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1、1免疫血液学免疫血液学基础知识基础知识2主要内容主要内容临床床输血血发展展简史史免疫血液学基免疫血液学基础概念概念红细胞血型抗原系胞血型抗原系统红细胞血型血清学胞血型血清学检测技技术医院血医院血库的工作的工作职责3人类历史上早期输血尝试人类历史上早期输血尝试1667年法国御医Jean用羊血治疗精神病患者41818年英国产科医生James 首次用人血输治患者早期的床边直接输血早期的床边直接输血5血型之父血型之父1901发现ABO血型又发现MN，P，Rh等血型，赢得了“血型之父”的誉称。1930年因发现人类ABO血型系统而获得诺贝尔奖金Karl LandsteinerKarl Landsteine
2、r (1868.06.141943.06.26)真正使输血变得容易的人卢因森真正使输血变得容易的人卢因森（19151915年年1 1月）月）纽约的卢因森博士发明了实用的柠檬酸钠抗凝剂方便献血方便输血方便保存方便运输使建立血库成为可能67临床输血发展简史临床输血发展简史1901、1940年奥地利科学家Landsteiner等人先后发现了ABO和RH血型系统，使输血治疗有了牢固的科学基础，从而极大地提高了临床输血的安全性1937年世界上第一个血库在芝加哥Cock County医院建立，标志着输血开始成为临床医学的重要组成部分和常规治疗手段现在输血已经发展成一门涉及多学科的独立的边缘学科-输血医学8
3、二战促进了输血医学的发展二战促进了输血医学的发展失血是战场死亡的主要原因朝鲜战场上90的士兵死于没有及时输血输血的早期实践者之一 白求恩在二战中战场输血非常普遍在二战中战场输血非常普遍9101944年我国第一个冻干血库中心在昆明建立。1947年我国第一个医院血库在南京建立。1953年我国第一个大型中心血库在沈阳建立。我国输血事业的发端我国输血事业的发端11免疫血液学免疫血液学免疫血液学免疫血液学（Immunohematology，IH），是一，是一门研究人体研究人体血型抗原及抗体血型抗原及抗体，并通并通过输血前血前测试血型抗原血型抗原- -抗体反抗体反应，找到合适的血液源，从而达到安全找到合适
4、的血液源，从而达到安全输血血目的的目的的实验室医学分支学科。室医学分支学科。12血型抗原血型抗原KDCCKBAD存在于红细胞表面化学结构：蛋白质蛋白质上的糖类抗原糖蛋白或脂类（糖脂）13ABO A、BRh (Rhesus) D、C、E、c、eK (Kell) K、k (cellano)Fy (Duffy) Fya、FybJk (Kidd) Jka、JkbLe (Lewis) Lea、LebMNS系统P1血型抗原系统举例血型抗原系统举例14当某种抗原分子进入不含该决定簇的机体时，刺激机体产生相应抗体的能力免疫原=抗原D抗原：强免疫原Fya抗原：弱免疫原免疫原性的强弱与以下因素有关抗原分子的氨基酸
5、序列(一级结构)及空间构象(二级结构及三、四级结构)红细胞上该抗原分子的表达数量血型抗原的免疫原性血型抗原的免疫原性15只识别相对应的红细胞抗原并与之结合与红细胞上相对应的抗原结合后，可引起红细胞的破坏、溶解(溶血反应)两种表现形式“天然抗体”：机体自然产生的抗体如：抗-A、抗-B（可用于反定型）“免疫性抗体”-“不规则抗体”：经免疫原刺激后而产生的应答性抗体如：抗-D、抗-K，等等血型抗体血型抗体16自身抗体(Auto-antibody)可凝集或致敏机体自身的红细胞，常见于自身免疫性溶血性贫血、药物性溶血性贫血或各种自身免疫病同种抗体(Allo-antibody)可凝集或致敏机体外来的红细胞
6、，常见于各种输血引起的溶血性疾病血型抗体血型抗体免疫性抗体根据应答机制又可分为两大类:17IgM = “完全抗体”= 室温下发生发应 = 如：抗-A、抗-B、抗-M、抗-Lea、抗-P1 = 大部分的血型分析试剂及“冷”抗体是IgM类抗体IgG = “不完全抗体”= 37oC下反应= 如：抗-D、抗-K、抗-Jka、抗-Fya，等= 几乎所有临床有意义的不规则抗体都是IgG抗体血型抗体血型抗体18 IgMIgM IgG IgG血型抗体模式图血型抗体模式图19完全抗体完全抗体可以直接凝集红细胞可以直接凝集红细胞IgMIgM分子的分子的跨度可达跨度可达3434nmnm20不完全抗体不完全抗体不能直
7、接凝集红细胞不能直接凝集红细胞IgGIgG分子的分子的跨度仅为跨度仅为1414nmnm21抗抗- -A A抗体破坏抗体破坏A A型红细胞型红细胞缩短红细胞寿命缩短红细胞寿命破坏红细胞破坏红细胞溶血溶血死亡死亡抗抗-A-A抗体抗体血型抗原血型抗原- -抗体反应抗体反应22目前所发现的人类最重要的血型抗原系统ABO血型系统的“天然抗体”几乎存在于不含相对应抗原所有人的外周血中“天然抗体”临床上可用于反定型ABO血型系统亚型A：A1、A2、A3、Ax、Am，等B：B2、B3、Bx、Bm，等ABOABO血型系统血型系统23ABO ABO 血型血型RBCRBC上的抗原上的抗原血清血清中的抗体中的抗体基因
8、型基因型O OH HAnti-A,BAnti-A,BO/OO/OA AA AAnti-BAnti-BA/A or A/OA/A or A/OB BB BAnti-AAnti-AB/B or B/OB/B or B/OABAB A&B A&BNoneNoneA/BA/BABOABO血型系统血型系统24ABOABO以外以外重要的血型系统及其抗体重要的血型系统及其抗体2005年，29个红细胞血型系统274个抗原25除ABO外与输血有关的最重要的血型系统之一最重要的五种抗原C、c、D、E、e根据D抗原是否存在，一般将Rh系统定义为Rh阳性：D抗原阳性Rh阴性：D抗原阴性RhRh血型系统血型系统26Rh
9、Rh阴性知多少阴性知多少1540.4RhRh血型对输血影响有多大？血型对输血影响有多大？ABO血型发现后40年才发现Rh血型无数Rh阴性人输了Rh阳性血后无反应27Levinelandsteinerwiener28输血死亡主要原因分析输血死亡主要原因分析( (美国，美国，1980)1980)29免疫血液学能解决什么问题免疫血液学能解决什么问题保保证人人们用血（用血（输血）血）, ,包括血液、血液成分包括血液、血液成分或血液制品的安全、有效。或血液制品的安全、有效。输血是一血是一项广泛广泛应用且十分重要的治用且十分重要的治疗手段手段v恢复及恢复及维持机体的氧持机体的氧( (O2)供供应v治治疗临
10、床上床上严重的失血性疾病重的失血性疾病 v治治疗血液系血液系统紊乱性疾病紊乱性疾病v新生儿溶血病的治新生儿溶血病的治疗30如何保证输血安全有效如何保证输血安全有效检测献血献血员和用血者血液中的抗原和抗体，和用血者血液中的抗原和抗体，选择抗抗原，抗体尽可能相容的血液原，抗体尽可能相容的血液进行行输血：血：v红细胞定型胞定型v血血浆（血清）抗体（血清）抗体筛查/ /抗体抗体鉴定，定，v红细胞的直接抗人球蛋白胞的直接抗人球蛋白试验和吸收放散和吸收放散试验v献血献血员与受血者之与受血者之间的交叉配血的交叉配血制制备用于用于输血的成分血血的成分血 献血献血员的的筛查：肝功能，：肝功能，传染性疾病染性疾病
11、评价溶血性价溶血性贫血血母母婴相容性相容性检测31我国的采供血程序我国的采供血程序及输血前检测及输血前检测志愿献血员志愿献血员血液中心（中心血站）血液中心（中心血站）初检初检复检复检医院医院输血输血筛选合格筛选合格献血员献血员 问卷 快速测试传染病检测：HBs Ag, HCV, HIV ,ALT, Syphilis红细胞定型（正定）采血采血 进口或国产试剂随机检测随机检测输血前检测（1）住院患者血型定型（正定）（2）用血患者血型在此定型（正反定型），（3）交叉配血，抗体筛查，抗体鉴定多数医院输血前不再进行传染病检测32红细胞血型血清学检测技术红细胞血型血清学检测技术盐水凝集法低离子强度盐水法酶
12、技术凝聚胺技术抗人球蛋白检测法柱凝集技术检测法33一、盐水凝集法一、盐水凝集法红细胞和抗血清在盐水溶液中直接反应特点是操作简便，设备简单，缺点是影响因素多，灵敏度低孵育30分钟34二、低离子强度盐水法二、低离子强度盐水法通过降低介质溶液的离子强度，减少红细胞外围离子云的强度，促进IgG分子在两个红细胞间桥联，而促进凝集特点是缩短抗原抗体反应时间，提高反应灵敏度孵育1分钟35三、酶技术三、酶技术利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细胞失去电荷，缩小细胞间距离同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，从而增强凝集反应主要用于一些不完全抗体的检测36四、凝聚胺技术四、凝聚胺技术利用多聚
13、季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，促进凝集37五、柱凝集技术检测法五、柱凝集技术检测法是微柱凝集技术与上述所有技术相结合的产物1986年由法国人Dr.Yves Lappierre发明1994年获得美国FDA认证，目前在许多发达国家已经作为常规技术应用于临床柱凝集技术原理柱凝集技术原理38六、抗人球蛋白试验六、抗人球蛋白试验CoombsCoombs试验试验在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集39+ Anti-Human Globulin (AHG) + Anti-Human Glo
14、bulin (AHG) 试剂试剂致敏红细胞的致敏红细胞的IgGIgG抗体抗体或补体成份或补体成份加入抗人球蛋白试剂后加入抗人球蛋白试剂后形成肉眼可见的凝集反应形成肉眼可见的凝集反应抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验40抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验1. 1. 红细胞致敏反应红细胞致敏反应 2. AHG2. AHG反应反应肉眼不可见肉眼不可见肉眼可见肉眼可见 41直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白实验( (DAT)红细胞在胞在体内体内( (in vivo)即被不即被不规则抗体所致敏，因抗体所致敏，因此直接加入抗人球此直接加入抗人球试剂即可即可进行行测定；如某些定；如某些过敏敏性性药物及引起溶血性物及引起溶血性
15、输血反血反应的抗体、自身抗体等的抗体、自身抗体等间接抗人球蛋白接抗人球蛋白实验( (IDAT)红细胞在胞在体外体外( (in vitro)首先被不首先被不规则抗体或抗血清抗体或抗血清试剂所致敏，然后再加入抗人球所致敏，然后再加入抗人球试剂进行行测定；如定；如抗体抗体筛查、抗体、抗体鉴定、交叉配血等定、交叉配血等抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验42医院输血科的主要职责医院输血科的主要职责提供临床所需的血液成份提供血型相符或配合的血液为临床提供血型相关的检测诊断43输血前测试流程输血前测试流程ABO、Rh交叉配血阴性发血交叉配血阳性检查是否有抗体有抗体抗体鉴定再继续配血或送血液中心无抗体选择洗涤红细胞
16、送血液中心常用输血前测试方法常用输血前测试方法1. 平板法 - 细胞浓度适宜，避免交叉污染，及时观察结果2. 试管法 - 加样顺序，反应条件，洗涤细胞注意事项3. 微量板法 - 加样和振荡避免交叉污染4. 柱凝集法 - 避免假阳性，使用前观察凝胶板45ABO血型鉴定Rh血型鉴定红细胞血型抗体筛查/鉴定交叉配血试验HDN血型血清学检查常用输血前检测项目常用输血前检测项目46方法方法: 红细胞凝集胞凝集试验正定型正定型用已知抗用已知抗-A或抗或抗-B定型定型试剂来来测定定红细胞上有无相胞上有无相应的的A抗原或抗原或/和和B抗原抗原反定型反定型用已知用已知A1型型细胞和胞和B型型细胞来胞来测定血定血
17、清中清中有无相有无相应的抗的抗-A或或/和抗和抗-B 正反定型正反定型结果不一致或有疑果不一致或有疑问，需，需进一步行一步行ABO血型血型确确认试验。ABOABO血型鉴定血型鉴定47ABOABO血型鉴定正常反应结果血型鉴定正常反应结果血型血型抗抗- -A A抗抗- -B BA A型红细胞型红细胞B B型红细胞型红细胞A A+ +- - -+ +B B- -+ + +- -ABAB+ + +- - -O O- - -+ + +48RhRh血型鉴定血型鉴定原理: Rh血型系统最常见的抗原主要有C,c,D,E,e 5种。 可分别用抗C、抗c、抗D、抗E、抗e这5种Rh 定型试剂通过血凝试验来检查红细
18、胞上是否存 在相应抗原。在临床输血中，一般只做D抗原 的鉴定。凡被检红细胞和抗D试剂凝集者为 RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。49检测目的对受血者的血清或血浆做常规的抗体筛查试验，发现有临床意义的不规则抗体。实验方法让受检的血清/血浆与特殊的试剂红细胞组（已知抗原表型的筛选红细胞）一起反应，以发现样品中可能存在的不规则抗体。抗体筛查抗体筛查/ /抗体鉴定抗体鉴定50测定结果反应阳性：抗体存在反应阴性：抗体不存在抗体鉴定抗体一旦被检出，应作抗体鉴定抗体筛查抗体筛查/ /抗体鉴定抗体鉴定51检测目的分析受者和供者血液是否完全相符反应原理主侧：受者血清/血浆+供者红细胞次侧：受者红细胞+供者血清/
19、血浆交叉配血交叉配血52新生儿溶血病血型血清学检查新生儿溶血病血型血清学检查新生儿溶血病(HDN)是由母婴血型不合引起,胎儿和新生儿红细胞被来自母体的IgG抗体致敏,并在其自身网状内皮系统受到免疫性破坏。53方法:婴儿及其父母ABO/RH血型鉴定婴儿及母亲血清中血型抗体鉴定(盐水介质法、酶法、抗球蛋白法等)婴儿红细胞上血型抗体鉴定 (抗球蛋白法、放散试验)新生儿溶血病血型血清学检查新生儿溶血病血型血清学检查54谢谢各位！谢谢各位！谢谢各位！谢谢各位！55强生强生OCDOCD免疫血液学产品发展历程免疫血液学产品发展历程19371937：Philip B. HofmannPhilip B. Hof
20、mann在新泽西创建在新泽西创建OrthoOrtho公司；公司；19441944：Philip LevinePhilip Levine博士加入博士加入OrthoOrtho研究基金会；研究基金会；19471947：推出第一个：推出第一个RhRh血清凝集试剂及抗人血清；血清凝集试剂及抗人血清；19561956：建立、推广全球第一个标准化交叉配血方法及程序；：建立、推广全球第一个标准化交叉配血方法及程序；19601960：在美国成立了第一家正规的血型技术学院；：在美国成立了第一家正规的血型技术学院；19681968：第一个防止新生儿：第一个防止新生儿RhRh系统溶血的药物系统溶血的药物RhoGAMR
21、hoGAM上市；上市；19851985：BioCloneBioClone抗人球蛋白试剂及抗抗人球蛋白试剂及抗A A、抗抗B B试剂上市；试剂上市；19921992：更简便及标准化操作的柱凝集技术（：更简便及标准化操作的柱凝集技术（CATCAT）血型及交叉配血试剂血型及交叉配血试剂开发成功；开发成功；19971997：全球第一台全自动血型分析系统：全球第一台全自动血型分析系统AutoVueAutoVue问世。问世。20002000：AutoVueAutoVue第二代产品第二代产品AutoVue InnovaAutoVue Innova面世面世56强生强生OCDOCD全球最大的免疫血液学产品供应商
22、全球最大的免疫血液学产品供应商57强生强生OCDOCD提供全面的免疫血液学解决方案提供全面的免疫血液学解决方案 手工手工自动自动Ortho BioVue系统工作站系统工作站离心机离心机孵育器孵育器工作架工作架移液器移液器Ortho AutoVue InnovaOrtho AutoVue UltraOrtho AutoVue58BioVueBioVue 柱凝集系统柱凝集系统BioVueBioVue ：与血型诊断试剂卡配套的手工工作站与血型诊断试剂卡配套的手工工作站AutoVue InnovaAutoVue Innova：使用血型诊断试剂卡的使用血型诊断试剂卡的全自动分析系统全自动分析系统59临床
23、检测项目临床检测项目 血型抗原血型抗原测定定( (Blood Typing) 抗体抗体筛查( (Antibody Screening) 抗体抗体鉴定定( (Antibody Identification) 交叉配血交叉配血( (Cross Match)抗人球蛋白抗人球蛋白实验( (Anti-Human Globulin Test)60Ortho BiovueOrtho Biovue血型诊断试剂卡血型诊断试剂卡条形码条形码效期效期批号批号实验结果实验结果病人病人IDID试剂卡名称试剂卡名称v 六个反应柱六个反应柱v 合成塑料卡结构合成塑料卡结构v 标准微孔板孔间距标准微孔板孔间距v 条形码识别条
24、形码识别v 锡箔纸封口锡箔纸封口试剂成份试剂成份61微微 柱柱空气柱空气柱玻璃珠玻璃珠反应舱反应舱试剂试剂62微微 柱柱椭圆型设计，较大的结果观测区椭圆型设计，较大的结果观测区240240l l大容量反应舱大容量反应舱锥型底部设计以增加灵敏度锥型底部设计以增加灵敏度预装载预装载BioCloneBioClone试剂及密度梯度稀释液试剂及密度梯度稀释液225225保存保存TOPFRONTSIDE特点：特点：63玻璃珠玻璃珠 球状外形球状外形 直径直径7 70 0 8080umum 批间稳定无差异批间稳定无差异 惰性物质，理化性质稳定惰性物质，理化性质稳定 耐受高速离心耐受高速离心 功能类似过滤器功
25、能类似过滤器 未凝集的未凝集的RBCRBC（阴性）（阴性）凝集的凝集的RBCRBC（阳性）（阳性）离心力作用离心力作用64密度梯度稀释液密度梯度稀释液离心力作用离心力作用 未结合的血清蛋白（低密度）停留在密度梯度稀释液未结合的血清蛋白（低密度）停留在密度梯度稀释液上面上面 血清与红细胞的混合物（中间密度）在密度梯度稀释血清与红细胞的混合物（中间密度）在密度梯度稀释液中液中 红细胞（高密度）移动进入玻璃珠中红细胞（高密度）移动进入玻璃珠中65反应结果示意图反应结果示意图注注：玻玻璃璃珠珠的的作作用用象象一一个个过过滤滤器器，可可以以将将凝凝集集的的红红细细胞胞“阻阻挡挡”在在玻玻璃璃珠珠上上面面；未未凝凝集集的的红红细细胞胞则则可可自自由由通通过过玻玻璃璃珠珠而而到到达达柱柱的的底底部部阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应66结果判读结果判读67Ortho BioVue Ortho BioVue 试剂卡操作示意图试剂卡操作示意图加样加样离心离心孵育孵育读卡读卡
