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1、基基因工程的基本操作因工程的基本操作程序程序1）目的基因的获取2）基因表达载体的构建3）将目的基因导入受体细胞4）目的基因的检测与鉴定（一）、目的（一）、目的基因基因的获取的获取主要是编码蛋白质的结构基因主要是编码蛋白质的结构基因现代获取方法：现代获取方法：1 1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3 3、化学方法人工合成、化学方法人工合成2.2.利用利用PCRPCR技术技术扩增目的基因扩增目的基因PCRPCR：是：是_的缩写。是一项的缩写。是一项在生物体外在生物体外_的核酸合成的核酸合成技术。技术。多聚酶链式反应多
2、聚酶链式反应复制特定复制特定DNADNA片段片段原理：是利用原理：是利用_的原理，将的原理，将_的核苷酸序列不断地加以复制，使其的核苷酸序列不断地加以复制，使其数量呈数量呈_方式增加（约为方式增加（约为_，其中，其中n n为为扩增循环的次数）扩增循环的次数）. .DNADNA双链复制双链复制基因基因指数指数2 2n n条件：条件：_、_、_、_、_。有一段已知目的基因的核苷酸序列有一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸、引物引物热稳定热稳定DNADNA聚合酶聚合酶适宜的温度和适宜的温度和PHPH值值过程：过程：_受热变性后受热变性后_，与，与_结合，在结合，在_的作用下延伸成
3、的作用下延伸成DNADNA。目的基因目的基因DNADNA解链为单链解链为单链引物引物DNADNA聚合酶聚合酶二二. .基因表达载体的构建基因表达载体的构建-核心核心质粒质粒DNADNA分子分子限制酶处理限制酶处理两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶重组重组DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端 复制原点复制原点+ +启动子启动子+ +目的基因目的基因+ +终止子终止子+ +标记基因标记基因1.1.基因表达载体的组成基因表达载体的组成 基因表达载体的功能：使目的基因在基因表达载体的功能：使目的基因在_稳定存在，
4、并且稳定存在，并且_给给下一代，同时，使目的基因能够下一代，同时，使目的基因能够_和发挥作用。和发挥作用。 2 2基因表达载体的功能基因表达载体的功能 受体细胞中受体细胞中遗传遗传表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。转化转化：目的基因进入目的基因进入_，并在，并在其内其内_和和_的过程的过程. . 受体细胞内受体
5、细胞内维持稳定维持稳定表达表达1.1.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞-农杆菌转化法农杆菌转化法农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法1.1.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法2.2.将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞显微注射技术显微注射技术提纯基因表达载体提纯基因表达载体体外显微注射入受精卵体外显微注射入受精卵受精卵移植受精卵移植1.1.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法2.2.将目的基因导入动物细
6、胞将目的基因导入动物细胞显微注射技术显微注射技术3.3.将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质相对少质相对少转化转化 方方法：法：_处理细胞处理细胞_细胞细胞表达载体与表达载体与感受态细胞混合感受态细胞混合_细胞吸收细胞吸收DNADNA分子。分子。CaCa2+2+感受态感受态感受态感受态基基因因工工程程的的基基本本操操作作程程序序目的基因的获取目的基因的获取基因表达载体的构建基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定1、从基因文库中获取目的基因、从基因
7、文库中获取目的基因2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3、化学方法人工合成、化学方法人工合成复制原点复制原点 + + 目的基因目的基因 + + 启动子启动子 + + 终止子终止子 + + 标记基因标记基因农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、CaCa2+2+处理法处理法DNADNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原分子杂交技术、分子杂交技术、抗原抗体杂交技术抗体杂交技术分子检测外的个体水平鉴定分子检测外的个体水平鉴定1基因工程的操作步骤：使目的基因与运载体相结合，将目的基因导入受体细胞，检测目的基因的表达是否符合特定性
8、状要求，提取目的基因。正确的操作顺序是（ ）A BC DC2.在基因工程技术中，下列方法与目的基因获得无关的是（ ）A.辐射诱变法 B.从基因文库中获取 C.反转录法 D.人工合成法A3.不属于目的基因与运载体结合过程的是 （ ）A用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端 B用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端C. 将重组DNA导入受体细胞中进行扩增 D将切下的目的基因插入到质粒切口处C4.下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步需用到的工具是（ ）ADNA连接酶和解旋酶 BDNA聚合酶和限制性核酸内切酶C限制性核酸内切酶和DNA连接酶 DDNA聚合酶和RNA聚合酶C5.转基因动物转基因时的受体细胞是( )A.受精卵 B.精细胞 C.卵细胞 D.体细胞A
