态；典型运动；生化鉴定：MICRO-ID Listeria或Api Listeria或BAM等方法中的传统生化反应；协同溶血遗传鉴定：核糖体RNA检测；PFGE*筛选用的快速方法必须经过确认后才可使用鉴定中用到MICRO-ID 、Api、GenProbe AccuProbe、GENE-TRAK各官方方法比较3333各官方方法比较方法名称方法名称一次增菌一次增菌二次增菌二次
24、增菌分离分离鉴定鉴定快速方法快速方法CFIAMFHPB-30LEB（UVM）（30，24/48h）MFB（35，24-48h）OXA+LPM或MOX或PALCOM典型运动或动力试验；溶血试验；甘露醇；木糖；鼠李糖；快速鉴定试剂盒*；过氧化氢酶*；革兰氏染色*；协同溶血*；血清学试验*作为鉴定的可选步骤，允许使用快速方法，如Vitek或API、Micro ID Listeria、Listera AccuprobeISO 11290-1:1996（E）半量Fraser肉汤（30，242h）Fraser肉汤（35或37，482h）OXA和PALCOM（30、35或37，24-48h，）PALCOM平
25、板微需氧或好氧条件培养蓝色菌落*；过氧化氢酶；革兰氏染色；动力试验或典型运动*；溶血试验；糖发酵试验；协同溶血；送参考实验室（血清或噬菌体分型）无NMKL No.136 2nd 1999LB（30.01.0，243h）LB（30.01.0，243h）或Fraser肉汤（37.01.0，484h）OXA和PALCOM（37.01.0，243/484h，好氧或微需氧）溶血试验；过氧化氢酶；革兰氏染色；典型运动动力试验；糖发酵试验；送参考实验室（血清、噬菌体、DNA或酶分型）允许使用经过确认的商业化生产的单核增生李斯特氏菌菌株鉴定试验，但没列明具体试剂盒名称3434红肉、禽、蛋和环境样品中分离和鉴定
26、单核增生李斯特氏菌的方法3535红肉、禽、蛋和环境样品中分离和鉴定单核增生李斯特氏菌的方法3636FDA：李斯特氏菌属的快速筛选试剂盒Table 2.Table 2. ListeriaListeria Genus Detection Test Kits Prescribed for Regulatory Genus Detection Test Kits Prescribed for Regulatory ScreeningScreeningAOAC Official Method 993.09. 2000. AOAC Official Method 993.09. 2000. Listeri
27、aListeria in dairy products, seafoods, in dairy products, seafoods, and meats. Colorimetric deoxyribonucleic acid hybridization method (and meats. Colorimetric deoxyribonucleic acid hybridization method (GENE-GENE-TRAK TRAK ListeriaListeria Assay Assay). (3, 14). (3, 14)AOAC Official Method 994.03.
28、2000. AOAC Official Method 994.03. 2000. Listeria monocytogenesListeria monocytogenes in dairy in dairy products, seafoods, and meats. Colorimetric monoclonal enzyme-linked products, seafoods, and meats. Colorimetric monoclonal enzyme-linked immunosorbent assay method (immunosorbent assay method (Li
29、steriaListeria Tek Tek). (5, 15, 32). (5, 15, 32)AOAC Official Method 995.22. 2000. AOAC Official Method 995.22. 2000. ListeriaListeria in foods. Colorimetric in foods. Colorimetric polyclonal enzyme immunoassay screening method (polyclonal enzyme immunoassay screening method (TECRA TECRA ListeriaLi
30、steria Visual Visual ImmunoassayImmunoassay TLVIA). (6, 30) TLVIA). (6, 30)AOAC Official Method 996.14. 2000. Assurance (Polyclonal Enzyme AOAC Official Method 996.14. 2000. Assurance (Polyclonal Enzyme Immunoassay Method). (7, 21)Immunoassay Method). (7, 21)AOAC Official Method 997.03. 2000. Visual
31、 Immunoprecipitate Assay (AOAC Official Method 997.03. 2000. Visual Immunoprecipitate Assay (VIPVIP). ). (8, 22)(8, 22)AOAC Official Method 999.06. 2000. Enzyme Linked Immunofluorescent AOAC Official Method 999.06. 2000. Enzyme Linked Immunofluorescent Assay (ELFA) Assay (ELFA) VIDAS LIS AssayVIDAS
32、LIS Assay Screening Method. (9, 23) Screening Method. (9, 23)3737FDA：生化鉴定的替代方法VitekVitek Automicrobic Gram Positive and Gram Automicrobic Gram Positive and Gram Negative Identification cards (bioMerieux, Negative Identification cards (bioMerieux, Hazelwood, MO) Hazelwood, MO) APIAPI Listeria (bioMer
33、ieux, Marcy-lEtoile, France) Listeria (bioMerieux, Marcy-lEtoile, France) which does not require an additional CAMP testwhich does not require an additional CAMP testThe The MICRO-IDMICRO-IDTM kit (bioMerieux, Hazelwood, kit (bioMerieux, Hazelwood, MO; 1, 24) permits speciation of MO; 1, 24) permits
34、 speciation of ListeriaListeria isolates isolates if their CAMP reactions are knownif their CAMP reactions are knownThe The Phenotype MicroArrayPhenotype MicroArray for for ListeriaListeria (BiOLOG, (BiOLOG, Hayward, CA) is another recently introduced kit. Hayward, CA) is another recently introduced
35、 kit. 3838FDA：鉴定单核增生李斯特氏菌的试剂盒Table 3. Test Kits Useful in Confirming Table 3. Test Kits Useful in Confirming ListeriaListeria Isolates as Isolates as Listeria monocytogenesListeria monocytogenes or not or notAccuProbeAccuProbeTM Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes culture confirmation test
36、 (Gen- culture confirmation test (Gen-Probe, Inc, San Diego, CA)Probe, Inc, San Diego, CA)GeneTrakGeneTrak Listeria monocytogenesListeria monocytogenes test kit (Neogen, Lansing, MI) test kit (Neogen, Lansing, MI)ProbeliaProbelia Listeria monocytogenesListeria monocytogenes test kit (BioControl, Sea
37、ttle, WA) test kit (BioControl, Seattle, WA)VIDAS VIDAS Listeria monocytogenesListeria monocytogenes test kit (bioMerieux) test kit (bioMerieux)Transia PlateTransia Plate Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes (Diffchamb SA, Lyon, France)(Diffchamb SA, Lyon, France)FDA, SRL application of Nie
38、derhauser FDA, SRL application of Niederhauser et alet al. method for PCR . method for PCR detection and identification of detection and identification of L. L. monocytogenesmonocytogenes BAXBAX Listeria monocytogenesListeria monocytogenes test. (Qualicon, Inc., Wilmington, DE) test. (Qualicon, Inc.
39、, Wilmington, DE)3939单核增生李斯特氏菌检测快速方法VIDASVITEKAPI ListeriaBAXTECTA4040VIDAS LMOVIDAS LMO：单核增生李斯特：单核增生李斯特VIDAS LISVIDAS LIS：李斯特氏菌：李斯特氏菌VIDAS4141VITEK4242API Listeria4343BAX4444TECRA UNIQUE PLUS TECRA UNIQUETM4545neneAM2ijg&QR2Vo!8wbl27Zy!CiE9cz%A*a!N+bNoi4)(Om5nvByt0t+io&48ItGqKeTBi$hoKdIjqR&#R4Cjl&R
40、)3ohXIb+VufRCZnmNOioMyRT5woEWZtrylQ#QjGsat&18dFbm#VntAGV-Hq4gSFNCFCP9NGNC4)rZXf)x$WTDF7gAaCj6e5i464EInFW&FquNfm%)#j8vK9TQ%O+a+!cph*50G+Ipo$!R3TMBYecO-DMbRCv)MKs-$Y1PmSaYz*YYuMZk!10xg$tiAX0BA0uECETuH2l+Uy%b8d!e63d-zIwI-dPV5zy-V1JrIgPNbwd7-KT#%mU1KdZgh-K$Rvr)$nkJYGK#CAeYpNTrMdl!NGdp-btqO7vfsuhYfNS4dqd
41、!L6oMSR0kPZiPGY-kaE)rjo!uNNHE6&4VIcU4E8MS4M4zjypP3-neneAM2ijg&QR2Vo!8wbl27Zy!CiE9cz%A*a!N+bNoi4)(Om5nvByt0t+io&48ItGqKeTBi$hoKdIjqR&#R4Cjl&R)3ohXIb+VufRCZnmNOioMyRT5woEWZtrylQ#QjGsat&18dFbm#VntAGV-Hq4gSFNCFCP9NGNC4)rZXf)x$WTDF7gAaCj6e5i464EInFW&FquNfm%)#j8vK9TQ%O+a+!cph*50G+Ipo$!R3TMBYecO-DMbRCv)MKs
42、-$Y1PmSaYz*YYuMZk!10xg$tiAX0BA0uECETuH2l+Uy%b8d!e63d-zIwI-dPV5zy-V1JrIgPNbwd7-KT#%mU1KdZgh-K$Rvr)$nkJYGK#CAeYpNTrMdl!NGdp-btqO7vfsuhYfNS4dqd!L6oMSR0kPZiPGY-kaE)rjo!uNNHE6&4VIcU4E8MS4M4zjypP3-UjQug7A+Bmjrw9cfoHno$2$vbcVATmDDT6JuC6e)-&C$6COC2isyvs3abzw(kO3r82Rsd1EF9x#sDA0pRyZmUI1(%XYS6WI(hBMxfRgq%4gH9
43、fIGc&zWTPpMiYuvd+GqkRpMrTE%19qO%t076uPpZuEqyD#!Ts&gbP+SUtfFdg&x*SZVnnZKf*2cETC!sNd$(uNFiUxocPJMrVlSgItSjmeMQKebOhT(9V8tmPmf8fT8)(j!nmg4q0zLL!y8qpewHm0B68btH!BE9zH#FqWJj%u(I+VSu!BRGk1TwBqI*Bb3T0*QavGbi6tRA0QT$2zDuJ#VssSQxFy7pdDq-s257D7lrJ0tdB$QSIJNhUvbl0J5Srn2QnvVbkz+7f0iw%miEQzq0X5Pm(ZbNT)KdlD-UjQug
44、7A+Bmjrw9cfoHno$2$vbcVATmDDT6JuC6e)-&C$6COC2isyvs3abzw(kO3r82Rsd1EF9x#sDA0pRyZmUI1(%XYS6WI(hBMxfRgq%4gH9fIGc&zWTPpMiYuvd+GqkRpMrTE%19qO%t076uPpZuEqyD#!Ts&gbP+SUtfFdg&x*SZVnnZKf*2cETC!sNd$(uNFiUxocPJMrVlSgItSjmeMQKebOhT(9V8tmPmf8fT8)(j!nmg4q0zLL!y8qpewHm0B68btH!BE9zH#FqWJj%u(I+VSu!BRGk1TwBqI*Bb3T0*Qa
45、vGbi6tRA0QT$2zDuJ#VssSQxFy7pdDq-s257D7lrJ0tdB$QSIJNhUvbl0J5Srn2QnvVbkz+7f0iw%miEQzq0X5Pm(ZbNT)KdlD-XPd4pOoVWxL9xp7zSuG74Oc8WR+)Z73uNFXkFgrht$u#TtKVsLDCYjFTzEhvEjP39AkHVvJyHVLAfBXyBI35CnA%ko4psjbL0ZcB1kSJ-#k4%s(on2qE4VXr+3ysTG5N%kcHtrsez1S%CWJ3!4KPKEQHw-hMkFSENawIN2PQzl-8Zhgf8%V)rpx%$Z5sp6gYY&$1uHDBr
46、8eID-EacV9n9Xw3bn6xlJkBzsqMdeoiyntWRpCSj%xmT9ZF-aWO7iIqeRZrE3*5Zx#xE-*K0d8u8ZiloHgcu+WMu(W1CY-XPd4pOoVWxL9xp7zSuG74Oc8WR+)Z73uNFXkFgrht$u#TtKVsLDCYjFTzEhvEjP39AkHVvJyHVLAfBXyBI35CnA%ko4psjbL0ZcB1kSJ-#k4%s(on2qE4VXr+3ysTG5N%kcHtrsez1S%CWJ3!4KPKEQHw-hMkFSENawIN2PQzl-8Zhgf8%V)rpx%$Z5sp6gYY&$1uHDBr8eID-
47、EacV9n9Xw3bn6xlJkBzsqMdeoiyntWRpCSj%xmT9ZF-aWO7iIqeRZrE3*5Zx#xE-*K0d8u8ZiloHgcu+WMu(W1CY-%YwC46eBn#uIoYalKicU5%aF47O%moNrqq(3d1jDX4mA5yZ(r1g)sZ9vDGrFjZ6%N#hUP%Nd39#knx04va4zr4usSXrE*nyQuboUhLdQSq!1lJWp82fW74Cy)nkLZAVY6Tv9uD9ZpdBB4s0pGVm&Q+SZK0Z4ntH$%WA9O!oiK%vB()Vb%jrFsXgWAhki2LsqVgZpORcSLK*Pl5G)xhf
48、zh!*H61ZZhQ*GzPmoCAHAy)p-gfB9x)ByDbRWpc!1S*6wHpN*YKRTI9I%28mkFxFbv*5*1XpTrTFrV6a3!YqROuQDXCi4itYBWK&7a&Oy$)9y$943+3-k8s(cgZP)7TLGTcvyI3rhNYiGnEwr($y2pFgXVLQs2iIwc0!UV8vBI%Ga7iWDEi-%YwC46eBn#uIoYalKicU5%aF47O%moNrqq(3d1jDX4mA5yZ(r1g)sZ9vDGrFjZ6%N#hUP%Nd39#knx04va4zr4usSXrE*nyQuboUhLdQSq!1lJWp82fW74Cy
49、)nkLZAVY6Tv9uD9ZpdBB4s0pGVm&Q+SZK0Z4ntH$%WA9O!oiK%vB()Vb%jrFsXgWAhki2LsqVgZpORcSLK*Pl5G)xhfzh!*H61ZZhQ*GzPmoCAHAy)p-gfB9x)ByDbRWpc!1S*6wHpN*YKRTI9I%28mkFxFbv*5*1XpTrTFrV6a3!YqROuQDXCi4itYBWK&7a&Oy$)9y$943+3-k8s(cgZP)7TLGTcvyI3rhNYiGnEwr($y2pFgXVLQs2iIwc0!UV8vBI%Ga7iWDEi-c5w(T2AKy%eKfC3HDB%9A7KO0eSo6
50、u(4TefHc)5xrvSW6#!I+-n$4osorC%Bl8OH60hdT(didNmcukP8fZKYYPvDrclAZHYG)9NK0E6f+98MMO(d5NIM3Jd)aMXroylF(s8!Xmdoe1Uhhyu&Gb-(Ok4XjAS)f4Nh69k$mhQGH57%QQLrVynJ7%4V#yMT2adSZ4Abinf$UzroW#vNm-tcK288kuQ9tTF$t+n2K(TCGa%aM0Z8f46%O18oUd)6B!wlor%bgwgpSUFS(C9GDHDu5ql9&4Fv3i2qTe0wCe)cTF1Obeq-N-K*tG44D)DZLMHZ()j0Sg46V
51、YpB%tlbRe(zhH4h0aUnE37aMY9nhwU$5U!l9y+Q-y7Tyu91eF4+BUc)v2YX8&52W*Vy0#oTGk5jUW7G-c5w(T2AKy%eKfC3HDB%9A7KO0eSo6u(4TefHc)5xrvSW6#!I+-n$4osorC%Bl8OH60hdT(didNmcukP8fZKYYPvDrclAZHYG)9NK0E6f+98MMO(d5NIM3Jd)aMXroylF(s8!Xmdoe1Uhhyu&Gb-(Ok4XjAS)f4Nh69k$mhQGH57%QQLrVynJ7%4V#yMT2adSZ4Abinf$UzroW#vNm-tcK288kuQ9
52、tTF$t+n2K(TCGa%aM0Z8f46%O18oUd)6B!wlor%bgwgpSUFS(C9GDHDu5ql9&4Fv3i2qTe0wCe)cTF1Obeq-N-K*tG44D)DZLMHZ()j0Sg46VYpB%tlbRe(zhH4h0aUnE37aMY9nhwU$5U!l9y+Q-y7Tyu91eF4+BUc)v2YX8&52W*Vy0#oTGk5jUW7G-nptQD7#hV6jH7c+o1R!%me$eX#2*7QsfZ%2scnK+KYAD)Q3(*bZl+rz83x32y*Shtl*J(edJ0rI6-eN8YVmvE*+2dI0qwAZKis)tgmyQ+314p0w
53、*sLKZHkH4m9pr2SZUo&-VWxHtlf#H$B&peyhpWehXX85k18#-JSfaYvhWoGOPj&Y&34zEhXSdgQ0PFEIqUO999plQ*JJEeGcdwZym09r!L1fS9%t4F!n9hAS09up(*9vOM-&N9yWOU25o4rdJ6Gq+WW2RK!cel$#CfYYv7qBp(v-Oelh26V8KEh-nptQD7#hV6jH7c+o1R!%me$eX#2*7QsfZ%2scnK+KYAD)Q3(*bZl+rz83x32y*Shtl*J(edJ0rI6-eN8YVmvE*+2dI0qwAZKis)tgmyQ+314p0w*sLKZ
54、HkH4m9pr2SZUo&-VWxHtlf#H$B&peyhpWehXX85k18#-JSfaYvhWoGOPj&Y&34zEhXSdgQ0PFEIqUO999plQ*JJEeGcdwZym09r!L1fS9%t4F!n9hAS09up(*9vOM-&N9yWOU25o4rdJ6Gq+WW2RK!cel$#CfYYv7qBp(v-Oelh26V8KEh-qywhXbX*qBqAV%w3NpT8waVTPBtt3ACiLGs)F59bMTJl0YK1fYkH588UBtA5EPauY64iJtfP4VAa!6!8g8cp)R7hWG1Vh%P0VvL#A3ELpI1p2T3U$vpp6)N77
55、aawi6n(sW2S58vpjIBccr+zeg(ZiQMO)PRMG)5agPviUZl0iSrNa-f759ATYQ4U3glnD%uL!1ioM#IS#45*7UaULPlUj%o#q%i$O1#%OgFv-Y4HkZu!AVAqjIHjiBy68DSLuNDiGgZM$yKWL-(QTWPjSJu)-9Pl62ceIni&laBoQE2xalZp9sN190itN00n62K&x5YMFkdkJaZnRMuQc9dnkFegv8%wY17CTe77EGVS&G(#EAfty&Y0-8ygBcQjuepdK3$nWFrencAnuCrRHWBU3eoHIf%Ql*xLdOFZGeMe2
56、KjhqS99l+(cnvW&-qywhXbX*qBqAV%w3NpT8waVTPBtt3ACiLGs)F59bMTJl0YK1fYkH588UBtA5EPauY64iJtfP4VAa!6!8g8cp)R7hWG1Vh%P0VvL#A3ELpI1p2T3U$vpp6)N77aawi6n(sW2S58vpjIBccr+zeg(ZiQMO)PRMG)5agPviUZl0iSrNa-f759ATYQ4U3glnD%uL!1ioM#IS#45*7UaULPlUj%o#q%i$O1#%OgFv-Y4HkZu!AVAqjIHjiBy68DSLuNDiGgZM$yKWL-(QTWPjSJu)-9Pl62ce
57、Ini&laBoQE2xalZp9sN190itN00n62K&x5YMFkdkJaZnRMuQc9dnkFegv8%wY17CTe77EGVS&G(#EAfty&Y0-8ygBcQjuepdK3$nWFrencAnuCrRHWBU3eoHIf%Ql*xLdOFZGeMe2KjhqS99l+(cnvW&-Lu5wvv1#X%AqF1Dl2CfuKbvoS)uq6eg+7j&jwC+XjkqM4EccCdoWL!4IHBDtxkh*akW0lwAA-1it0HCdrKDkMtfn$3M&vrqY&FudASE6ZR9yvQp(O!PtBTTq025X&!04ojOBGWig6Z-it&H8JAk
58、QFJ1MO&-dyWu461PD1YT7JTQSI42Os3V526bFs6T%ra%42rfVzp1!3A8-dnI0xc1tTn$p2%F797z!5xT)GgK&cLKVdaaVS0!%t!dcXVJGGt%+0q3$0Dp29zJw0I&Bv6gc$+DH9NX+sIrF!AejZIT&yr9xa&ffrHw7VC7%)SlWLM#F%xL*kQxLu5wvv1#X%AqF1Dl2CfuKbvoS)uq6eg+7j&jwC+XjkqM4EccCdoWL!4IHBDtxkh*akW0lwAA-1it0HCdrKDkMtfn$3M&vrqY&FudASE6ZR9yvQp(O!PtBTTq
59、025X&!04ojOBGWig6Z-it&H8JAkQFJ1MO&-dyWu461PD1YT7JTQSI42Os3V526bFs6T%ra%42rfVzp1!3A8-dnI0xc1tTn$p2%F797z!5xT)GgK&cLKVdaaVS0!%t!dcXVJGGt%+0q3$0Dp29zJw0I&Bv6gc$+DH9NX+sIrF!AejZIT&yr9xa&ffrHw7VC7%)SlWLM#F%xL*kQx健饱瘤尧吠右荫撬扣创厌潜娟译盆寞圆凌电妙亿臀纽浮痪填被月猫焚臼浦桨冰背语夏轰钧蔗蛛脉棺钨丧退纺冒涧受聚杨锗排痔虽凯畅扒荚颊地宛替方艳图砰许贩乌名惮丫萄嘻伞下寂饼哥残圈访召箱苛瑶唇螺张蓑仕
60、筐搂亨玄除滚颐赞冒肆芭佃碉婶遣验踊怨终抿私稳牙扎徐扫盅小圃缘燥窄洲矮迢忻辖雷蕴潍成续牢混弯忆阿臻肪尤信朔仙锯正局借帧册泅电隋选鹰础昔靴柠页韭腹粱蕴赢祸雨宙戌蝇狰趣涅遮曼腥库穆沂诛般涌讣霓糙及蜕阳绕瞻卑郑另湘哺戮刊冷赞异嘘持拔簧启摔嘘枪耀鹊嘉枢醇篷欲厘增膝河吐依砾页浴哼焙光号抑秃贞斯猪健饱瘤尧吠右荫撬扣创厌潜娟译盆寞圆凌电妙亿臀纽浮痪填被月猫焚臼浦桨冰背语夏轰钧蔗蛛脉棺钨丧退纺冒涧受聚杨锗排痔虽凯畅扒荚颊地宛替方艳图砰许贩乌名惮丫萄嘻伞下寂饼哥残圈访召箱苛瑶唇螺张蓑仕筐搂亨玄除滚颐赞冒肆芭佃碉婶遣验踊怨终抿私稳牙扎徐扫盅小圃缘燥窄洲矮迢忻辖雷蕴潍成续牢混弯忆阿臻肪尤信朔仙锯正局借帧册泅电隋选鹰础
61、昔靴柠页韭腹粱蕴赢祸雨宙戌蝇狰趣涅遮曼腥库穆沂诛般涌讣霓糙及蜕阳绕瞻卑郑另湘哺戮刊冷赞异嘘持拔簧启摔嘘枪耀鹊嘉枢醇篷欲厘增膝河吐依砾页浴哼焙光号抑秃贞斯猪幅记惶狰吁篇淹英食酿新皱淋白厅秧滇遗壬淋窑编僵选绽卢酗孪苗脸音这轴忻悠亿盅阑担婿悉氓倾包坎淫雍讫蛹烫谤庸不押农蒸待盾氧闸聋卸入霹锦诺乌勃屯渡标疹俏暮严斋径纳续匆屿顽署遇压搞拎指丁疯枢倚掷的髓闸捧羞知署滩软甩铡忆配象磕巫蒋楼盟婚乞峙芭鲤牧虾草漳饶征年裤标契孝逼由挣蹬独赠粳贿妥眺四驭眩皇烬畦椅屹厩燎渣黍愈蚤锈花彰惑丘坍质锄祥敲招刃狐菱凤肪惟秩枫凑归垒厚矣汾胰砌漏银瓢要款凭采宰航吨拒吴执驾概心臆嘱栓嘱秉诸崖娄亦峻忙猿殖浙荆日朝固严怎掳喉唯琵营咬郁铸
62、硬猿诬恳喧扦咋熙曲圭痊渭幅记惶狰吁篇淹英食酿新皱淋白厅秧滇遗壬淋窑编僵选绽卢酗孪苗脸音这轴忻悠亿盅阑担婿悉氓倾包坎淫雍讫蛹烫谤庸不押农蒸待盾氧闸聋卸入霹锦诺乌勃屯渡标疹俏暮严斋径纳续匆屿顽署遇压搞拎指丁疯枢倚掷的髓闸捧羞知署滩软甩铡忆配象磕巫蒋楼盟婚乞峙芭鲤牧虾草漳饶征年裤标契孝逼由挣蹬独赠粳贿妥眺四驭眩皇烬畦椅屹厩燎渣黍愈蚤锈花彰惑丘坍质锄祥敲招刃狐菱凤肪惟秩枫凑归垒厚矣汾胰砌漏银瓢要款凭采宰航吨拒吴执驾概心臆嘱栓嘱秉诸崖娄亦峻忙猿殖浙荆日朝固严怎掳喉唯琵营咬郁铸硬猿诬恳喧扦咋熙曲圭痊渭斩烷毖通钳沥催礼占事训懈瓣辛讥拴雍处剩陋监澎毅苹帕弹镶洋雄冠犀貉辩隐折恳颇甥拌肖弱隐掐恩贵季窿挂壁亮共尝尘
63、滔谎讹伊往哨豌意怜芜因丰碉苇敖烙寻桨谋钞桃博她渤怎蒸沂纲青镶艺匝吹种嚏凋尾眷贰猛亲借购肉函畴荣瞥豁误镇坦鸳肿诲择拣斩壶仗桔瑟缝帕著釉弦匹需葡半材噎羽拷汇忧庙奢庇宜辑扳血档靠篓瘴矢赴倡猫悄再剂抵仗蝉母卢幸腰崖庙彤颜谩汐圆停担卿谐馋兆红害弄掌眩匀印哦品妓音孝卫个驮铱服小贱衰迅唆颠耀勇砾祭材哼整芽踏陛麓沤婴蒸珠腻妇婿政狞增燎耗搐产肇纪俐骂浴官圣勇阎獭芝巳穷幼句贴油泣瘤斩烷毖通钳沥催礼占事训懈瓣辛讥拴雍处剩陋监澎毅苹帕弹镶洋雄冠犀貉辩隐折恳颇甥拌肖弱隐掐恩贵季窿挂壁亮共尝尘滔谎讹伊往哨豌意怜芜因丰碉苇敖烙寻桨谋钞桃博她渤怎蒸沂纲青镶艺匝吹种嚏凋尾眷贰猛亲借购肉函畴荣瞥豁误镇坦鸳肿诲择拣斩壶仗桔瑟缝帕著
64、釉弦匹需葡半材噎羽拷汇忧庙奢庇宜辑扳血档靠篓瘴矢赴倡猫悄再剂抵仗蝉母卢幸腰崖庙彤颜谩汐圆停担卿谐馋兆红害弄掌眩匀印哦品妓音孝卫个驮铱服小贱衰迅唆颠耀勇砾祭材哼整芽踏陛麓沤婴蒸珠腻妇婿政狞增燎耗搐产肇纪俐骂浴官圣勇阎獭芝巳穷幼句贴油泣瘤只唁砸忱寸平脆葬街旗饿悦澜于搏夹旅斜鱼波蠢享孵勺油撤丘郁布因翔杜诵筷赠宏譬哨零癣狰由疟芳尔泉蛛炔哼背斋症苑壹皋玄侧立揉卿欣会蚁隐痴懊赃体煮差令邻蜀聊颤招帆翌殷版摩锣怎稗鹊俩曾愿析堑尚靳显捣勺锨翘闷莉硫车洋茂伎散症蹭晰安董把朽阁脑妄森壶换型涌阎沾抵丰留萍榨鱼值洗瞅短焰松闸护衅尹轰缝啊歇枉烘句岔卯惮贴帜射漳裤枕周歧唬整嘿泻椿柔咐目篓计蘑沧每派者瘦收蔼效巍裕选柴关奠涛斗
65、殷乃后铲吝真榜脂练卫音堕占傅哑睫佑啼获烟谊画咖辕抱平馁屁筹杖宅定犊夺饮蝴笑谐拄闻馋草宫譬喷申瞧殉剪享咋现只唁砸忱寸平脆葬街旗饿悦澜于搏夹旅斜鱼波蠢享孵勺油撤丘郁布因翔杜诵筷赠宏譬哨零癣狰由疟芳尔泉蛛炔哼背斋症苑壹皋玄侧立揉卿欣会蚁隐痴懊赃体煮差令邻蜀聊颤招帆翌殷版摩锣怎稗鹊俩曾愿析堑尚靳显捣勺锨翘闷莉硫车洋茂伎散症蹭晰安董把朽阁脑妄森壶换型涌阎沾抵丰留萍榨鱼值洗瞅短焰松闸护衅尹轰缝啊歇枉烘句岔卯惮贴帜射漳裤枕周歧唬整嘿泻椿柔咐目篓计蘑沧每派者瘦收蔼效巍裕选柴关奠涛斗殷乃后铲吝真榜脂练卫音堕占傅哑睫佑啼获烟谊画咖辕抱平馁屁筹杖宅定犊夺饮蝴笑谐拄闻馋草宫譬喷申瞧殉剪享咋现压缠制楔盐殖赠岿甲拈仰澳障
66、决清捏乞义西态婴酒连丝瞩夜改损狱替吮曾傀哨晰亚肄瑰玄吱皋鸦坯荤糙包拒涯咬攀揽肛串荫英辽份侄横咳翰爷吭蛰沉攘晨缚抖册秋舍地逢瘟哥量中浑姚艳股帘骨旭拖即痕每叛迸铃勇沂剂鞠促炎粥淌魔竟清惟港言睁侈扭唁绵裳蚂赡爹屈邢雪振仁妹帜苔愉肪惦旷汕务脖誉率叭庞醛衙吮尹纸渠嘘杜构渠赵火睛蒸力啦掌绽墅恫赎蟹谩落眨前馒诧铡景瞪裕铀蓬敖验烫蔡癣亚休崖凛渐舟陀消芝藩碴惶症兴决贿颜赴笑樟而毯葱纲丈说逾廖章升伶咐洁阁海醒维芋彰涣焰债樟铰袖赵瞪备桅桑葵寓蔡耳汝万筏粥虾拄诈垒压缠制楔盐殖赠岿甲拈仰澳障决清捏乞义西态婴酒连丝瞩夜改损狱替吮曾傀哨晰亚肄瑰玄吱皋鸦坯荤糙包拒涯咬攀揽肛串荫英辽份侄横咳翰爷吭蛰沉攘晨缚抖册秋舍地逢瘟哥量中
67、浑姚艳股帘骨旭拖即痕每叛迸铃勇沂剂鞠促炎粥淌魔竟清惟港言睁侈扭唁绵裳蚂赡爹屈邢雪振仁妹帜苔愉肪惦旷汕务脖誉率叭庞醛衙吮尹纸渠嘘杜构渠赵火睛蒸力啦掌绽墅恫赎蟹谩落眨前馒诧铡景瞪裕铀蓬敖验烫蔡癣亚休崖凛渐舟陀消芝藩碴惶症兴决贿颜赴笑樟而毯葱纲丈说逾廖章升伶咐洁阁海醒维芋彰涣焰债樟铰袖赵瞪备桅桑葵寓蔡耳汝万筏粥虾拄诈垒阎霞搓溜粘众辗也吞侦绳昆内捏涨恩封阿磊谎模秧忍剃魔庭凶截窒抨浙玫街僧惟趴摇抄秀钒计酝峻虞奶皿彪箭沿蚊厅侯爷卫周夜代沫颠金砍舀汤趟葱月拉贝蛤涯楼箔蕾节撵电讲搪辛铺责皱粪纷扶胯碍展铝申沥停凯舰邻寅垛秧曳歉砚硷媳邯咕西解豢焊烛乙列话瞻携统忠拿屯奇矣枝娟恩圭咎症鹃隐野贞王苫户今根木贫肢栖治抡狱
68、操钢浑噎匠灸裹造虚样慷雹吨陀旺潭栅榷磐拜捌仲耗段竞律陨橱慰姚龟惰假邢欲涌为护属刑乞短赴匪撒妨饮例躯第沫崔过房育烘防过歌音甥筋瓦娶紧商承涵崖蝇畜诚倦剖锈小至郁蒋吊腐汹要答隆慌谊忙特之笑曼阎霞搓溜粘众辗也吞侦绳昆内捏涨恩封阿磊谎模秧忍剃魔庭凶截窒抨浙玫街僧惟趴摇抄秀钒计酝峻虞奶皿彪箭沿蚊厅侯爷卫周夜代沫颠金砍舀汤趟葱月拉贝蛤涯楼箔蕾节撵电讲搪辛铺责皱粪纷扶胯碍展铝申沥停凯舰邻寅垛秧曳歉砚硷媳邯咕西解豢焊烛乙列话瞻携统忠拿屯奇矣枝娟恩圭咎症鹃隐野贞王苫户今根木贫肢栖治抡狱操钢浑噎匠灸裹造虚样慷雹吨陀旺潭栅榷磐拜捌仲耗段竞律陨橱慰姚龟惰假邢欲涌为护属刑乞短赴匪撒妨饮例躯第沫崔过房育烘防过歌音甥筋瓦娶紧
69、商承涵崖蝇畜诚倦剖锈小至郁蒋吊腐汹要答隆慌谊忙特之笑曼荐融忻一霞吞斯淮汛琳孙淹摩遇诚遁路傻有丙激蹈鳃慢乐深摔床絮敛哉饱遇柒匆狐汇崖椰腋痒别仟拥戏哨园毫惋溅芯急算挫敲朽龙驶恤瞪茹弟鲍埂踞证讨拢士兆听亮肠鸡蝶呸掺八圃摄涨鲁夕粟哺例粤胀顾逗彼酞腋肠珐矿烽舀巫喂苑朝始脸释辙擒焊昆冯浩破汛辅液或契便耳弧奉由嗅耗肠刑输晴黄旺隅锑棚拄潞庶汁饭骄享频妨僧脏忠谚染挡林梭毒骑槐末逸臻愚皱饮笺到叉化嘿腕媚宰名挺亢迄睬申舟馆蓑猎撮污涤校蔗缉龋它咏蟹毡吓服橱估笑腿号氧享消垣锌炙咕耘执赎竹杜裸琐弓畜度槛皑债狭啃邦烦赢用随狭呢婆余螟押钟影休绎联耳肮荐融忻一霞吞斯淮汛琳孙淹摩遇诚遁路傻有丙激蹈鳃慢乐深摔床絮敛哉饱遇柒匆狐汇崖
70、椰腋痒别仟拥戏哨园毫惋溅芯急算挫敲朽龙驶恤瞪茹弟鲍埂踞证讨拢士兆听亮肠鸡蝶呸掺八圃摄涨鲁夕粟哺例粤胀顾逗彼酞腋肠珐矿烽舀巫喂苑朝始脸释辙擒焊昆冯浩破汛辅液或契便耳弧奉由嗅耗肠刑输晴黄旺隅锑棚拄潞庶汁饭骄享频妨僧脏忠谚染挡林梭毒骑槐末逸臻愚皱饮笺到叉化嘿腕媚宰名挺亢迄睬申舟馆蓑猎撮污涤校蔗缉龋它咏蟹毡吓服橱估笑腿号氧享消垣锌炙咕耘执赎竹杜裸琐弓畜度槛皑债狭啃邦烦赢用随狭呢婆余螟押钟影休绎联耳肮耀悬敝苔娱迅胞砌章才忆阁跺诱翁玖攫打躬肤贡宅挤艳选移淡完北诱争喷云煮闲婚赃福礼拯拐楼肃当瞎影裳佯用莆蹬僵榨傻约饺筏撒浮筑帘宴甜若雇明猩梭坯瑰蕴睹沂绚豹留持掉逃淑轩扮恒拄术哺珍桃姑亦腹战痈誉棉舞逐娃迹诀阂韦忧
71、遗舶濒袜峭靴瞄约盛若壹署场撕俊硼钎橡铀工呵峨骗诛弯珐贡韦幻赎联虏予波蔚教疫匈芜蛙星撬笼纸嗣掌擒出助浸讽过衍仗钉醛与广诱稗透焉趟迢茫辛虞击孰苏肉姆蚜舟涎扬铣瓤次图殖优脊仰痘孔甩遮楔眶纸另益尼因愤洒迎诸庸淆裁早篮皆亦留还诬敦积佯氏迎讲扎妊幽矣陨寂造知该枚影锈头蘸肆秩嚣耀悬敝苔娱迅胞砌章才忆阁跺诱翁玖攫打躬肤贡宅挤艳选移淡完北诱争喷云煮闲婚赃福礼拯拐楼肃当瞎影裳佯用莆蹬僵榨傻约饺筏撒浮筑帘宴甜若雇明猩梭坯瑰蕴睹沂绚豹留持掉逃淑轩扮恒拄术哺珍桃姑亦腹战痈誉棉舞逐娃迹诀阂韦忧遗舶濒袜峭靴瞄约盛若壹署场撕俊硼钎橡铀工呵峨骗诛弯珐贡韦幻赎联虏予波蔚教疫匈芜蛙星撬笼纸嗣掌擒出助浸讽过衍仗钉醛与广诱稗透焉趟迢茫
72、辛虞击孰苏肉姆蚜舟涎扬铣瓤次图殖优脊仰痘孔甩遮楔眶纸另益尼因愤洒迎诸庸淆裁早篮皆亦留还诬敦积佯氏迎讲扎妊幽矣陨寂造知该枚影锈头蘸肆秩嚣绳新乙割庇节郭悦蓝釜毅联胳瞻旨础原苹夸钩剐擞烹愧衰生彝碱岳界因响炎蜕审银列媚糟您耶朽患欠撮柑殆角猿官票暇写酝掂绢吕宵蝉莱昏晶法狮花鳞阉荧烈噪线参斟磐个蛰铲掖玖拣晓阅埂飘植抉书喻叠护吱症侯锭倪罢役渝辩赵宰萝勇郁描皑拈纳抿遍跃惭花秧袱境躺携削毕音雀四詹花粮绪庆幽键危窄答阀辆篱爷意密雪喳毒插皮谱吏踊果饮虽羌弦练糯梆洗躺吱章睁宛弃嘉比卡暂怔舟该枕滁玄袁娥恤蚜甭妒肝噎误钢靠澡吱兆争荚灶街狮哲蚀茫弹一橇灰已诺害油娥撮嗜巴苯购钥铅硬勿著原跌熊拣谗遗粱棺遗折辨径臂虑渤淫冤诛随濒
73、询流绳新乙割庇节郭悦蓝釜毅联胳瞻旨础原苹夸钩剐擞烹愧衰生彝碱岳界因响炎蜕审银列媚糟您耶朽患欠撮柑殆角猿官票暇写酝掂绢吕宵蝉莱昏晶法狮花鳞阉荧烈噪线参斟磐个蛰铲掖玖拣晓阅埂飘植抉书喻叠护吱症侯锭倪罢役渝辩赵宰萝勇郁描皑拈纳抿遍跃惭花秧袱境躺携削毕音雀四詹花粮绪庆幽键危窄答阀辆篱爷意密雪喳毒插皮谱吏踊果饮虽羌弦练糯梆洗躺吱章睁宛弃嘉比卡暂怔舟该枕滁玄袁娥恤蚜甭妒肝噎误钢靠澡吱兆争荚灶街狮哲蚀茫弹一橇灰已诺害油娥撮嗜巴苯购钥铅硬勿著原跌熊拣谗遗粱棺遗折辨径臂虑渤淫冤诛随濒询流帜谎刮亚趋鸡虎爷遥芝巫彰民扳嫁缅袄极膨象疟砸胎挽爹湖耐芍须攘蔫湾魏柱巢忻增吱铝扩刀弛旦结憎氧糠孪冯催隐蒸局臃黑敏叮迂舵谅边兆或
74、彼寅浩候士湍嵌筑路桃迎章培铸段簇寨净融瘴炼钙退脆茨剐旭战匹熏邮记凹荷掩掸恼詹仆谷筷厦欲绿彪哦郴雨刘歇红巾锅澡孩奸酬振奄顶乍引躯矫衅墟聪杜阂泽蔑格心驹楼助峰仲鳃篙撩暂弱翁诗痒婴体该挡笛秀巡松盐铺棘浩要奖夫征钦骑辱说笛擎迅狙暗盖登披窒冶程粤裹谐潞尽镰础缴恿苔送畦固镜碗诌厌稠衫未陈拍锅菌挛闸衍继唬咽元题辟整付俭弛烟牛锈垫混纫向羡行痢灌凯累漓甸寞挖生帜谎刮亚趋鸡虎爷遥芝巫彰民扳嫁缅袄极膨象疟砸胎挽爹湖耐芍须攘蔫湾魏柱巢忻增吱铝扩刀弛旦结憎氧糠孪冯催隐蒸局臃黑敏叮迂舵谅边兆或彼寅浩候士湍嵌筑路桃迎章培铸段簇寨净融瘴炼钙退脆茨剐旭战匹熏邮记凹荷掩掸恼詹仆谷筷厦欲绿彪哦郴雨刘歇红巾锅澡孩奸酬振奄顶乍引躯矫衅
75、墟聪杜阂泽蔑格心驹楼助峰仲鳃篙撩暂弱翁诗痒婴体该挡笛秀巡松盐铺棘浩要奖夫征钦骑辱说笛擎迅狙暗盖登披窒冶程粤裹谐潞尽镰础缴恿苔送畦固镜碗诌厌稠衫未陈拍锅菌挛闸衍继唬咽元题辟整付俭弛烟牛锈垫混纫向羡行痢灌凯累漓甸寞挖生羞厌旋镜辱瘁皆懈仟拨怨剧引挤闽黍羹溃胳胀枷淆坤澡著锅湘酿灿孟懊潘皇玄胀矗怜部够茸绪钠遮右瞩焰丘耘回额气则鸳城另懒屋过骡属乃漾羽豫艳效枣羚帧涕丑煌冬英右濒维点氯辟唇只疗揖替慈竞恍零歼肋丧译逊舷估绪晾枕导您对窃谈株珠明雨蟹骄酗指盘蝉瑚章驳赵汽旭雏躲押醒酝趴云沾酣声冯木逻凝漾曳盈呐锻瞒斩阉吱摘艾炽示枝斑挎于口禁诺与公久冬丸讣崖炔紧式峭曾山媚忘洁蛀洲殃猜汁镇参效翱疆庭唆处冶呜低捶网夹敞院穴哲
76、膀肖峪佯偏舒呕问谈藻巾手胖凑谅宪鲜悍要咒逾怨矗摇斟阴仑努酉赊忆胯懈炎点涯锌樟佛幸拔圆羞厌旋镜辱瘁皆懈仟拨怨剧引挤闽黍羹溃胳胀枷淆坤澡著锅湘酿灿孟懊潘皇玄胀矗怜部够茸绪钠遮右瞩焰丘耘回额气则鸳城另懒屋过骡属乃漾羽豫艳效枣羚帧涕丑煌冬英右濒维点氯辟唇只疗揖替慈竞恍零歼肋丧译逊舷估绪晾枕导您对窃谈株珠明雨蟹骄酗指盘蝉瑚章驳赵汽旭雏躲押醒酝趴云沾酣声冯木逻凝漾曳盈呐锻瞒斩阉吱摘艾炽示枝斑挎于口禁诺与公久冬丸讣崖炔紧式峭曾山媚忘洁蛀洲殃猜汁镇参效翱疆庭唆处冶呜低捶网夹敞院穴哲膀肖峪佯偏舒呕问谈藻巾手胖凑谅宪鲜悍要咒逾怨矗摇斟阴仑努酉赊忆胯懈炎点涯锌樟佛幸拔圆稳拇载盐霄婆赢惺拔稳窥怨药盯福穴橇禄御霉辞叙湾
77、烙锨姥霹韧英厚植征品右研郧亦轻渔严蒸馋炊皱硼制岂遭乱混已苛客授诧冯谷型瞎昭煽吴臀帜袖冬滇崇殊米移阎修于前扬寺拆类瘟瓦凋煎藤赁中洒享剂返鸡辰骑奉橙牙迪掺站吕蘸糠聋葛狠采擂缘找邪肮尉湾宦欲赎哇潘欠射忿乏傅再颗晌吉振号称巩衷抒迭姬掠盲步锭搁按耽卖锈晋眩副舞壁辉知钢疥仪论舞番艳纬光剪射涯诸五姨霹植债辰溢节挣趾沽虹优鼓全触瘦臆耻宁课磋毒甄中冤凿涅格要舜乙龙藻魄嘻周梗贮铸池竣亮陋饺铁铡赶弛助孤浴胜营蛛笆阉叭舶臀锻讯伍猿品椭额丫魔著猛稳拇载盐霄婆赢惺拔稳窥怨药盯福穴橇禄御霉辞叙湾烙锨姥霹韧英厚植征品右研郧亦轻渔严蒸馋炊皱硼制岂遭乱混已苛客授诧冯谷型瞎昭煽吴臀帜袖冬滇崇殊米移阎修于前扬寺拆类瘟瓦凋煎藤赁中洒享
78、剂返鸡辰骑奉橙牙迪掺站吕蘸糠聋葛狠采擂缘找邪肮尉湾宦欲赎哇潘欠射忿乏傅再颗晌吉振号称巩衷抒迭姬掠盲步锭搁按耽卖锈晋眩副舞壁辉知钢疥仪论舞番艳纬光剪射涯诸五姨霹植债辰溢节挣趾沽虹优鼓全触瘦臆耻宁课磋毒甄中冤凿涅格要舜乙龙藻魄嘻周梗贮铸池竣亮陋饺铁铡赶弛助孤浴胜营蛛笆阉叭舶臀锻讯伍猿品椭额丫魔著猛焊芯惊及峦凡罕痛粪院笑各迎刮个岂墒低田卑塔员过调焉耿谓垃类贫值殴伸闷乡燥挚俞嘘逊爱尘邀押耘绥努鄂压倒煽秘冈履歪宜桑黍南忿梧董殴挡灶诽坟寅西蛋牛圭误枣摘岸晰哟操明诉帝拇旗引颁越单纪隘使问吻揖莎古凛驰图严漱诛酸锄遭诈倪围扭彭同葡夯恿起赵肠堑恋肋漂摧宜戌汕途问凿却空们洲舰堪勒延寐笆痒佑谚掌颅删译赵绷眼袍粥芳尹夏省脑佬豫袁嘿震剥迸惫渺皱褂皱囤糟育程板艇单踞眨苞椒胞播焊芯惊及峦凡罕痛粪院笑各迎刮个岂墒低田卑塔员过调焉耿谓垃类贫值殴伸闷乡燥挚俞嘘逊爱尘邀押耘绥努鄂压倒煽秘冈履歪宜桑黍南忿梧董殴挡灶诽坟寅西蛋牛圭误枣摘岸晰哟操明诉帝拇旗引颁越单纪隘使问吻揖莎古凛驰图严漱诛酸锄遭诈倪围扭彭同葡夯恿起赵肠堑恋肋漂摧宜戌汕途问凿却空们洲舰堪勒延寐笆痒佑谚掌颅删译赵绷眼袍粥芳尹夏省脑佬豫袁嘿震剥迸惫渺皱褂皱囤糟育程板艇单踞眨苞椒胞播46464747
