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1、到目前为止，到目前为止， 几十项几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关都与微生物学有关1上课复习微生物的类群微生物的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌如酵母菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻细菌、蓝藻原核细胞原核细胞微生物的共同特点：微生物的共同特点： 个体微小、结构简单个体微小、结构简单2上课复习1.1.细菌的形态细菌的形态3上课复习拟核，大型环状拟核，大型环状DNA 质粒质粒(小型环状小型环状DNA，含抗，含抗生素等抗药性和固氮的
2、基因生素等抗药性和固氮的基因)其成分为肽聚糖其成分为肽聚糖2.细菌的结构细菌的结构特殊结构特殊结构4上课复习细菌主要是以二分裂的方式细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）进行增殖（如右图）3.3.细菌的繁殖细菌的繁殖5上课复习 有些细菌在有些细菌在一定的条件下，细一定的条件下，细胞里面形成一个椭胞里面形成一个椭圆形的圆形的休眠体休眠体，叫，叫做做芽孢芽孢。芽孢的壁。芽孢的壁很厚，对干旱、低很厚，对干旱、低温、高温等温、高温等恶劣的恶劣的环境环境有很强的有很强的抵抗抵抗力力。（。（抗逆性极强）抗逆性极强）注：不是繁殖体注：不是繁殖体6上课复习例如，有的细菌的芽孢，煮沸例如，有的细菌的芽孢，煮
3、沸3 3小时以后才死亡。芽孢小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌. .7上课复习真菌是通过产生大量的真菌是通过产生大量的孢子来繁殖后代孢子来繁殖后代的，霉菌的直立菌丝的，霉菌的直立菌丝顶端生有孢子，蘑菇的菌褶处也生有孢子，孢子随风飘散，顶端生有孢子，蘑菇的菌褶处也生有孢子，孢子随风飘散，在适宜的环境条件下，能发育成一个新个体。单细胞的酵母在适宜的环境条件下，能发育成一个新个体。单细胞的酵母菌还可进行出芽生殖。孢子生殖和出芽生殖都是无
4、性生殖。菌还可进行出芽生殖。孢子生殖和出芽生殖都是无性生殖。 8上课复习专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用9上课复习 培养微生物需要解决的两个问题是什么？培养微生物需要解决的两个问题是什么？1 1、为其提供合适的营养条件和环境条件、为其提供合适的营养条件和环境条件2 2、防止杂菌的入侵、防止杂菌的入侵培养基、培养条件培养基、培养条件无菌技术无菌技术( (获得纯净培养物）获得纯净培养物）思考思考:10上课复习1.1.何为培养基？何为培养基？3.3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？分都相同，都
5、包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。请举例说明。阅读教材阅读教材P1415P1415相关内容，回答以下问题：相关内容，回答以下问题： 2.2.按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？种类、配制特点及其应用？一、培养基一、培养基11上课复习（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是人们按照微生物对营养物质培养基（培养液）是人们按照微生物对营养物质的不同需求，的不同需求，配制出供其配制出供其生长繁殖生长繁殖的营养基质的营养基质1.培养基概念培养基概念 12上课复习2.培养基的种类培养基的种类液体培养基半固体培养基固体培养基据物理性质
6、分天然培养基合成培养基据化学成分分选择培养基鉴别培养基基础培养基据用途分常用于工业生产常用于观察微生物的运动、鉴定菌种用于微生物的分离、计数用化学成分不明确的天然物质配成如加入血清血浆等根据细胞生存所需要的种类和数量用人工方法模拟合成在培养基中加入（或缺少）某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。例如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又如，在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长。根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的微生物。例如，在培养基中加
7、入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。含有一般微生物生长繁殖所需要的基本营养物质（牛肉膏蛋白胨培养基）13上课复习液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长14上课复习半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力( (弥散弥散) )15上课复习固体培养基：菌落固体培养基：菌落16上课复习单个单个或少数菌体或少数菌体2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定义：定义
8、： 菌落菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体17上课复习几种菌落及其形态18上课复习几种菌落及其形态19上课复习3.3.基本成分：基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -糖类等含碳有机物质糖类等含碳有机物质 自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3- - 、N2 、NH3牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛
9、肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：注：有机有机C源为源为异养异养型微生物提供碳源和能源型微生物提供碳源和能源含含CHON的的有机物有机物是是异异养型微生物的养型微生物的碳源碳源、氮源氮源、能源能源N2（ 固氮微生物的唯一氮源固氮微生物的唯一氮源 ）NH3 （既是硝化细菌的氮源又是能源既是硝化细菌的氮源又是能源） 硝酸盐、铵盐几乎所有微生物能利用硝酸盐、铵盐几乎所有微生物能利用 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方20上课复习特殊营养物质：特殊营养物质：生长因子生长因子(3)(3)(3)(3)常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子
10、：(1)(1)(1)(1)概念：概念：概念：概念：(2)(2)(2)(2)作用：作用：作用：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。 维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。 一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可
11、为微生物提供生长因子提取液等可为微生物提供生长因子提取液等可为微生物提供生长因子提取液等可为微生物提供生长因子（4 4 4 4）来源：）来源：）来源：）来源：21上课复习注意：注意：n最常用的最常用的碳源是糖类碳源是糖类，尤其是葡萄糖，尤其是葡萄糖n最常用的最常用的氮源是铵盐、硝酸盐氮源是铵盐、硝酸盐n对异养生物而言，对异养生物而言，含含C、H、O、N的化合物的化合物既是既是碳源，碳源，又是又是氮源，氮源，如蛋白质如蛋白质n之所以补充之所以补充生长因子生长因子，是由于，是由于缺少合成这些缺少合成这些物质的酶物质的酶或或合成能力有限合成能力有限22上课复习此外，还需要满足微生物生长对此外，还需要
12、满足微生物生长对pHpH、特殊营特殊营养物质养物质（如（如: :生长因子生长因子) )以及以及氧气氧气等的要求等的要求。23上课复习牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g分析营养构成？分析营养构成？24上课复习 牛肉膏牛肉膏是是用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物浓缩而
13、得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。牛肉膏。牛肉膏主要含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸主要含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。此外含硫氨酸较多，而且此外含硫氨酸较多，而且含有更多的细菌生长需要的含有更多的细菌生长需要的维生素和其它生长因子，维生素和其它生长因子，是生物制药发酵及和种培养是生物制药发酵及和种培养基制备的基础原材料。基制备的基础原材料。蛋白胨蛋白胨是有机化合物。是有机化合物。蛋白胨是将肉、酪素或明胶用蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂酸或蛋白
14、酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具，具有肉香的特殊气息。有肉香的特殊气息。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。物学科研等领域中的用量均很大。25上课复习选择培养基选择培养基n加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基n加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基 n不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基n不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳
15、培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌（抑制细菌、放线菌的生长）（抑制细菌、放线菌的生长）分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离固氮菌分离自养型微生物分离自养型微生物26上课复习 4. 4.配制原则配制原则目的明确：目的明确：营养全面、浓度适宜、比例恰当营养全面、浓度适宜、比例恰当适宜的适宜的pHpH值：值：有机碳源有机碳源异养型：异养型：根据微生物的根据微生物的种类、培养目的种类、培养目的选择原料选择原料自养型：自养型： 不加碳源不加碳源加入缓冲剂加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸细菌偏碱，真菌偏酸（COCO2 2碳源）碳源）生产生产科研科研27上课复习C28上课复习. .
16、自养型微生物与异养型微生物的自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是培养基的主要差别是( )( )A A碳源碳源 B B氮源氮源 C C无机盐无机盐 D D特殊营养物质特殊营养物质A29上课复习1.1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？2.2.什么是消毒？灭菌？两者有何区别？什么是消毒？灭菌？两者有何区别？3.3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？4.4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。二、无菌技术二、无菌技术阅读教材阅读教材P15-P16P15-P
17、16相关内容，回答以下问题：相关内容，回答以下问题： 30上课复习n获得纯净培养物的关键是什么？获得纯净培养物的关键是什么？二、无菌技术二、无菌技术防止外来杂菌污染防止外来杂菌污染1. 目的：目的：2. 方法：方法： 消毒与灭菌消毒与灭菌消毒与灭菌的概念和区别？消毒与灭菌的概念和区别？31上课复习（）（）消毒定义：消毒定义：利用利用较为较为温和的化学或物理方法温和的化学或物理方法，杀，杀死死大部份致病微生物大部份致病微生物的过程。的过程。 2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 32上课复习（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以以强烈的化学剂强烈的化学剂或或物理方法物
18、理方法消灭消灭所所有微生物有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。中最普通也是最重要的技术。33上课复习1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min 或或80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法: :用用70%70%酒精、新酒精、新 洁尔灭等进行皮肤消毒洁尔灭等
19、进行皮肤消毒; ;氯气消毒氯气消毒水源水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法34上课复习1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌(2)灭菌的方法：灭菌的方法：35上课复习2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-1-2h2h。3 3、高压蒸汽灭菌：、高压蒸汽灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维下维持持15-30min.15-30min.36上课复习 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的
20、某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭高温干热灭菌菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用子塞口，通常采用棉花塞棉花塞，也可采用各种，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们金属、塑料及硅胶帽，它们只可只可让空气通让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。过，而空气中的其他微生物不能通过。培养基分装完毕以后，在管口上培养基分装完毕以后，在管口上加一
21、个棉塞。棉塞能防止杂菌污加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好，加棉塞时，染，保证通气良好，加棉塞时，应使棉塞长度的应使棉塞长度的23在试管口内，在试管口内，如上图所示。如上图所示。 加棉塞加棉塞37上课复习38上课复习高压蒸气灭菌的原理是（高压蒸气灭菌的原理是（ ）A A高压使细菌高压使细菌DNADNA变性变性 B B高压使细菌蛋白质凝固变性高压使细菌蛋白质凝固变性 C C高温烫死细菌高温烫死细菌 D D高温使细菌高温使细菌DNADNA变性变性B B39上课复习关于灭菌和消毒的不正确的理解是关于灭菌和消毒的不正确的理解是A A消毒和灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的 B B灭菌
22、是指杀死环境中的一切微生物灭菌是指杀死环境中的一切微生物 的细胞、芽孢和孢子的细胞、芽孢和孢子C C接种环用烧灼的方法灭菌接种环用烧灼的方法灭菌 D D常用灭菌方法有加热法、过滤法、常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法红外线法、化学药品法A40上课复习1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1 1） 培养细菌用的培养基与培
23、养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。41上课复习2.2.无菌范围：无菌范围：实验操作空间消毒实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验用具灭菌实验操作过程实验操作过程二二. .无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：酒精灯旁操作酒精灯旁操作超净工作台
24、超净工作台42上课复习三、实验操作三、实验操作（大肠杆菌的纯化培养）大肠杆菌的纯化培养） （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌）43上课复习1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4分装：分装过程中注意不要使培养分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。引起污染。 5 5加塞加塞6 6包扎包扎操作步骤操作步骤44上课复习包器材包器材45上课复习包器材包器材46上课复习 7 7灭菌灭菌: : 将装有将装有培养基培养基的三角锥瓶，塞上棉花塞，的三角
25、锥瓶，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将将培养培养皿皿用旧报纸包裹，放入用旧报纸包裹，放入干热灭菌干热灭菌箱内，在箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h h。 8 8倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）附近倒平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种. . 9 9无菌检查：
26、无菌检查： 将灭菌的未接种（或者接种无菌水）将灭菌的未接种（或者接种无菌水）的培养基的培养基放入放入3737的温室中培养的温室中培养24244848小小时，以检查灭菌是否彻底。时，以检查灭菌是否彻底。47上课复习48上课复习（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：原理：原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较纯的菌种。纯的菌种。49上课复习涂布器涂布器接种环接种环接种针接种针50上课复习三三
27、. .大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌（纯化大肠杆菌（目的）目的）平板划线法：平板划线法：菌种菌种划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种：接种：接种环接种环防止划破培养基防止划破培养基（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）51上课复习 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼
28、烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感
29、染操作者。避免细菌污染环境和感染操作者。52上课复习 2. 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3. 3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减能使细菌的数目随着划线次数
30、的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。53上课复习6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液54上课复习55上课复习稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼冷冷涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释
31、释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍56上课复习涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。围等等。57上课复习平板划线法：平板划线法：三三. .大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯
32、化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.1.接种：接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.2.培养：培养：将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h24h24h后，后，观察并记录观察并记录58上课复习接种方法的判断？接种方法的判断？59上课复习四四. .菌种的保藏：菌种的保藏：1.1.临时保藏：临时保藏： 试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上442.2.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml
33、菌液菌液202060上课复习本课题知识小结本课题知识小结: :61上课复习【典例解析典例解析】例例例例: : : :关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( )( )( )( ) A. A. A. A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.C.C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无
34、机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量解析：解析：解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于A A A A、B B B B选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧
35、化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NHNHNHNH4 4 4 4HCOHCOHCOHCO3 3 3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C C C选项，除水以外的无机物
36、种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；源；源；源；NaHCONaHCONaHCONaHCO3 3 3 3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaClNaClNaCl则则则则只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于只能提供
37、无机盐。对于只能提供无机盐。对于D D D D选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如存在的，如存在的，如存在的，如NHNHNHNH3 3 3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。D D62上课复习例例2 2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( )( ) A. A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌 C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D
38、.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A A A说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正
39、确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B B B是错误是错误是错误是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C C C是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌
40、；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。B B63上课复习编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.
41、25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型是的微生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 . . （提示（提示：金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌具耐盐性）菌具耐盐性）自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 64上课复习（3 3）若除去成分）若除去成分，加入（
42、加入（CHCH2 2O O），该培），该培养基可用于培养养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共）表中营养成分共有有 类。类。（5 5）不论何种培养基，）不论何种培养基，在各种成分都溶化后在各种成分都溶化后分装前，要进行的是分装前，要进行的是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml65
43、上课复习（6 6）右表中各成分）右表中各成分重量确定的原则是重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基）若右表培养基用于菌种鉴定，应用于菌种鉴定，应该增加的成分该增加的成分 。依微生物的生长依微生物的生长需要确定需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml66上课复习倒平板倒平板约约50平板凝固
44、后倒置平板凝固后倒置灼烧灭菌灼烧灭菌67上课复习 1. 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手刚刚不烫手时，就可时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。68上课复习
45、3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。板培养微生物。69上课复习
