《第一课时-动物细胞培养》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第一课时-动物细胞培养（23页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、专题专题2 2 细胞工程细胞工程2.2.2.1 2.1 动物细胞培养动物细胞培养2.2.2 2 动物细胞工程动物细胞工程取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植 取该患者的皮肤进取该患者的皮肤进行细胞培养行细胞培养, ,获得足量获得足量的细胞后再移植。的细胞后再移植。Q1：烧伤病人通常怎么治疗呢？Q2：但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？植物组织培养动物细胞培养结果原理完整的植株完整的植株植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞增殖细胞增殖动物细胞动物细胞阅读P44页“动物细胞培养”概念，回答问题从动物机体中从动物机体中取出相关组织取出相关组织，将它们将它们分散分散成
2、单个细胞，成单个细胞，然后放在然后放在适宜的培养基适宜的培养基中，中，让这些细胞让这些细胞生长和增殖。生长和增殖。 动动物物细细胞胞培培养养聚焦一、动物细胞培养过程聚焦一、动物细胞培养过程所以，通常取所以，通常取动物胚胎或幼龄动物的组织、动物胚胎或幼龄动物的组织、器官器官因为其分化程度低、增殖能力强，更容易培养因为其分化程度低、增殖能力强，更容易培养。1.取动物组织块1）幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低（胚胎细胞）的与分化程度高（体细胞）的组织细胞比较，哪一种更易于培养？为什么？1.取动物组织块2） 为什么在培养前要将组织分散成单个细胞？使细胞和培养液接触更充分，便于物质使细胞和培养液
3、接触更充分，便于物质交换。交换。（营养容易供应，代谢产物容易排出）营养容易供应，代谢产物容易排出）方法：用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理1.取动物组织块2.剪碎组织，并分散细胞蛋白质蛋白质3）用胰蛋白酶分散成细胞，说明细胞间的物质主要是什么？用）用胰蛋白酶分散成细胞，说明细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶处理可以吗？（胃蛋白酶处理可以吗？（Tip：动物细胞培养液PH7.27.4）4 4）细胞膜的成分是什么？胰蛋白酶不会把细胞消化掉吗？）细胞膜的成分是什么？胰蛋白酶不会把细胞消化掉吗？为什么？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用
4、也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间胰蛋白酶的处理时间。小知识：由蛋白质构成的细胞外基质将动物细胞粘连在一起构成组织胃蛋白酶，不可以。1.取动物组织块2.剪碎组织，并分散细胞3.原代培养阅读阅读P44P44最后一段，找出以下最后一段，找出以下术语并并理解它们的含义术语并并理解它们的含义。细胞贴壁细胞贴壁细胞的接触抑制细胞的接触抑制原代培养原代培养悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上贴壁细胞分裂生长到表面相互接贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖触时，细胞就会停止分裂增殖细胞悬浮液第一次在瓶中培养即没有分瓶培细胞
5、悬浮液第一次在瓶中培养即没有分瓶培养之前的细胞培养养之前的细胞培养1.取动物组织块2.剪碎组织，并分散细胞3.原代培养4.传代培养传代培养传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。分瓶之前为原代，分瓶之前为原代，分瓶之后为传代分瓶之后为传代用什么处理贴满壁的细胞，使其分散？方法：用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理1.取动物组织块2.剪碎组织，并分散细胞3.原代培养4.传代培养10代衰老死亡大部分少数50代（细胞株）大部分少数增殖停止，衰老死
6、增殖停止，衰老死亡，核型可能改变亡，核型可能改变细胞系（50代，无限增殖）保持二倍体核型核型：表现出染色体的数目和形态的模型动物细胞原代培养细胞细胞株（10-50代）细胞系50代传代到10代原代培养传代培养核型保持核型保持二倍体二倍体核型可核型可能改变能改变癌变癌变5 5）目前使用的或冷冻保存的是哪类细胞呢？为什么？）目前使用的或冷冻保存的是哪类细胞呢？为什么？10代以内的细胞。代以内的细胞。因为因为10105050代部分细胞的细胞核型可能发生变化，代部分细胞的细胞核型可能发生变化， 有少部分还发生突变向癌细胞方向发展。有少部分还发生突变向癌细胞方向发展。6 6）细胞培养有接触抑制现象，可能跟
7、细胞膜上的什么物质有关）细胞培养有接触抑制现象，可能跟细胞膜上的什么物质有关呢？呢？细胞系细胞系有无接触抑制现象呢？为什么？有无接触抑制现象呢？为什么？当细胞互相挨在一起的时候当细胞互相挨在一起的时候, ,糖蛋白糖蛋白识别了这种信息识别了这种信息, ,就会就会使细胞停止继续繁殖。使细胞停止继续繁殖。失去接触抑制失去接触抑制 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质和环境条体外培养细胞时需要提供哪些物质和环境条件呢件呢？（提示：跟植物组织培养的条件类比）（提示：跟植物组织培养的条件类比） 植物组织培养植物组织培养物质：营
8、养和激素物质：营养和激素环境条件：温度；光照；无菌环境条件：温度；光照；无菌请阅读课本请阅读课本P46P46页页“动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件”聚焦二、动物细胞培养条件聚焦二、动物细胞培养条件1、无菌、无菌、无毒的环境无毒的环境对培养液和培养用具进行对培养液和培养用具进行 ；在培养液中添加一定量的在培养液中添加一定量的 ; ;定期更换培养液，定期更换培养液， ；2、营养、营养糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等动物血清、血浆动物血清、血浆3、温度和、温度和pH4、气体环境、气体环境是一类具有刺激是一类具有刺激细胞生长活性的细胞生长活性的物
9、质物质 无菌处理无菌处理抗生素抗生素以清除细胞的代谢产物俺无糖醋，微雪血清可以补充合成培养基中缺乏的物质聚焦二、动物细胞培养条件聚焦二、动物细胞培养条件1、无菌、无菌、无毒的环境无毒的环境2、营养、营养3、温度和、温度和pH温度温度36.536.50.50.5度，度，pH7.2pH7.27.47.44、气体环境、气体环境O O2 2和和COCO2 2（95%95%空气和空气和5% CO5% CO2 2 ）O O2 2是细胞代谢所必需的。是细胞代谢所必需的。COCO2 2维持培养液的维持培养液的pHpH。聚焦三、动物细胞培养的应用聚焦三、动物细胞培养的应用1、生产生物制品、生产生物制品 病毒疫苗
10、、干扰素、单克隆抗体病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等；等；2、动物基因工程离不开动物细胞的培养；、动物基因工程离不开动物细胞的培养；因为动物细胞可作为基因工程的受体细胞因为动物细胞可作为基因工程的受体细胞许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生发生染色体结构和数目的变异染色体结构和数目的变异。3、用于检测有毒物质及毒性；、用于检测有毒物质及毒性；苏丹红号”，三类致癌物。4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、 药理等方面的研究。药理等方面的研究。如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症如用于筛选抗癌药物
11、等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据及其他疾病提供依据细胞的全能性细胞的全能性大量细胞大量细胞植物体植物体培养结果培养结果相同点相同点营养、营养、促生长因子促生长因子动物血清动物血清营养、植物激素营养、植物激素培养基成分培养基成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较均进行有丝分裂，无减数分裂均进行有丝分裂，无减数分裂均无菌操作，需适宜的温度、均无菌操作，需适宜的温度、PH等条件等条件小试牛刀：小试牛刀：1、用于动物细胞培养的细胞，最好选用（、用于动物
12、细胞培养的细胞，最好选用（ ）A、任何个体的细胞、任何个体的细胞 B、成熟个体的体细胞、成熟个体的体细胞C、动物的受精卵、动物的受精卵 D、胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞、胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞2、动物细胞培养过程的顺序是（动物细胞培养过程的顺序是（ ）原代培养原代培养 传代培养传代培养 用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液A A、 B B、 C C、 D D、 3 3、动物组织培养中胰蛋白酶所起的作用是（、动物组织培养中胰蛋白酶所起的作用是（ ）A A、消化细胞膜易于融合、消化细胞膜易于融合 B B、分散培养基的蛋白质供给细胞营养、分散培养基的蛋白质供给细胞营养C C、使组织分散成单个细胞、使组织分散成单个细胞 D D、用于细胞内物质的分解、用于细胞内物质的分解DDC4 4、贴壁细胞的分裂方式属于（、贴壁细胞的分裂方式属于（ ） A A、无丝分裂、无丝分裂 B B、有丝分裂、有丝分裂 C C、减数分裂、减数分裂5 5、为了使培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细、为了使培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬液，对选取的动物组织块应用哪种物质处理（胞悬液，对选取的动物组织块应用哪种物质处理（ ）A A、胃蛋白酶、胃蛋白酶 B B、胰蛋白酶、胰蛋白酶 C C、盐酸、盐酸 D D、胰脂肪酶、胰脂肪酶BB
