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1、病病 毒毒 学学第一节第一节 核型多角体病核型多角体病第二节第二节 质型多角体病质型多角体病第三节第三节 浓核病浓核病第四节第四节 病毒病的发病规律病毒病的发病规律第五节第五节 病毒病的防治病毒病的防治病毒的发现？病毒的发现？1919世纪末，钱伯伦世纪末，钱伯伦创制细菌过滤器后，发现了创制细菌过滤器后，发现了许多毒素和过滤性因子。许多毒素和过滤性因子。18921892年，苏联学者伊万诺夫斯基年，苏联学者伊万诺夫斯基证明存在过滤证明存在过滤性病毒（发现患花叶病的烟草叶汁通过过滤器性病毒（发现患花叶病的烟草叶汁通过过滤器后仍有侵染性）。后仍有侵染性）。1919世纪末世纪末2020世纪初世纪初，已经
2、找到许多过滤性病毒。，已经找到许多过滤性病毒。19151915年，年，TwortTwort首先发现细菌病毒。首先发现细菌病毒。19351935年，美国生化学家年，美国生化学家获得了烟草花叶病毒结获得了烟草花叶病毒结晶。（第一位）晶。（第一位）开始了对病毒本质的认识，促进病毒学的发展，而且成为分子生物学发展的里程碑。超显微的，可以通过细菌过滤器。超显微的，可以通过细菌过滤器。病毒粒子只含一种核酸。病毒粒子只含一种核酸。病毒粒子不能生长，也不能二等分裂。病毒粒子不能生长，也不能二等分裂。无细胞结构。无细胞结构。病毒只能利用宿主细胞的核糖体进行病毒只能利用宿主细胞的核糖体进行Pr合成合成。病毒的主要
3、特征病毒的主要特征：家蚕病毒病的研究历史家蚕病毒病的研究历史1149年陈敷所著农书中关于家蚕脓病病症年陈敷所著农书中关于家蚕脓病病症“高节高节”、“脚肿脚肿”的描述。的描述。1639年徐光启的农政全书中，有病蚕年徐光启的农政全书中，有病蚕“游游走而不安箔走而不安箔”的描述。的描述。1874年汪日桢湖蚕述记有病蚕年汪日桢湖蚕述记有病蚕“高节而足高节而足流白水流白水”。1912年年Acqua发现了第一个昆虫病毒发现了第一个昆虫病毒BmNPV。迄今已发现迄今已发现12目目1600余种昆虫，可被余种昆虫，可被16个科的个科的病毒所感染。病毒所感染。家蚕病毒病的种类家蚕病毒病的种类1 核型多角体病核型多
4、角体病 由杆状病毒科的由杆状病毒科的家蚕家蚕核型多角体病毒核型多角体病毒（BmNPV）寄生血细胞和体腔内各种组织的）寄生血细胞和体腔内各种组织的细细胞核胞核，并形成多角体。，并形成多角体。2 质型多角体病质型多角体病 由呼肠病毒科的由呼肠病毒科的家蚕质型多角体病毒家蚕质型多角体病毒（BmCPV）寄生中肠）寄生中肠圆筒圆筒形细胞，并在形细胞，并在胞质胞质中中形成多角体。形成多角体。复习内容：家蚕幼虫中肠上皮细胞的类型复习内容：家蚕幼虫中肠上皮细胞的类型？家蚕病毒病的种类家蚕病毒病的种类3 浓核病浓核病 由细小病毒科的由细小病毒科的家蚕浓核病病毒家蚕浓核病病毒（BmDNV）寄）寄生中肠圆筒形细胞的
5、生中肠圆筒形细胞的细胞核细胞核，不形成多角体。，不形成多角体。4 病毒性软化病病毒性软化病 由小由小RNA病毒科的病毒科的家蚕软化病病毒家蚕软化病病毒（BmFV）寄）寄生中肠生中肠杯形细胞胞质杯形细胞胞质中，不形成多角体，但形成中，不形成多角体，但形成类似多角体的包涵体（封入体）。类似多角体的包涵体（封入体）。家蚕病毒病的家蚕病毒病的危害情况危害情况病毒病是目前蚕茧生产中最为常见、病毒病是目前蚕茧生产中最为常见、危害最重危害最重的一类病害，给蚕茧生产造成的损失约占蚕病的一类病害，给蚕茧生产造成的损失约占蚕病造成损失的造成损失的80%。上述四种病毒病在我国都有不同程度的发生，上述四种病毒病在我国
6、都有不同程度的发生，其危害也因各个蚕区而不同。南方蚕区以中肠其危害也因各个蚕区而不同。南方蚕区以中肠型脓病为主；而北方蚕区则以血液型脓病造成型脓病为主；而北方蚕区则以血液型脓病造成的损失最大。浓核病常与的损失最大。浓核病常与CPV并发；病毒性软并发；病毒性软化病目前已很少发生。化病目前已很少发生。因此，本章因此，本章重点重点讲解讲解NPV、CPV，并介绍，并介绍DNV.第一节第一节 核型多角体病核型多角体病 核型多角体病核型多角体病也称也称血液型脓病血液型脓病，农民常称之，农民常称之为为脓病脓病或或脓肿脓肿。一一 病原病原 家蚕核型多角体病毒家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori Nucl
7、ear Polyhedrosis Virus NPV）。存在形式有两种：）。存在形式有两种：NPV与与NPB（多角体）。（多角体）。（一）（一）NPV 属杆状病毒科，核型多角体病毒属，属杆状病毒科，核型多角体病毒属，病毒粒子病毒粒子杆状，杆状，33080 nm；dsDNA;Tm为为87.5；NPV病毒粒子的病毒粒子的超微结构超微结构NPV膜膜髓核（髓核（dsDNA）囊膜囊膜胶粘层胶粘层衣壳衣壳核衣壳核衣壳一个囊膜内一个囊膜内只含只含一个一个核核衣壳衣壳一个囊膜内一个囊膜内包含包含两个以两个以上上核衣壳核衣壳模式图模式图单粒包埋型单粒包埋型（SEVSEV）与）与多粒包埋型多粒包埋型（MEVMEV
8、）寄生部位寄生部位 血体壁气管上皮血体壁气管上皮 脑脂肪卵巢皮膜脑脂肪卵巢皮膜 丝腺精巢皮膜丝腺精巢皮膜SEV（%） 9798 7289 63MEV（%） 23 1128 37环境温度环境温度：25 28 多形成多形成SEV，33 35 多形成多形成MEV。（二）（二） NPB（多角体）（多角体）1 1 构成构成多多角角体体多角体蛋白多角体蛋白3%5%病毒粒子病毒粒子核糖核酸聚合酶核糖核酸聚合酶0.3%Si；微量；微量Fe、Mg与宿主细胞与宿主细胞Pr和病毒和病毒Pr均不同，分子量均不同，分子量29000，由，由245个个AA残残基组成。基组成。2 理化特性理化特性 多为整齐多为整齐六角形六角
9、形十八面体（偶有四方、三角或十八面体（偶有四方、三角或不正形）；不正形）；26m（平均（平均3.2）；光镜下）；光镜下易观察易观察到；淡绿色，折光性强；比水重；不溶于水及有到；淡绿色，折光性强；比水重；不溶于水及有机溶剂；对浓酸不稳定；机溶剂；对浓酸不稳定；易溶于碱易溶于碱性溶液；苏丹性溶液；苏丹不能使其着色。不能使其着色。扫描电镜照片扫描电镜照片NPB的的形态形态光镜照片光镜照片N.bNPBNPBNPB形态形态NPB形态受下列因素影响形态受下列因素影响1 寄生部位寄生部位：血细胞、气管上皮、体壁上皮、：血细胞、气管上皮、体壁上皮、脂肪体中均脂肪体中均六角形六角形。而丝腺腺细胞中则巨型。而丝腺
10、腺细胞中则巨型三三角形角形。多角体且较其他组织大。多角体且较其他组织大2倍左右。睾丸、倍左右。睾丸、精室内膜上寄生则精室内膜上寄生则四方形四方形。2 宿主宿主：BmNPV接种接种二化螟二化螟后：后：1代六角形，代六角形，7代后四方形，再将四角形代后四方形，再将四角形NPB反接种于反接种于B.m.，则：第一代少量六角形，第四代达则：第一代少量六角形，第四代达70%80%，第六代全部为六角形。，第六代全部为六角形。3 与环境（与环境（温度温度）有关：）有关：BmNPV接种蛹体。接接种蛹体。接种后种后 2824hr后，再经后，再经35则产生则产生四角形四角形NPB 28下下4896hr后后,再经再经
11、35则产生则产生六角形六角形。 35下下2448hr后后,再经再经28则产生则产生六角形六角形。 35下下7296hr后后,再经再经28则产生则产生四角形四角形。NPB形态受下列形态受下列因素因素影响影响3 NPB的的稳定性稳定性 处理处理 浓度浓度 温度温度 失活时间失活时间(min) 日光日光 40 20h 干热干热 100 45 湿热湿热 100 3 甲醛甲醛 2% 25 15漂白粉漂白粉 0.3% 25 3石灰浆石灰浆 1% 25 3石灰水石灰水 清清 25 24h 盐酸盐酸 比重比重1.025 25 3二二 病症病症1 典型病症（共同症状）典型病症（共同症状）2 不同时期发病不同时期
12、发病 不眠蚕不眠蚕：在蚕的：在蚕的催眠催眠期间，蚕群体大部分快期间，蚕群体大部分快入眠时，入眠时，NPVNPV病蚕体壁紧张发亮，呈乳白色，行病蚕体壁紧张发亮，呈乳白色，行动活泼，不能入眠，终于体皮破裂，流脓而死。动活泼，不能入眠，终于体皮破裂，流脓而死。 起节蚕起节蚕：在：在起蚕起蚕时发病。病蚕生长停滞，体色时发病。病蚕生长停滞，体色乳白而不见转青。体壁松弛多皱，体躯缩小。前乳白而不见转青。体壁松弛多皱，体躯缩小。前节的节间膜向后节的节间膜向后套叠套叠，终于出现典型的病征而死。，终于出现典型的病征而死。 高节蚕高节蚕：又称：又称“竹节蚕竹节蚕”。源于病蚕各环节节。源于病蚕各环节节间膜或环节后半
13、部（靠近节间膜处）隆起，就间膜或环节后半部（靠近节间膜处）隆起，就象竹节。多在象竹节。多在4、5龄蚕盛食期发病。龄蚕盛食期发病。2 不同时期发病不同时期发病 脓蚕脓蚕：多发生于：多发生于5 5龄后期至龄后期至上簇前上簇前。环节肿胀拱。环节肿胀拱起，呈算盘珠状，体壁紧张发亮，体色乳白，病重起，呈算盘珠状，体壁紧张发亮，体色乳白，病重时，爬行缓慢，终因腹足失去把持力，从蚕匾或蔟时，爬行缓慢，终因腹足失去把持力，从蚕匾或蔟中坠下，流脓而死。发病迟者死于蔟中或结薄皮茧中坠下，流脓而死。发病迟者死于蔟中或结薄皮茧而死亡，生产上比较而死亡，生产上比较常见常见。 斑蚕斑蚕：在生产上较少见，与蚕品种有关，现行
14、品：在生产上较少见，与蚕品种有关，现行品种少发生。发生时出现对称性的病斑，如黑褐色的种少发生。发生时出现对称性的病斑，如黑褐色的焦脚、黑色气门及大的斑块等。焦脚、黑色气门及大的斑块等。 蛹期蛹期病症：在病症：在5 5龄后期、熟蚕、初蛹期感染可造龄后期、熟蚕、初蛹期感染可造成蛹期发病。病蛹体色成蛹期发病。病蛹体色暗褐或乳白暗褐或乳白，体壁易破，一，体壁易破，一经震动即流出浓汁而死，造成茧层污染，即内印茧经震动即流出浓汁而死，造成茧层污染，即内印茧或死茏茧。或死茏茧。2 不同时期发病不同时期发病高节高节狂躁爬行狂躁爬行2 不同时期发病不同时期发病腹足基部乳白腹足基部乳白气门周围水气门周围水渍状病斑
15、渍状病斑2 不同时期发病不同时期发病2 不同时期发病不同时期发病2 不同时期发病不同时期发病三三 病变病变 NPV NPV及其包涵体是在寄主细胞核内增殖和及其包涵体是在寄主细胞核内增殖和形成的，因而受感染的细胞核便发生一系列的形成的，因而受感染的细胞核便发生一系列的病变过程。随着多角体的不断增多，使细胞核病变过程。随着多角体的不断增多，使细胞核逐渐膨胀，随后细胞亦膨大破裂，这样多角体、逐渐膨胀，随后细胞亦膨大破裂，这样多角体、病毒及细胞碎片就游离于血液中。病毒及细胞碎片就游离于血液中。 血细胞血细胞、气管气管上皮上皮、脂肪脂肪组织及组织及真皮真皮细胞细胞易形成多角体。在生殖腺和神经细胞中只能形
16、易形成多角体。在生殖腺和神经细胞中只能形成少量多角体，而蜕皮脱、唾腺和马氏管等则成少量多角体，而蜕皮脱、唾腺和马氏管等则很难形成，在丝腺中除前部丝腺不能形成多角很难形成，在丝腺中除前部丝腺不能形成多角体，中、后部丝腺细胞核均能形成大量多角体。体，中、后部丝腺细胞核均能形成大量多角体。目前已发现目前已发现NPV可在可在中肠中肠圆筒形细胞中增殖圆筒形细胞中增殖,但但不能形成多角体不能形成多角体.病病 变变病病 变变四四 致病机理致病机理1 感染入侵感染入侵NPB蚕食下蚕食下放出放出NPV污染桑叶污染桑叶碱液溶解碱液溶解肠腔肠腔灭活灭活排出排出RFP围食膜围食膜中肠上中肠上皮细胞皮细胞复制复制胞核定
17、位胞核定位血液血液NPV创伤创伤NPV细胞间隙细胞间隙血细胞核血细胞核定位定位2 病毒复制病毒复制dsDNAdsDNAStRNA rRNA病毒病毒Pr衣壳衣壳PrNPBPrssDNAmRNA胞胞质质NPVNPB细胞核细胞核细胞质细胞质E3 3 3 3 装配装配装配装配4 4 4 4 释放释放释放释放5 病毒增殖病毒增殖NPV的增殖曲线的增殖曲线隐隐潜潜期期缓缓慢慢增增殖殖期期高高速速增增殖殖期期稳稳定定增增殖殖期期五五 发病特点发病特点1 1 本病以本病以食下传染食下传染为主（为主（NPBNPB），也可经伤），也可经伤口感染（口感染（NPVNPV）。）。2 2 主要传染源为主要传染源为病蚕血液
18、病蚕血液（脓汁）。（脓汁）。3 3 本病主要发生在本病主要发生在3 3龄龄老熟（蛹期），尤以老熟（蛹期），尤以5 5龄中期龄中期老熟老熟前后最为严重。前后最为严重。4 4 本病属于亚急性传染病，小蚕感染后经本病属于亚急性传染病，小蚕感染后经3 34 4天发病死亡，大蚕经天发病死亡，大蚕经4 46 6天发病；外温高时，天发病；外温高时，病程加快。病程加快。5 5 病蚕体壁破裂流脓之前，蚕座病蚕体壁破裂流脓之前，蚕座二次二次感感染的可能性较小。染的可能性较小。6 6 由于由于NPBNPB对自然环境有强的抵抗力，故对自然环境有强的抵抗力，故该病除具有该病除具有水平传播水平传播外，尚具有较强的外，尚具
19、有较强的垂直传播垂直传播能力。能力。7 7 恶劣的环境条件及一些理化因素刺激恶劣的环境条件及一些理化因素刺激可可诱发诱发本病。本病。8 8 不同蚕不同蚕品种品种对本病抗性不同。对本病抗性不同。六六 诊诊 断断1 1 肉眼肉眼鉴别鉴别2 2 显微显微镜检镜检查查 此病在发病初期，外观病症往往不明显，此病在发病初期，外观病症往往不明显，但发育迟缓，有时迟眠。取可疑蚕剪断尾角但发育迟缓，有时迟眠。取可疑蚕剪断尾角或腹足，滴一滴血液于载玻片上，加盖片与或腹足，滴一滴血液于载玻片上，加盖片与400600倍显微镜下观察。倍显微镜下观察。 如有如有折光性较强折光性较强，大小较整齐的六角形大小较整齐的六角形多角体，即可确诊。如病蚕处于感染中期，多角体，即可确诊。如病蚕处于感染中期，可观察血细胞可观察血细胞核内核内有无折光性强、大小不等有无折光性强、大小不等的颗粒，据此确诊。的颗粒，据此确诊。 镜检时，脂肪球与多角体的镜检时，脂肪球与多角体的区别区别方法：方法：（1）Sudan 染色法；（染色法；（2）有机溶剂溶解）有机溶剂溶解法；法；六六 诊诊 断断2 2 显微镜检查显微镜检查3 3 PCRPCR检测与检测与血清学血清学方法方法以已知的抗体检查蚕体内是否存在相对应的抗原，从而做出蚕是否被某种病毒感染。录录 像像
