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1、是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。小生物的总称。一、微生物一、微生物微生物微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。小生物的总称。一、微生物一、微生物1.1.分分类类特点：小特点：小 简简 低低微生物微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。小生物的总
2、称。1.1.分分类类一、微生物一、微生物病病毒毒的的结结构构2.2.病毒病毒病病 毒毒 SARS冠状病毒、冠状病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖病毒的增殖细菌的外形与大小细菌的外形与大小3.3.细菌细菌 A. A. 球菌球菌 B. B. 杆菌杆菌 C. C. 弧菌弧菌 常见的细菌三种典型形态常见的细菌三种典型形态ABC细菌的结构细菌的结构芽孢：芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体细菌形成的椭圆形的休眠体芽孢的壁很芽孢的壁很厚厚，对干旱、低温、高温，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又芽孢又小小又又轻轻，可以随风飘
3、散。，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌细菌的营养类型细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。同，将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌细菌的营养类型细菌的营养类型光能自养型：光能自养型：光合细菌光合细菌根据细菌所利用的能源和碳源的不根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类
4、型。同，将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌光能自养型：光能自养型：光合细菌光合细菌化能自养型：化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌硝化细菌，铁细菌，硫细菌细菌的营养类型细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。同，将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：菌落菌落单个或少数细菌在固体培养基上大单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落
5、。菌落是鉴定菌种的菌落是鉴定菌种的重要依据。重要依据。细菌的细菌的菌落特菌落特征因种征因种而异而异 菌落菌落4.4.放线菌放线菌结构：结构：单细胞原核生物单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）（2）繁殖）繁殖孢孢子子丝丝|孢孢子子链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其微生物中发现了几千种抗生素，其中中2/3是由放线菌产生的是由放线菌产生的 应用应用:5.5.真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生生 殖殖腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖6.6.营养
6、及功能营养及功能微生物化学元素组成：微生物化学元素组成：6.6.营养及功能营养及功能C、H、O、N、P、S微生物化学元素组成：微生物化学元素组成：6.6.营养及功能营养及功能C、H、O、N、P、S五大营养物质五大营养物质碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子水水无机盐无机盐微生物化学元素组成：微生物化学元素组成：二、培养基二、培养基 培养基（培养液）是由人工培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。长繁殖使用的混合营养液。 （1）按物理状态分：）按物理状态分：固体培养基固体培养基和液体培养基、半固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 （2
7、）按功能分：）按功能分：选择培养基和鉴选择培养基和鉴别培养基别培养基。 （3）按成分分：）按成分分：天然培养基和合天然培养基和合成培养基成培养基。1.1.培养基的类型培养基的类型固体培养基：菌落固体培养基：菌落液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：半固体培养基： 2.不同的微生物往往需要采用不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的培养基配方 2.不同的微生物往往需要采用不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的培养基配方 3.不管哪种培养基，一般都含不管哪种培养基，一般都含有有水、碳源、和氮源、水、碳源、和氮源、 无机盐无机盐等
8、营等营养物质，另外还需要满足微生物生养物质，另外还需要满足微生物生长对长对pH、特殊营养物质以及氧气的、特殊营养物质以及氧气的要求要求。1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨蛋白胨10g氮源和维生素氮源和维生素NaCl 5g无机盐无机盐H2O定容在定容在1000mL 氢元素、氧元素氢元素、氧元素4.4.培养基的用途培养基的用途4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌、工业生产液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），固体培养基：纯化（分离
9、），鉴定、活菌计数、鉴定、活菌计数、保藏菌种保藏菌种半固体培养基：半固体培养基：三、无菌技术三、无菌技术三、无菌技术三、无菌技术1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。 三、无菌技术三、无菌技术（1）消毒定义：）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭
10、菌的定义：）灭菌的定义：（1）消毒定义：）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义：）灭菌的定义：3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法灭菌的方法：灭菌的方法：1.灼烧灭菌灼烧灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：1.灼烧灭菌灼烧灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：2. 干热灭菌：干热灭菌：160-170 下加热下加热1-2h。3. 高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌100kPa、121 下下维持维持15-30min. 1.无菌技术除了用来防止实验室无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？还有什么目的
11、？旁栏思考旁栏思考 1.无菌技术除了用来防止实验室无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。作者自身被微生物感染。旁栏思考旁栏思考 2.请你判断以下材料或用具是否需请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 2.请你判断
12、以下材料或用具是否需请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 答：（答：（1 1）、（）、（2 2）需要灭菌；）需要灭菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1. 1. 器具的灭菌器具的灭菌2. 2. 培养基的配制培养基的配制3. 3. 培养基的灭菌培养基的灭菌4. 4. 倒平板倒平板5. 5. 微生物接种微生物
13、接种6. 6. 恒温箱中培养恒温箱中培养7. 7. 菌种的保存菌种的保存三、实验操作三、实验操作四、实验操作四、实验操作牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂琼脂 20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定将上述物质溶解后，添加自来水，定容至容至1000mL1计算、称量计算、称量2溶化溶化3调调pH：pH764过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程中注意不要使培分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以塞而引起
14、污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6加塞加塞7包扎包扎操作步骤操作步骤8灭菌灭菌: 将将50ml培养基用玻棒转移至三角培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为、温度为121，灭菌，灭菌1530min。将培养基用旧报纸包裹，放。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在入干热灭菌箱内，在160170 下灭下灭菌菌2h。倒平板技术倒平板技术1.将灭过菌的将灭过菌的培养皿放在火培养皿放在火焰旁的桌面上，焰旁的桌面上，右手拿装有
15、培右手拿装有培养基的锥形瓶，养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。左手拨出棉塞。1234倒平板技术倒平板技术2.右手拿锥形右手拿锥形瓶，使瓶口迅瓶，使瓶口迅速通过火焰。速通过火焰。1234倒平板技术倒平板技术1234倒平板技术倒平板技术12344.等待平板冷等待平板冷却凝固，大约却凝固，大约需需510min。然后，将平板然后，将平板倒过来放置，倒过来放置，使皿盖在下，使皿盖在下，皿底在上。皿底在上。 9倒平板倒平板: 待培养基冷却到待培养基冷却到50 左右时，在酒左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接后观察平板，无杂菌污染
16、才可用来接种种. 10无菌检查：无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入37的温室中培的温室中培养养2448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？问题讨论问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥
17、形瓶的温度下降到刚刚锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。不烫手时，就可以进行倒平板了。问题讨论问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿结水珠，
18、凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？ 4.在倒平板的过程中，如果不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微因此最好不要用这个平板培养微生物。生物。
