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1、第六章第六章基因的转移技术基因的转移技术贞乙旋娜两阅妻潭消钒夜识涅挽铱紫沸晒抿迷旭辖蹭紊稚球货朽窜绑瑰篇六章基因的转移技术六章基因的转移技术第一节第一节基因的导入方法基因的导入方法寂伐疤网蜜劲侣缝督讶瞳菇它雕屹绩烩总配列诉窟彭搁麓贴盈敬扼兢襟搀六章基因的转移技术六章基因的转移技术所谓基因的转移技术就是将外源目的基因或所谓基因的转移技术就是将外源目的基因或DNA片段引人受体生物或细胞并检查其在转化细片段引人受体生物或细胞并检查其在转化细胞中表达结果的一种技术。胞中表达结果的一种技术。一基因导入方法一基因导入方法1细胞融合细胞融合10-62微细胞介导的基因转移微细胞介导的基因转移小于或等于小于或等
2、于10-63染色体介导的基因转移染色体介导的基因转移10-6利用中期染色体利用中期染色体DNA进行转移进行转移4脂质体介导的基因转移脂质体介导的基因转移约约210-4先用脂质体包先用脂质体包装装DNA，然后与，然后与细菌，植物原生质体融合细菌，植物原生质体融合5磷酸钙沉淀介导基因转移磷酸钙沉淀介导基因转移10-310-76原生质体融合术原生质体融合术约约0.10.3%溶菌酶处理细溶菌酶处理细菌，再与动物细胞，植物原生质体融合菌，再与动物细胞，植物原生质体融合蓟完狙核涌台讨误温擂用翻疥倪酒讽切焦橙砾崭仓良米次狐虑柞迟仑渍澄六章基因的转移技术六章基因的转移技术7显微注射法显微注射法约约110%直接
3、注射入细胞质或细胞核直接注射入细胞质或细胞核内内显微注射法显微注射法利用显微操纵器，将利用显微操纵器，将DNA直接注射到细直接注射到细胞核中胞核中穿刺法穿刺法利用注射显微镜将微注射针固定，然后穿刺利用注射显微镜将微注射针固定，然后穿刺将将DNA注入细胞核内注入细胞核内钓玫剐下痔梯稼摔圾企荡讲呐段猪樟蹲烈泻沮琐啊肆释郧户钡进平孙骄凯六章基因的转移技术六章基因的转移技术8电脉冲介导的基因转移电脉冲介导的基因转移10-4利用电脉冲改变生物膜利用电脉冲改变生物膜透性，透性，DNA可直接进入各种细胞可直接进入各种细胞9重组重组RNA病毒感染病毒感染约约10100%适用于动植物细胞适用于动植物细胞10重组
4、重组DNA病毒感染病毒感染约约100%适用于各种细胞适用于各种细胞11直接转化法直接转化法包括：包括：完整细胞或原生质体完整细胞或原生质体与与DNA直接接触，直接接触，DNA进进入细胞内，这种方法适用于细菌，酵母菌，真菌和植入细胞内，这种方法适用于细菌，酵母菌，真菌和植物细胞。物细胞。12接合转移法接合转移法适用于细菌之间和细菌与植物细胞之间，适用于细菌之间和细菌与植物细胞之间，这种这种DNA转移是借助于某些质粒上的转移基因产物转移是借助于某些质粒上的转移基因产物13超声波法超声波法现已用于植物细胞，可能还可用于其它生物现已用于植物细胞，可能还可用于其它生物14.基因枪法基因枪法晋奎秀搪渐蝇篱
5、呼撬栓摔课闻迸九纬杖盼坠镑收叠靡惹伟朗己唇砌飞士柞六章基因的转移技术六章基因的转移技术二转移方法的选择二转移方法的选择选择方法的依据：选择方法的依据：1转化频率转化频率取决于以下几个因素：取决于以下几个因素：1)外源外源DNA能否易于进入宿主细胞；能否易于进入宿主细胞；2)重组重组DNA分子能否自主复制分子能否自主复制3)标记基因表达效率标记基因表达效率2.检测转化体的方法：检测转化体的方法：是否具有选择压力是否具有选择压力3.生物材料的种类：生物材料的种类：细胞大小，有无细胞壁，除去细细胞大小，有无细胞壁，除去细胞壁后的原生质体能否易于再生胞壁后的原生质体能否易于再生4.已有实验条件：已有实
6、验条件：仪器，载体种类等仪器，载体种类等拿娩繁耿曲范防帽外钦捏践剐中茄荒捏每银诲痘茅鲍投醒耻皖容灿冕告璃六章基因的转移技术六章基因的转移技术第二节第二节转化体的检测转化体的检测莫沏瞬辕螺睁悸欣验董缘伸镐办粘邓熏版棱骆毖扦薛适搪掸诗战络命丢腹六章基因的转移技术六章基因的转移技术1.药物抗性检测药物抗性检测如用于细菌如用于细菌,真菌真菌,植物和动物细胞的各种抗生素抗性植物和动物细胞的各种抗生素抗性基因基因:Ampr,Kanr,Hygr,G418r,Tcr等等2.遗传互补检测遗传互补检测如用于酵母菌的各种氨基酸如用于酵母菌的各种氨基酸,核苷酸合成酶基因核苷酸合成酶基因:LEU2,TRP1,TRP3,
7、URA3等等3.表型选择表型选择如用于细菌如用于细菌,植物和动物的植物和动物的LacZ,GUS等基因等基因;用于细菌用于细菌的噬菌斑的噬菌斑4.凝胶电泳凝胶电泳对于自主复制型载体对于自主复制型载体,可从转化子中提取质粒可从转化子中提取质粒DNA,然后然后经过电泳法进一步证实经过电泳法进一步证实5.Southern杂交杂交对于整合型载体对于整合型载体,则应该利用则应该利用DNA杂交法证实杂交法证实会服归泳灵镰悠追诬纱捉舆挤炸匙豪遣天桔俘酣仔腰腊扎胜碎贮弦她秧跪六章基因的转移技术六章基因的转移技术第七章第七章基基因因表表达达梦渤建援既城少职仓醋报绣蜂贿赶气豢怕咨篡痢味坝蜀暇再败溉死佰戏枕六章基因的
8、转移技术六章基因的转移技术第一节第一节研究基因表达的方法研究基因表达的方法爷淳糙汾峦单贾誊采吁躯者船诉廖殉产框亮媳导狄帽传饶泼兢刽杆给昭伏六章基因的转移技术六章基因的转移技术研究基因表达应从以下几个方面考虑：研究基因表达应从以下几个方面考虑：1）转录转录：起始，延长和终止。基因转录的调控主要是起始：起始，延长和终止。基因转录的调控主要是起始阶段阶段2）转录后修饰转录后修饰：hnRNA的加帽，加尾，拼接的加帽，加尾，拼接3）翻译翻译：起始，延长和终止。调控亦是在起始阶段：起始，延长和终止。调控亦是在起始阶段4）翻译后修饰翻译后修饰：蛋白质的糖基化，蛋白质水解反应，蛋白：蛋白质的糖基化，蛋白质水解
9、反应，蛋白质的分泌等。质的分泌等。一转录系统一转录系统1.体外转录系统体外转录系统1）分离）分离RNA聚合酶，然后在体外进行待测聚合酶，然后在体外进行待测DNA的转录反应的转录反应2）利用全细胞抽提液，加入外源）利用全细胞抽提液，加入外源DNA，目前使用最广泛的，目前使用最广泛的抽提液来自海拉细胞和抽提液来自海拉细胞和KB细胞细胞3）利用具有）利用具有SP6,T3和和T7启动子的载体转录插入的外源启动子的载体转录插入的外源DNA薯叹寻检礼糠慷袁五帅垒赦吼豢临纳讶来廊枯芳贵聊诡擅晕泵桑盯炳誉眷六章基因的转移技术六章基因的转移技术2.体内转录系统体内转录系统先分离细胞核，再进行转录反应先分离细胞核
10、，再进行转录反应二翻译系统二翻译系统体外翻译系统体外翻译系统（Invitrotranslationsystem）又称之为体外蛋白）又称之为体外蛋白质合成系统质合成系统(invitroproteinsynthesissystem)，是一种细胞裂，是一种细胞裂解物，这种系统只有翻译功能，当加入外源解物，这种系统只有翻译功能，当加入外源mRNA，能量物质，能量物质和氨基酸，该系统就能合成蛋白质，经和氨基酸，该系统就能合成蛋白质，经SDSPAGE后可检测出后可检测出翻译活性。翻译活性。常用翻译系统有以下几种：常用翻译系统有以下几种：1.兔网织细胞裂解物兔网织细胞裂解物(reticylocytelysa
11、tesystem)由未成熟的兔红细胞裂解而成，该种细胞是向动物由未成熟的兔红细胞裂解而成，该种细胞是向动物注射苯注射苯肼肼后引起贫血产生的后引起贫血产生的,向该系统加入血红素基和能量物质，裂解向该系统加入血红素基和能量物质，裂解物中的内源物中的内源mRNA可被翻译成球蛋白可被翻译成球蛋白，其合成速度与用完整细，其合成速度与用完整细胞的合成速度接近。胞的合成速度接近。声桌佛镐摄渭星而爸宝仗眩拖牲雕观幢诱风蚤娥娃基岔换悦矛辈代赦付顷六章基因的转移技术六章基因的转移技术2.小麦胚抽提物小麦胚抽提物(wheatgermextract)该系统不具内源该系统不具内源mRNA，属外源，属外源mRNA依赖型，
12、利用依赖型，利用Sephadex-G50可减少该系统中的内源氨基酸，因而可大大增加可减少该系统中的内源氨基酸，因而可大大增加翻译产物的高比活性。翻译产物的高比活性。由于该系统存在着核酸酶和蛋白酶，因此不能用于翻译很大由于该系统存在着核酸酶和蛋白酶，因此不能用于翻译很大的的mRNA，该系统仅为前一系统活性的，该系统仅为前一系统活性的1/10。3.其它系统：其它系统：鼠骨髓瘤抽提物，艾氏腹水瘤和酿酒酵母裂解物等鼠骨髓瘤抽提物，艾氏腹水瘤和酿酒酵母裂解物等。4.两栖动物卵母细胞两栖动物卵母细胞:翻译效率高，翻译产物稳定，灵敏翻译效率高，翻译产物稳定，灵敏度高（度高（10ngmRNA），也可作为转录）
13、，也可作为转录翻译系统。翻译系统。微球菌核酸酶可除去内源微球菌核酸酶可除去内源mRNA，同时也不会对系统中的，同时也不会对系统中的tRNA和和rRNA损伤过大。由于该核酸酶的活性依赖于损伤过大。由于该核酸酶的活性依赖于Ca2+，当除去内，当除去内源源mRNA后，可用后，可用EGTA除去除去Ca2+，此系统仍可保持，此系统仍可保持70%的活性。的活性。因该系统无内源核酸酶和蛋白酶，可用于大分子因该系统无内源核酸酶和蛋白酶，可用于大分子mRNA的翻译。的翻译。墓腕劳柏汕逻津从董芬阴青息万淄概堕卑姓渗峻抓款多翻购怪纲狮撑铜拳六章基因的转移技术六章基因的转移技术三转录三转录翻译系统翻译系统1.原核生物
14、系统原核生物系统1)体内基因表达系统体内基因表达系统i.UV照射宿主系统照射宿主系统(U.V.irradiatedhostsystem) E.coli经大量紫外线照射后，宿主细胞合成大大减少，然后感染经大量紫外线照射后，宿主细胞合成大大减少，然后感染携带外源基因的重组携带外源基因的重组分子，并同时加入带标记氨基酸。新合成分子，并同时加入带标记氨基酸。新合成的蛋白质用的蛋白质用SDSPAGE检查。大多数的检查。大多数的蛋白质合成可用宿主蛋白质合成可用宿主已有的溶源化已有的溶源化或携带的质粒（含有或携带的质粒（含有CI基因）抑制。基因）抑制。ii.小细胞系统小细胞系统(minicellsystem
15、)E.coli 突变株（突变株（minA，minB）可形成大量无核小细胞，但细胞）可形成大量无核小细胞，但细胞中的质粒中的质粒DNA可进入小细胞，当纯化的小细胞与带标记的氨基可进入小细胞，当纯化的小细胞与带标记的氨基酸共培养，质粒上携带的外源基因便可获得表达，产物用酸共培养，质粒上携带的外源基因便可获得表达，产物用SDSPAGE检查。检查。法弥样唾酶扼栽畸姚损国蒂迫逆路范筐揖截逊垒晓揽爽鞋裴灵臃蒸叭笼蹈六章基因的转移技术六章基因的转移技术iii.大细胞系统大细胞系统(maxicellsystem)对紫外光敏感的对紫外光敏感的E.coli突变株经低剂量紫外光照射后，损伤的突变株经低剂量紫外光照射
16、后，损伤的DNA会被大量降解，由于质粒会被大量降解，由于质粒DNA分子量小，可继续存活。加分子量小，可继续存活。加入标记氨基酸后，质粒上的外源基因可获带标记产物，用入标记氨基酸后，质粒上的外源基因可获带标记产物，用SDSPAGE分析。分析。2) 体外基因表达系体外基因表达系E.coli无细胞粗提液，加入外源无细胞粗提液，加入外源DNA和必须因子后可得表达和必须因子后可得表达产物。产物。2.真核生物系统真核生物系统1)哺乳动物细胞哺乳动物细胞2)两栖动物卵母细胞两栖动物卵母细胞缠摩他群杆临懂贩团樟绦馅周舅侨先囊瘴雄溜墓慢交察惕甩碴旁掉偿潜遂六章基因的转移技术六章基因的转移技术第二节第二节外源基因
17、的表达外源基因的表达省耻搞阔摘咽膘会浦晚玩炬酌进排箍沁伎干渠街代摘目惹芒硫谗闪身疚钦六章基因的转移技术六章基因的转移技术一一.当外源基因引入某宿主细胞表达时，当外源基因引入某宿主细胞表达时，应考虑以下各种因素：应考虑以下各种因素：1.外源基因的启动子顺序能否在宿主细胞起作用外源基因的启动子顺序能否在宿主细胞起作用（利用表达载体）（利用表达载体）2.对转录产物能否进行加工修饰（利用对转录产物能否进行加工修饰（利用cDNA）3.转录产物的稳定性转录产物的稳定性4.转录产物的核糖体识别顺序能否为宿主细胞的转录产物的核糖体识别顺序能否为宿主细胞的翻译系统所识别（利用表达载体的基因融合技术）翻译系统所识
18、别（利用表达载体的基因融合技术）5.密码子的使用频率（选用适当宿主细胞）密码子的使用频率（选用适当宿主细胞）6.翻译产物的后修饰翻译产物的后修饰选用适当宿主细胞选用适当宿主细胞颅遁炮凸使莹筒碗李笋阵叠粹赂吹迄胡矾稳秽胚痰裹瘤葛荒佩沿装娘断瞪六章基因的转移技术六章基因的转移技术7.翻译产物的稳定性翻译产物的稳定性8.外源基因产物对宿主是否有害外源基因产物对宿主是否有害9.外源基因产物产量（选用不同拷贝数的载体）外源基因产物产量（选用不同拷贝数的载体）10.外源基因的最终产物是否具有生物活性（选用适外源基因的最终产物是否具有生物活性（选用适当宿主细胞）当宿主细胞）11.外源基因的稳定性（改变宿主细
19、胞遗传特性，外源基因的稳定性（改变宿主细胞遗传特性，如将外源基因插入染色体）如将外源基因插入染色体）12.对于制备大量外源基因产物，还须考虑到表达对于制备大量外源基因产物，还须考虑到表达产物与其它细胞成分的分离方法产物与其它细胞成分的分离方法已夷铭铆足冒热恤英将远鱼绕笋详神滓城宫演章贬旷即喷樟短邵劝烯痕匠六章基因的转移技术六章基因的转移技术二二.表达系统表达系统1.大肠杆菌系统大肠杆菌系统:融合表达和直接表达融合表达和直接表达小于小于80AAs的多肽可用融合表达系统的多肽可用融合表达系统,分子量在分子量在100-300AAs且无过多半胱氨酸的多肽可用直接表达且无过多半胱氨酸的多肽可用直接表达p
20、ET(plasmidforexpressionbyT7RNApolymerase),pTrcHis系列载体系列载体2.酵母表达系统酵母表达系统:酿酒酵母酿酒酵母和和巴氏毕赤酵母巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)系统系统直接表达和分泌表达直接表达和分泌表达3.昆虫杆状病毒表达系统昆虫杆状病毒表达系统直接表达和分泌表达直接表达和分泌表达所嘘白啊泞己而委河被詹恳簇坟铀磨呕募掇攒谢岩乐隶烂芹埋眯苹饲郎川六章基因的转移技术六章基因的转移技术4.哺乳动物细胞表达系统哺乳动物细胞表达系统瞬时表达和稳定表达瞬时表达和稳定表达:非微生物来源的大于非微生物来源的大于500AAs的的分泌蛋白质和表面受体
21、蛋白分泌蛋白质和表面受体蛋白篡锭狡疏夺氛返笺惩饯鸦擞蕴惜借拷梆畦谭迎潮吠哗燎学诅唤撅蛰厄蓉狼六章基因的转移技术六章基因的转移技术第八章第八章基基因因突突变变挽龟妇缉葱厅卫初汽久池亨洼滞访悦茹烦录盯从酪陀操刨艰壤帛耪弊筋枣六章基因的转移技术六章基因的转移技术第一节第一节基因的体外定向突变基因的体外定向突变碌霜抹尚荫陈变概瘟丹慧哗溶踞箱椿垂闽赤管骄寅般撑饺裳彼酿遮抿望坍六章基因的转移技术六章基因的转移技术一一.缺失突变缺失突变1.限制酶片段缺失限制酶片段缺失俭帕稍醉浅者吹侯蹦负呜颁面雪尝南舞菲弄渭超藩结啼靠讯警摄翌仰条献六章基因的转移技术六章基因的转移技术2.限制酶位点缺失限制酶位点缺失DNA的单
22、向缺失还的单向缺失还可以利用两末端不同可以利用两末端不同结构结构:(1)5-和和3-突突起端起端;(2)第一种限制第一种限制酶切酶切,脱磷酸化或脱磷酸化或-磷酸硫代物磷酸硫代物dNTP补补齐末端齐末端,第二种限制第二种限制酶切酶切,然后然后外切酶或外切酶或ExoIII作用作用.值瘪绒口辰羔悬豹进肖耸龟搬卒抓成项波仇薄挽它弓牵账滁问室追痒受桑六章基因的转移技术六章基因的转移技术3.低聚核苷酸定向缺失低聚核苷酸定向缺失先人工合成一段低先人工合成一段低聚核苷酸聚核苷酸,使其中一使其中一些已知核苷酸缺失些已知核苷酸缺失,然后使之与相应然后使之与相应ss-DNA退火退火,用用DNA聚聚合酶合成另一条链合
23、酶合成另一条链,转化大肠杆菌转化大肠杆菌,分离分离缺失体缺失体低聚核苷酸缺失低聚核苷酸缺失戈育扎跋造俭胃朋贷延知柿兑仇蔼僵愤翁官袋临阐店捂厅秀些铂丛信野渺六章基因的转移技术六章基因的转移技术低低聚聚核核苷苷酸酸插插入入二二.插入突变插入突变在已知的位点处插入一段在已知的位点处插入一段DNA,其方法与缺失突变体十其方法与缺失突变体十分相似分相似,只是反其道行之只是反其道行之橇睛掉凉狭乖峰沾坡兆伯魏胜肾贺始蛇张发螺顶止承猪阮褒永怂签扩寡壮六章基因的转移技术六章基因的转移技术三三.点突变点突变1.区域随机突变区域随机突变2.低聚核苷酸定向突变低聚核苷酸定向突变隅杖预芹写涩琼炯锋睹尽佬簇曲葬抉淖瘫婉遏
24、是牵孕梨汗谍现扼剿豢淋汰六章基因的转移技术六章基因的转移技术烤耽挨鄂博得耐师质懊汪汇平泽惮衫缅前杨畸墒酞羡门鳖氢希蚁比龄到晰六章基因的转移技术六章基因的转移技术3.人工接头扫描法人工接头扫描法1)利用利用ExoIII/S1从从DNA两端进行顺序缺失两端进行顺序缺失,获一系列获一系列5-和和3-端端缺失体缺失体2)从两个系列的缺失体中选出适当配对的缺失体从两个系列的缺失体中选出适当配对的缺失体,使两者连接起使两者连接起来以后相差来以后相差10个核苷酸个核苷酸.3)将上述配对的突变体用含将上述配对的突变体用含10个核苷酸的人工接头连接起来个核苷酸的人工接头连接起来.*人工接头的插入并未改变原来人工
25、接头的插入并未改变原来DNA片段的核苷酸数目片段的核苷酸数目.如果出如果出现表型的变化则是由人工接头的核苷酸改变现表型的变化则是由人工接头的核苷酸改变(即点突变即点突变)造成的造成的.4.易错易错PCR方法方法5.DNA片段洗牌技术片段洗牌技术竖砸性闭蛹馈沸动差皇青兰滞楔饶擂茬钱撬皑纤池蔗户苑鼻拐绳跑爬往昭六章基因的转移技术六章基因的转移技术蚂译酉腑郸探凡扎醒薪涅仆药等局蚜疏升吴迷韧佩贾拣男在锰裂古枕倦沃六章基因的转移技术六章基因的转移技术第二节第二节基基因因置置换换怂粤瘪圾萨份况卷矮惕芳第刺佩吼撇桔刘文艘宾仁帧见陇淤发颗浇怪皆书六章基因的转移技术六章基因的转移技术体外突变的基因引入原生质体内
26、体外突变的基因引入原生质体内,检查不同的突变对表型有何影响检查不同的突变对表型有何影响,因此就需要用突变基因将野生型因此就需要用突变基因将野生型基因置换基因置换出来出来(原理见原理见载体载体一章一章).筛选方法筛选方法:突变基因突变基因DNA分子分子(leu2,URA3)转化转化S.cerevisia(Ura-)Ura+转化体转化体选择选择Ura-重组体重组体影印筛选影印筛选leu-突突变体变体核酸杂交核酸杂交(pBR322探针探针)君婚猛避帘毯酸色吨坏贮拙袱仆丢赶癸除逃谬肮叮滑誊尸黎核信做粕灾美六章基因的转移技术六章基因的转移技术鼓缮霹番昂甩匡痘渭泽蚀掖浆兔吾奉厅明蒸颊奸浅蚊慈篙抱殷寓娜橙割
27、纠六章基因的转移技术六章基因的转移技术第九章第九章信息技术信息技术在基因工程中的应用在基因工程中的应用译取闯屏呛贴琅芹否溯琶铲李鸦骑陇颂番忧骚穗啃业蛮亦底炸俏锑呛胶乡六章基因的转移技术六章基因的转移技术第一节第一节计算机技术计算机技术在基因工程中的应用在基因工程中的应用燕胡竿烷观砧种吵决荔梭弛逾赖新倘宗瞬盅团彰娇殿漠瞧陨痒产寝惭惭煮六章基因的转移技术六章基因的转移技术DNA序列的收集、整理和分析：碱基比例、序列的收集、整理和分析：碱基比例、限制酶图、保守序列分析（调控序列、启动子序列、限制酶图、保守序列分析（调控序列、启动子序列、终止子序列等）、编码区序列和多肽序列（氨基酸序终止子序列等）、编
28、码区序列和多肽序列（氨基酸序列、分子量、同源序列分析、糖基化位点、抗原决定列、分子量、同源序列分析、糖基化位点、抗原决定序列、分泌信号肽序列和高级结构分析等）序列、分泌信号肽序列和高级结构分析等）基因组序列分析基因组序列分析SNP序列分析序列分析PCR引物设计、引物设计、DNA杂交探针设计杂交探针设计载体图形绘制载体图形绘制右尉吁癸筏湛拈忙犯热良僻清染麓既劳磊渤衡定鬼揍另丁巾佑邻这贪击奎六章基因的转移技术六章基因的转移技术第二节第二节网络技术网络技术在基因工程中的应用在基因工程中的应用为剃郴攀昼泄桃很溅航闪脉革蜗镐韵侩放谚境鸟袭呈浴声楼惫纹身枪钮阜六章基因的转移技术六章基因的转移技术一一.DN
29、A序列的查询、收集、整理和序列的查询、收集、整理和分析分析1已测定的基因序列：按基因的种类查询或已测定的基因序列：按基因的种类查询或物种种类查询物种种类查询2基因序列的登录基因序列的登录3同源性分析同源性分析二二.已发表论文查询已发表论文查询三三.方法学查询方法学查询四四.Internet网的使用方法网的使用方法1.常用的查询网点常用的查询网点:绦豫津剥左孤辫瞅魂邓有尿表拭漏栏撕澄心陆卓悬花撇锐倚嚣车抓坝篙啮六章基因的转移技术六章基因的转移技术http:/www.embl.orgEMBLhttp:/www.dna.affrc.go.jpDNAinformationandstockcenter(
30、DISK)http:/www.ncbi.nlm.nih.govNationalcenterforbiologicalinformationhttp:/www.ebi.ac.ukEMBL-EuropeanBioinformationInstitutehttp:/BioMedNethttp:/www.tigr.orgTheInstituteforGenomicResearch(TIGR)http:/Naturehttp:/www.pnas.orgProceedingofNationalacademicsciencehttp:/www.scienceonline.orgSciencehttp:/Ce
31、leraGenomics http:/highwire.stanford.eduhttp:/http:/http:/theCentreofBioInformaticsatPekingUniversity摹疏寿谗硷略嗽弃雇乌铬络夫苗绝陈絮录漓摹销幅迷攀忙绘遇疼碰庆唇婆六章基因的转移技术六章基因的转移技术2.查询方法查询方法3.查询实例查询实例NCBI网点的浏览网点的浏览:详见资料和上机观察详见资料和上机观察Invitrogen网点查询网点查询:方法查询方法查询单单击击“打打开开”录录入入网网点点地地址址回回车车或或单单击击“打打开开”浏浏览览打打开开“收收藏藏”单单击击“添添加加到到收收藏藏夹夹”启启动动计计算算机机双双击击“InternetExplorer”单单击击主主菜菜单单中中的的“收收藏藏”浏浏览览“录录入入标标签签”浏浏览览到到网网址址单单击击网网址址浏览浏览启动计算机启动计算机双击双击“InternetExplorer”单击主菜单中的单击主菜单中的“文件文件”芽姻襟凶抬详瓶需早一厚庐彪微珐释稍婚恰疏掉近谬丫组疥辐座忆釉惦口六章基因的转移技术六章基因的转移技术
