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1、核酸测序技术核酸测序技术基因工程研究所基因工程研究所 人类基因组计划（人类基因组计划（Human Genome ProjectHuman Genome ProjectHGPHGP）于）于19901990年正式启动，其主要目标有：识别年正式启动，其主要目标有：识别人类人类DNADNA中所有基因（超过中所有基因（超过1010万个）；测定组成万个）；测定组成人类人类DNADNA的的3030亿碱基对的序列亿碱基对的序列；将这些信息储存；将这些信息储存到数据库中；开发出有关数据分析工具；致力于到数据库中；开发出有关数据分析工具；致力于解决该计划可能引发的伦理、法律和社会问题。解决该计划可能引发的伦理、法
2、律和社会问题。人类基因组计划是当代生命科学一项伟大的人类基因组计划是当代生命科学一项伟大的科学工程，它奠定了科学工程，它奠定了2121世纪生命科学发展和现代世纪生命科学发展和现代医药生物技术产业化的基础，具有科学上的巨大医药生物技术产业化的基础，具有科学上的巨大意义和商业上的巨大价值。意义和商业上的巨大价值。杂交测序法杂交测序法质谱法质谱法单分子测序法单分子测序法原子探针显微镜测序法原子探针显微镜测序法流式细胞仪测序法流式细胞仪测序法大规模平行实测法、大规模平行实测法、DNADNA芯片法芯片法 经典方法经典方法新技术方法新技术方法SangerSanger双脱氧链终止法双脱氧链终止法(Sange
3、r(Sanger和和Coulson1977)Coulson1977)Maxam-Gilbert DNAMaxam-Gilbert DNA化学降解法化学降解法(Maxam (Maxam 和和Gilbert,1977)Gilbert,1977) SangerSanger双脱氧链终止法双脱氧链终止法nSangerSanger于于19771977年年在在加加减减法法测测序序的的基基础础上上创创建建了了 双双 脱脱 氧氧 链链 末末 端端 合合 成成 终终 止止 法法 （ chain chain termination termination methodmethod），简简称称SangerSanger
4、法法、双双脱氧法或酶法。脱氧法或酶法。一、基本原理一、基本原理n利利用用DNADNA聚聚合合酶酶，以以待待测测单单链链DNADNA为为模模板板，以以dNTPdNTP为为底底物物，设设立立四四种种相相互互独独立立的的测测序序反反应应体体系系，在在每每个个反反应应体体 系系 中中 加加 入入 不不 同同 的的 双双 脱脱 氧氧 核核 苷苷 三三 磷磷 酸酸（dideoxyribonucleosidedideoxyribonucleoside triphosphatetriphosphate，ddNTPddNTP）作作为为链链延延伸伸终终止止剂剂。在在测测序序引引物物引引导导下下，按按照照碱碱基基配
5、配对对原原则则，每每个个反反应应体体系系中中合合成成一一系系列列长长短短不不一一的的引引物物延延伸伸链链，通通过过高高分分辨辨率率的的变变性性聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳分分离离，放放射射自自显显影影检检测测后后，从从凝凝胶胶底底部部到到顶顶部部按按5353方方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列 。 双脱氧链终止法的双脱氧链终止法的测序基础测序基础是以是以双脱氧核苷三磷双脱氧核苷三磷酸酸为测序反应的链终止剂。为测序反应的链终止剂。 POHdNTPddNTP POHOH P P P POHn在在4 4组组相相互互独独立立的的测测序序反
6、反应应体体系系中中，分分别别加加入入四四种种不不同同ddNTPddNTP，其其余余成成分分相相同同。调调整整每每个个测测序序反反应应中中dNTPdNTP与与ddNTPddNTP的的比比例例，使使引引物物的的延延伸伸在在对对应应于于待待测测模模板板DNADNA每每个个可可能能掺掺入入的的位位置置都都有有可可能能发发生终止。生终止。n产产生生4 4组组分分别别终终止止于于互互补补链链33末末端端的的每每一一个个A A、G G、C C和和T T位位置置上上的的一一系系列列长长度度的的核核苷苷酸酸链链。通通过过高高分分辨辨率率变变性性聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳和和放放射射自显影检测，直接读出
7、新合成自显影检测，直接读出新合成DNADNA链的序列。链的序列。双脱氧链末端终止法测序原理示意图双脱氧链末端终止法测序原理示意图 二、测序反应体系的组成二、测序反应体系的组成（一）待测模板（一）待测模板1 1单链模板单链模板DNA DNA nSangerSanger法法使使用用的的经经典典测测序序反反应应是是将将待待测测DNADNA片片段段克克隆隆于于M13mpM13mp载载体体中中，得得到到单单链链的的DNADNA模模板板，再再按按SangerSanger法进行测序。法进行测序。2 2双链模板双链模板DNA DNA n将将待待测测的的DNADNA片片断断克克隆隆到到质质粒粒载载体体上上，得得
8、到到含含待待测测DNADNA克克隆隆片片断断的的双双链链质质粒粒，通通过过碱碱变变性性处处理理，再再与与寡寡核核苷苷酸酸引引物物序序列列一一起起退退火火，然然后后按按SangerSanger法进行测序。法进行测序。 nPCRPCR产物产物（二）引物（二）引物n在在DNADNA聚聚合合酶酶催催化化的的测测序序反反应应中中需需要要测测序序引引物物。不不论论是是单单链链DNADNA模模板板，还还是是双双链链DNADNA模模板板，都都可可通通过过使使用用克克隆隆位位点点两两侧侧的的载载体体序序列列互互补补的的“通通用用”引物。引物。n通用引物的长度一般为通用引物的长度一般为15153030个核苷酸。个
9、核苷酸。（三）（三）DNADNA聚合酶聚合酶1 1大肠杆菌大肠杆菌DNADNA聚合酶聚合酶I I大片段（大片段（KlenowKlenow片段）片段）n KlenowKlenow片片段段酶酶是是SangerSanger法法最最早早使使用用的的DNADNA聚聚合合酶酶，具具有有5353聚聚合合酶酶和和3 3 55外外切切酶酶活活性性，但但它它催催化化链链延延伸伸反反应应的的能能力力较较差差，用用它它进行测序常产生较高的本底和假带。进行测序常产生较高的本底和假带。 2 2测序酶（测序酶（sequenasesequenase）n测测序序酶酶是是一一种种经经过过修修饰饰的的T7T7噬噬菌菌体体DNADN
10、A聚聚合合酶酶，消消除除了了3535外外切切酶酶活活性性。该该酶酶活活性性非非常常稳稳定定，具具有有很很高高的的链链延延伸伸能能力力和和极极快快的的聚聚合合反应速度，是测定较长反应速度，是测定较长DNADNA的首选酶。的首选酶。 3 3TaqTaq DNA DNA聚合酶聚合酶 n TaqTaq DNADNA聚聚合合酶酶是是PCRPCR反反应应的的关关键键酶酶，在在9595的的高高温温下下保保持持稳稳定定，可可在在高高温温下下进进行行反反应应，该该酶酶用用于于测测序序具具有有很很好好的的链链延延伸伸性性能能，能能克克服服富富含含GCGC序序列列的的模模板板形形成成自自身身二二级级结结构构对对测测
11、序的影响。序的影响。（四）放射性核素标记的（四）放射性核素标记的dNTPdNTPn一般采用一般采用-3232P-dNTPP-dNTP或或-3535S-dNTPS-dNTP作为标记物。作为标记物。 （五）测序产物的凝胶电泳及识读（五）测序产物的凝胶电泳及识读n能否将测序反应中产生的各种不同长度的能否将测序反应中产生的各种不同长度的DNADNA片片段进行有效分离是序列分析成败的关键。段进行有效分离是序列分析成败的关键。 三、三、SangerSanger双脱氧链终止法的特点双脱氧链终止法的特点1.1.快速简便，一次反应可测快速简便，一次反应可测500500个以上的碱基个以上的碱基 序列。序列。2.2
12、.荧光染料代替放射性核素标记，使该法便荧光染料代替放射性核素标记，使该法便 于实现自动化分析，能够满足绝大多数于实现自动化分析，能够满足绝大多数DNADNA 样品序列分析的需要。样品序列分析的需要。四、毛细管电泳四、毛细管电泳n毛毛细细管管电电泳泳（Capillary Capillary electrophoresis, electrophoresis, CECE）是是以以高高压压直直流流电电场场为为驱驱动动力力，在在毛毛细细管管内内使使荷荷电电粒子按淌度或分配系数进行分离的一种电泳技术。粒子按淌度或分配系数进行分离的一种电泳技术。 n具具有有分分辨辨率率高高、重重现现性性好好、灵灵敏敏度度高
13、高、快快速速和和易易于实现自动化等优点。于实现自动化等优点。 常用于常用于DNADNA测序的毛细管电泳形式有以下几种：测序的毛细管电泳形式有以下几种：n（一）毛细管凝胶电泳（一）毛细管凝胶电泳n（二）非凝胶基质毛细管电泳（二）非凝胶基质毛细管电泳n（三）阵列毛细管电泳（三）阵列毛细管电泳（一）毛细管凝胶电泳（一）毛细管凝胶电泳n毛毛 细细 管管 凝凝 胶胶 电电 泳泳 （ Capillary Capillary gel gel electrophoresis, electrophoresis, CGECGE）是是将将平平板板电电泳泳的的凝凝胶胶移移到到毛毛细细管管中中做做支支持持物物进进行行电
14、电泳泳，由由于于电电场场强强度度比比板凝胶电泳大大提高，使分离时间缩短约板凝胶电泳大大提高，使分离时间缩短约2525倍。倍。nDNADNA测测序序中中凝凝胶胶毛毛细细管管电电泳泳柱柱主主要要以以聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶作作筛筛分分介介质质，它它黏黏度度大大、抗抗对对流流，能能减减少少溶溶质质的的扩扩散散，有有极极好好的的分分离离效效果果，除除用用于于DNADNA序序列列分分析析外外，还还可可用用于于DNADNA片片段段的的分分离离和和PCRPCR产产物物的分析。的分析。n尽尽管管CGECGE具具有有极极好好的的分分离离效效果果，但但存存在在一一些些问问题题，如如制制备备凝凝胶胶柱柱费费力力
15、，凝凝胶胶形形成成和和电电泳泳期期间间产产生生的的气气泡泡影影响响分分离离，使使用用过过程程中中焦焦耳耳热热对对分分离离介介质的降解使毛细管的寿命缩短等。质的降解使毛细管的寿命缩短等。（二）非凝胶基质毛细管电泳（二）非凝胶基质毛细管电泳n为为了了避避免免CGECGE存存在在的的问问题题，非非凝凝胶胶基基质质毛毛细细管管电电泳泳用用于于DNADNA分分析析的的研研究究越越来来越越多多，常常见见的的有有线线性性聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺和和纤纤维维素素衍衍生生物物等等非非凝凝胶胶基基质质，这这些些非非凝凝胶胶基基质质在在DNADNA测测序序中中可可以以更更换换，使使毛毛细细管管的的寿寿命命延延迟迟，在在
16、优优化化条条件件下下可可获获得得高高效效及及高高速速的的分分离效果。离效果。（三）阵列毛细管电泳（三）阵列毛细管电泳n阵阵 列列 毛毛 细细 管管 电电 泳泳 （ Capillary Capillary array array electrophoresis, electrophoresis, CAECAE）是是将将毛毛细细管管电电泳泳与与板板凝凝胶胶电电泳泳的的优优势势相相结结合合，采采用用毛毛细细管管凝凝胶胶电电泳泳的的装装置置，将将多多支支毛毛细细管管进进行行并并列列进进行行分分离离与与检检测测，以以板板凝凝胶胶电电泳泳的的优优势势弥弥补补了了毛毛细细管管凝凝胶胶电电泳泳的的不不足足，可
17、一次检测多个样品。可一次检测多个样品。n阵阵列列毛毛细细管管电电泳泳散散热热效效率率高高，适适于于高高电电场场强强度度电电泳泳，是是一一种种高高速速、高高通通量量的的测测序序法法。使使用用非非凝凝胶胶基基质质，毛毛细细管管壁壁可可以以抑抑制制横横向向扩扩散散，具具有有易易于于实实现自动化的优点。现自动化的优点。激光测序法终止标记系统激光测序法终止标记系统n激激光光测测序序法法终终止止标标记记系系统统是是用用4 4种种不不同同的的荧荧光光染染料料标记不同的标记不同的ddNTPddNTP。五、五、DNADNA自动化测序自动化测序n测测序序反反应应可可以以在在同同一一反反应应管管内内进进行行，不不必
18、必分分成成4 4管管，反反应应产产物物按按终终止止位位置置的的碱碱基基不不同同其其33末末端端带带有有不不同同的的荧荧光光基基团团，被被激激发发后后产产生生不不同同的的荧荧光光，将将反反应应产产物物加加样样于于凝凝胶胶的的同同一一加加样样孔孔，电电泳泳分分离离后后，经经过过DNADNA测测序序仪仪分分析析系系统统识识别别，将将检检测测将将信信号号不不断断传传送送到到计计算算机机，通通过过软软件件分分析析，自动读出待测自动读出待测DNADNA的全部核苷酸序列的全部核苷酸序列 。图图10-5 10-5 激光测序法终止标记系统测序原理示意图激光测序法终止标记系统测序原理示意图 测序仪原理测序仪原理
19、所谓所谓所谓所谓BigDyeBigDyeBigDyeBigDye Terminators Terminators Terminators Terminators是指美国应用生物系是指美国应用生物系是指美国应用生物系是指美国应用生物系统公司专利的四色荧光分别标记的起链终止剂作统公司专利的四色荧光分别标记的起链终止剂作统公司专利的四色荧光分别标记的起链终止剂作统公司专利的四色荧光分别标记的起链终止剂作用的四种用的四种用的四种用的四种ddNTPsddNTPsddNTPsddNTPs，与四个反应管循环测序反应与四个反应管循环测序反应与四个反应管循环测序反应与四个反应管循环测序反应及四个泳道电泳检测的传
20、统双脱氧链终止法相比及四个泳道电泳检测的传统双脱氧链终止法相比及四个泳道电泳检测的传统双脱氧链终止法相比及四个泳道电泳检测的传统双脱氧链终止法相比，实现了一个反应管完成反应与一个电泳道检测。，实现了一个反应管完成反应与一个电泳道检测。，实现了一个反应管完成反应与一个电泳道检测。，实现了一个反应管完成反应与一个电泳道检测。由于使用了四色荧光分别标记了四种由于使用了四色荧光分别标记了四种由于使用了四色荧光分别标记了四种由于使用了四色荧光分别标记了四种ddNTPsddNTPsddNTPsddNTPs，可按照四种不同荧光来分别识别可按照四种不同荧光来分别识别可按照四种不同荧光来分别识别可按照四种不同荧
21、光来分别识别A A A A、T T T T、G G G G、C C C C，因此，可在一个反应管中完成循环测序反应，因此，可在一个反应管中完成循环测序反应，因此，可在一个反应管中完成循环测序反应，因此，可在一个反应管中完成循环测序反应，并通过一个电泳道电泳即可完成测序任务。并通过一个电泳道电泳即可完成测序任务。并通过一个电泳道电泳即可完成测序任务。并通过一个电泳道电泳即可完成测序任务。 1.1.荧光标记荧光标记2.2.循环测序循环测序3.3.电泳与结果分析电泳与结果分析 染料受测序仪氩离子激光激发而发射出特定光染料受测序仪氩离子激光激发而发射出特定光谱的四种不同颜色的荧光，同时，测序仪的专用谱
22、的四种不同颜色的荧光，同时，测序仪的专用激光扫描镜头实时扫描不同大小的激光扫描镜头实时扫描不同大小的DNADNA片段在相片段在相应时间通过垂直电泳胶读数区时发射的荧光，将应时间通过垂直电泳胶读数区时发射的荧光，将不同大小不同大小DNADNA片段发射的荧光实时地传递给计算片段发射的荧光实时地传递给计算机测序数据实时收集软件，将电泳结果转换成胶机测序数据实时收集软件，将电泳结果转换成胶图文件及原始数据信号。当电泳完毕后，图文件及原始数据信号。当电泳完毕后，DNADNA序序列分析软件通过分析胶图文件及原始数据信号，列分析软件通过分析胶图文件及原始数据信号，得到最终的测序结果。得到最终的测序结果。 3
23、77377型遗传分析仪型遗传分析仪310310型遗传分析仪型遗传分析仪31003100遗传分析仪遗传分析仪 37303730遗传分析仪遗传分析仪 六、六、DNADNA测序策略测序策略n nDNADNADNADNA的的的的测测测测序序序序策策策策略略略略因因因因待待待待测测测测DNADNADNADNA分分分分子子子子的的的的性性性性质质质质、测测测测序序序序方方方方法法法法和和和和测测测测序序序序目目目目的的的的不不不不同同同同而而而而有有有有所所所所不不不不同同同同。在在在在测测测测序序序序之之之之前前前前，必必必必须须须须根根根根据据据据待待待待测测测测序序序序列列列列区区区区的的的的长长长
24、长度度度度，所所所所要要要要求求求求的的的的测测测测序序序序精精精精确确确确度度度度以以以以及现有设施来制定测序总策略。及现有设施来制定测序总策略。及现有设施来制定测序总策略。及现有设施来制定测序总策略。 一、已知序列的确证性测序策略一、已知序列的确证性测序策略二、未知序列的从头测序策略二、未知序列的从头测序策略一、已知序列的确证性测序策略一、已知序列的确证性测序策略n确确证证性性测测序序（confirmatory confirmatory sequencingsequencing）是是对对已已知的核酸序列进行鉴定和证实。知的核酸序列进行鉴定和证实。n例例如如，在在临临床床分分子子诊诊断断中中
25、，对对有有遗遗传传倾倾向向的的病病例例检检测测相相关关基基因因有有无无突突变变，不不仅仅有有助助于于临临床床诊诊断断，还还有有助助于于探探索索有有关关疾疾病病的的发发病病机机理理及及基基因因突突变变引引起的表型的变化。起的表型的变化。n n多多多多数数数数情情情情况况况况下下下下，确确确确证证证证性性性性测测测测序序序序的的的的DNADNADNADNA片片片片段段段段较较较较小小小小，一一一一套套套套反反反反应应应应即即即即可可可可获获获获得得得得双双双双链链链链DNADNADNADNA其其其其中中中中一一一一条条条条链链链链上上上上局局局局部部部部区区区区域域域域的的的的核核核核苷苷苷苷酸酸
26、酸酸序序序序列列列列，通通通通常常常常只只只只需需需需对对对对亚亚亚亚克克克克隆隆隆隆于于于于M13M13M13M13噬噬噬噬菌菌菌菌体体体体或或或或噬噬噬噬菌菌菌菌粒粒粒粒载体上的一段合适的限制酶切片段进行测序。载体上的一段合适的限制酶切片段进行测序。载体上的一段合适的限制酶切片段进行测序。载体上的一段合适的限制酶切片段进行测序。n待待测测DNADNA片片断断位位于于通通用用引引物物的的测测序序范范围围之之内内时时，可可按按克克隆隆位位点点两两侧侧的的载载体体序序列列设设计计和和合合成成寡寡核核苷苷酸酸片片段段作作为为“通通用用引引物物”；否否则则，最最好好的的方方法法是是合合成成一一段段长
27、长度度为为18-2018-20核核苷苷酸酸的的寡寡核核苷苷酸酸引引物物，与与距距离待测区约离待测区约50-10050-100核苷酸的序列互补。核苷酸的序列互补。二、未知序列的测序策略二、未知序列的测序策略n未未知知序序列列DNADNA的的从从头头测测序序（de de novo novo sequencingsequencing）是是指指确确定定一一个个未未知知DNADNA序序列列的的准准确确长长度度及及核核苷苷酸酸排排列顺序。列顺序。n测测序序策策略略因因待待测测DNADNA的的长长度度而而异异，只只有有1kb1kb左左右右的的待待测测DNADNA可可选选用用定定向向测测序序法法，过过长长的的
28、DNADNA可可选选用用随随机测序法。机测序法。（一）随机测序法（一）随机测序法n随机测序法（随机测序法（random approachrandom approach）包括鸟枪法与人）包括鸟枪法与人工转座子法。其共同特点是无特定方向性，随机工转座子法。其共同特点是无特定方向性，随机对靶对靶DNADNA进行测序，最后通过计算机拼装而得到完进行测序，最后通过计算机拼装而得到完整的序列信息。整的序列信息。1 1鸟枪法鸟枪法n鸟鸟枪枪法法（shotgun shotgun strategystrategy）是是利利用用超超声声处处理理、核核酸酸酶酶（DNaseDNase）切切割割或或限限制制性性酶酶切切
29、割割，将将长长链链DNADNA随随机机断断裂裂成成适适于于测测序序的的片片段段，把把这这些些DNADNA片片段段装装入入适适当当载载体体，建建立立亚亚克克隆隆文文库库，含含有有子子片片段段的的亚亚克克隆隆扩扩增增后后分分别别进进行行DNADNA序序列列测测定定，然然后后将将序序列重叠排列，确定待测列重叠排列，确定待测DNADNA的完整序列。的完整序列。n该该法法所所获获得得的的序序列列由由许许多多序序列列累累积积产产生生，结结果果准准确确。但但由由于于测测序序的的亚亚克克隆隆是是随随机机挑挑选选出出来来的的，使使某某些些序序列列可可能能被被多多次次重重复复测测定定，而而一一些些序序列列一一直直
30、不不出出现现，通通常常要要测测定定比比实实际际靶靶DNADNA所所含含核核苷苷酸酸多多4 47 7倍倍的的序序列列；如如果果靶靶DNADNA含含较较多多的的重重复复序序列列，计计算机将难以进行分析。算机将难以进行分析。（二）定向测序法（二）定向测序法n定定向向测测序序法法（directed directed sequencingsequencing）是是指指从从待待测测DNADNA片片段段的的某某一一端端开开始始按按顺顺序序进进行行测测序序，直直至至将将待待测测DNADNA的的序序列列全全部部测测完完。该该类类方方法法具具有有方方向向性性，不不会会出出现现大大量量重重复复测测定定的的现现象象。
31、定定向向测测序序法法主主要要包包括嵌套缺失法和引物步入法。括嵌套缺失法和引物步入法。n嵌嵌套套缺缺失失法法（nested nested deletiondeletion）是是利利用用工工具具酶酶酶酶解解待待测测DNADNA，只只要要控控制制消消化化时时间间，即即可可产产生生一一组组从从同同一一端端缺缺失失的的长长度度不不一一的的互互套套缺缺失失突突变变体体，测测定定其其序序列列，通通过过相相互互重重叠叠部部分分将将相相邻邻片片段段的的序序列列彼彼此此拼拼接接，如如此此重重叠叠互互套套，获得待测获得待测DNADNA的全序列。的全序列。1 1嵌套缺失法嵌套缺失法n产生互套缺失突变体的主要工具酶有核
32、酸外切酶产生互套缺失突变体的主要工具酶有核酸外切酶IIIIII、核酸酶核酸酶Bal Bal 3131、DNADNA酶酶I I和和T4 DNAT4 DNA聚合酶。聚合酶。 用外切酶用外切酶构建互套缺失突变体测序方法示意图构建互套缺失突变体测序方法示意图 2 2引物步入法引物步入法n引引物物步步入入法法（primer primer walking walking ）是是从从待待测测DNADNA片片段段的的33端端开开始始，利利用用载载体体上上的的序序列列设设计计第第一一次次反反应应的的引引物物，测测定定一一段段DNADNA序序列列，然然后后依依次次根根据据前前一一次次测测序序结结果果，设设计计下下
33、一一次次反反应应引引物物，循循序序渐渐进进测测序，直至完成，得到靶序，直至完成，得到靶DNADNA的全部序列。的全部序列。引物步入法测序原理示意图引物步入法测序原理示意图 n基因组项目基因组项目 ( (全程测序全程测序) )人，鼠，酵母，病原微生物，水稻，玉米等人，鼠，酵母，病原微生物，水稻，玉米等人，鼠，酵母，病原微生物，水稻，玉米等人，鼠，酵母，病原微生物，水稻，玉米等ncDNAcDNA 测序测序 (EST (EST 或全长测序或全长测序) ) n比较测序或杂合子测序比较测序或杂合子测序 n n单核苷酸多态性（单核苷酸多态性（单核苷酸多态性（单核苷酸多态性（SNPSNPSNPSNP）的发现
34、与验证的发现与验证的发现与验证的发现与验证n n 突变检测突变检测突变检测突变检测n nBRCA, MSH2/MLH1, p53BRCA, MSH2/MLH1, p53BRCA, MSH2/MLH1, p53BRCA, MSH2/MLH1, p53n依据于测序的分型试剂盒依据于测序的分型试剂盒n n应用于器官移植等的应用于器官移植等的应用于器官移植等的应用于器官移植等的HLA HLA HLA HLA 配型试剂盒配型试剂盒配型试剂盒配型试剂盒n n应用于法医的线粒体测序应用于法医的线粒体测序应用于法医的线粒体测序应用于法医的线粒体测序n n指导临床治疗的指导临床治疗的指导临床治疗的指导临床治疗的
35、HIVHIVHIVHIV基因型检测试剂盒基因型检测试剂盒基因型检测试剂盒基因型检测试剂盒n n针对针对针对针对16S 16S 16S 16S rRNArRNArRNArRNA 的细菌鉴定试剂盒的细菌鉴定试剂盒的细菌鉴定试剂盒的细菌鉴定试剂盒 n n针对针对针对针对D2 D2 D2 D2 rDNArDNArDNArDNA 的真菌鉴定试剂盒的真菌鉴定试剂盒的真菌鉴定试剂盒的真菌鉴定试剂盒 DNA DNA 测序技术的应用测序技术的应用 HLA Typing: HLA Typing: 用于器官移植，脐血库和骨髓移植用于器官移植，脐血库和骨髓移植 HIV Typing: HIV Typing: 用于判断
36、指导临床鸡尾酒疗法用药用于判断指导临床鸡尾酒疗法用药 MicroseqMicroseq ID ID：细菌鉴定，细菌鉴定，10001000多种细菌鉴定多种细菌鉴定 Fungal IDFungal ID： 霉菌鉴定，霉菌鉴定，800800多种霉菌鉴定多种霉菌鉴定 Fragile XFragile X： 遗传病检测遗传病检测 Human IdentificationHuman Identification：亲子鉴定，法医鉴定亲子鉴定，法医鉴定, ,刑事破案。刑事破案。 SNPSNP检测：个体化用药检测：个体化用药/ /疾病诊断疾病诊断 Linkage Mapping SetLinkage Mapping Set：疾病基因定位分析疾病基因定位分析 AFLPAFLP：动植物育种，性状相关基因克隆，品种鉴定动植物育种，性状相关基因克隆，品种鉴定新一代测序技术新一代测序技术 n nIlluminan nABIn nRoche（454）THE END
