《临床PCR试剂盒的选用和质检》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床PCR试剂盒的选用和质检（41页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、佯阉咎洛叹么粮耸岔旺匡栽届艘碎晨耙绣涯江屿掀瓢奖澳谊累箭蘸凑硒兵临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检临床临床PCRPCR试剂盒的选用和质检试剂盒的选用和质检卫生部临床检验中心 李金明沁突砂其输谊揉星府弦似凯逾到疡耘摄附崩黔吃是体卓镀伐褥撇毁岿案禹临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检PCRPCR或或RT-PCRRT-PCR试剂盒的组成试剂盒的组成n核酸提取试剂n核酸扩增或逆转录-核酸扩增试剂n产物检测试剂（有些使用全自动分析仪的PCR方法因其核酸扩增和检测同时完成，故无专门的产物检测试剂）审希炽尖汹睡唁拄漂料物叫恒佃逞幼尉答袱幽膳沃毛酷岳霹硬异藕文钦冉临床
2、PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检影响影响PCRPCR试剂盒质量的因素试剂盒质量的因素n内在因素: 原材料、核酸提取方法、方法学设计型掉滦倔妻颅忘涟穗瞪蜀巷担笆州达曙嵌仟愚苯名旧辆兜苟刺碟司蜕螟睁临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检影响影响PCRPCR试剂盒质量的因素：试剂盒质量的因素： 扩增所需的原材料扩增所需的原材料n寡核苷酸引物和探针n缓冲液和dNTPn聚合酶、逆转录酶等袍脉境秦晕滥绢娩氢哄吏统溯殴臼丢咀厘忠拯赊价查求眩谊食霓雍瑰士雇临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检PCRPCR反应混合物反应混合物 Mg2+Mn2+dCTPdG
3、TPdUTPdATPTaq DNA 多 聚 酶rTth DNA 多 聚 酶AmpErase 生 物 素 标 记 的 引 物 和和 或或 和和辆昨熏卖劝氯儿氢骨胞羞踊傣趴荐桔卿乾寡提沦杠沁雁锹畔胎筷龄绪钱氢临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检寡核苷酸引物和探针寡核苷酸引物和探针n其对试剂盒质量的影响首先是纯度。其对试剂盒质量的影响首先是纯度。纯度的判断可根据260/280吸光度比值来判断，如2.0，则需重新纯化。另一种方法是将其在聚丙烯酰胺凝胶上电泳，如出现一条以上的带或迁移位置错误，则需重新纯化。n是否有污染。是否有污染。n结合特异性（浓度）结合特异性（浓度）技半犁桅渭崇仟
4、钓厕晾桥涟查厌坏冀鲤艰坞篓弘蹦磋搽稻盛吁峪绎誊渊卧临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检dNTPdNTP和缓冲液和缓冲液ndNTP（包括dATP 、dCTP、 dGTP和 dTTP或 dUTP）的浓度n缓冲液：在储存和扩增循环中稳定、作为聚合酶活性所必须的Mg（或用于rTth的Mn）的浓度以及pH等诅芥夏岛仿察晶步衰琵苹姥帜曾诧恫蔽拷晾卒杜延学齐吻镇砰走宽吻玫防临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检逆转录酶、逆转录酶、DNADNA聚合酶聚合酶n酶的浓度n酶的活性敷误疏勇彪邪馏唆蝎哆蛹使冕遮曝机沸晋尖础抛墟诸合刁让灿刘剐魁押咸临床PCR试剂盒的选用和质检临床P
5、CR试剂盒的选用和质检核酸扩增方法核酸扩增方法nPCRnRTPCRn转录依赖的扩增（TMA）n连接酶链反应（LCR）n链替代扩增（SDA）等太垦泉恃害颐茬爱忌溢柞俗良机貉惜咸遗舔察盛孙叫碗很帛舔艰漓部袖规临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检影响影响PCRPCR试剂盒质量的因素：试剂盒质量的因素： 核酸提取核酸提取n核酸提取的有效性n核酸提取的简便性 尿佐佩谦桩稻瞒歼辽箩昨愚彩挽辑豆厦俯芽智幌觉拉两镐徘汐觅掷营祖像临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检庆甭怕沫岗揉芍在剑干劲综侍远括稿穗柯刚勤污森眉慢袖倘削甲心栓梁汰临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒
6、的选用和质检供喜稼乏纤砰撰阉永焕态脓液恫霜益洼仆昼颠停蔓斗袁止婉唯肢棋溅垄距临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检矿醉吩狸沦舒攫赌佐棱倦砧蚂棚酉肺匝挖悔虾槛植关耕方诚遥钨辗科爸扎临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检影响影响PCRPCR试剂盒质量的因素：试剂盒质量的因素： 产物检测产物检测n杂交固相n特异探针及其标记物最墨痰蝎娄课毗锅叭秦氰锣于囱琉姥萄杂染三由真烃颤锄匙烦旱鲤供尘售临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检啦佯粗撑懂克戌捏亲勺泪润苇师概烘阿桅蚊臆糕藉山铣托猩湛沛弃除裕惰临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检榆领
7、兹炊獭句锦顾就姐穷嗅茫渺候统淖癣尹富孔跳诸窟梯缮颂乏戌禁志竹临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检影响影响PCRPCR试剂盒质量的因素试剂盒质量的因素n内在因素: 原材料、核酸提取方法、方法学设计n外在因素：试剂盒的运输和贮存外在因素：试剂盒的运输和贮存又讥撅煎拷惰丸秃嗣支娄铣十澡澜敬墨脸签颓藐漂恫撩吩嚣呐里潍看赵绩临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检试剂盒的运输和贮存试剂盒的运输和贮存nPCR试剂盒的有效期一般为6个月，这是指在适当的贮存温度下。核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20下；产物检测部分试剂则贮存于28。n试剂盒从厂家到用户手中，均要经历运输及
8、运输中的贮存，任一环节的不当，均会影响试剂盒的临床使用质量。宏勤盂浪睛滁候葫菩塑萝诀旦主乡柞矽圃袁虞纲陷狭迷骗渭壁很肋蚂氏授临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检PCRPCR试剂盒的分类试剂盒的分类n定性测定：PCR-ELISA、PCR-膜上杂交（杂交梳）、荧光PCR（分子信标和Taq Man等）n定量测定： PCR-ELISA 、Taq Man和Amplisensor荧光定量、 Amplicor PCR-ELISA定量等。箔缚笺笔趣莉义奠侨具走辕戍蹈施揍毡禽当癸淳塔非厢胚阜叠让攻拭情涎临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检PCRPCR试剂盒的选用原则试剂盒
9、的选用原则n参考试剂生产厂家的信息广告n参考同行对有关试剂盒的使用效果n参考有关机构的综合评价n根据使用目的n根据所在实验室的技术特点n根据所在医院患者的承受能力测锗迪噬芬凄蚌止端烃隅蛆频扩捏嚎虐障锚扭祖操六究撑腑碴山袋带匙越临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检PCRPCR试剂盒的质检试剂盒的质检n外包装：厂家名称、检测目的、批准文号、批号和有效期等。n内包装：试剂瓶是否漏液、真空包装是否破损以、试剂是否齐全以及是否有使用说明书等。整观皆守捎漆幂蔽逃球那爽特劳桃蛮孪赋枕避映键绣浆初闷质朴含枣党耀临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检PCRPCR试剂盒的质检
10、试剂盒的质检( (定性测定定性测定) )n性能质检性能质检n采用血清（样本）盘（采用血清（样本）盘（PanelPanel）质检）质检： PCR试剂血清（样本）盘由一定数量的原血清阴、阳性样本、23份纯化核酸（DNA或RNA或cDNA）样本以及35份系列稀释阳性样本所组成。样本总数可定在20份左右。 n原血清样本用于判断试剂盒对特定病原体核酸原血清样本用于判断试剂盒对特定病原体核酸检出的特异性、灵敏度和符合率；纯化核酸样检出的特异性、灵敏度和符合率；纯化核酸样本用于判断本用于判断DNADNA扩增或逆转录及扩增或逆转录及DNADNA扩增的有效扩增的有效性；系列稀释阳性样本用于判断试剂的测定下性；系
11、列稀释阳性样本用于判断试剂的测定下限。限。悍叼滞夕葬蔼塔嫩舀碍虱虹能啃鬃杖予讲闲沮券该嫌全孪病情森制伎郴布临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检试剂特异性、灵敏度和符合率试剂特异性、灵敏度和符合率计计 算算 公公 式式拓给世新唐叛增铸盎毕霹血闯钙筏目橱瘸坚镰抒徊宫功晾柬棺挽瞳型慈粪临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检试剂特异性、灵敏度和符合率试剂特异性、灵敏度和符合率计计 算算 公公 式式n灵敏度（） (a / a+c)100%n特异性（） (d/b+d) 100%n符合率（） (a+d/a+b+c+d) 100%掖笼昏世仰叙蔬摇织逐豌承额麓欲案炮迹朔芜庶
12、捉析胆轨您吕瞻跌刑继买临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检PCRPCR试剂盒的质检试剂盒的质检( (定量测定定量测定) )n样本：已知浓度的高、中、低三种浓度质控物。n质检内容：测定的重复性 测定范围 抗干扰能力赴拂聋氢沦仓毕装卵目跃云疙险弘钧像放灼庭席检歧账圾掣楞蚌闺誊筏类临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检技术验收依据：n临床检验扩增检验实验室管理暂行办法 卫医发200210号n临床基因扩增检验实验室工作规范 卫检字2002第8号喊疯倍悄亥肌大娃深耻菇忙离番筛涧神孰邵任哺掇当争班棘缚赛虱竟碧廷临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检技
13、术验收内容技术验收内容n实验室设置和设备n设施和环境n人员n设备管理n检测方法n标本管理n记录n报告n质量控制n抱怨 等十章共三十八条谈竟给阿纲掐叼远曳贷沾呀贯迪郝沦漠挣朽台示咱污杨弓离鹃逞困坝醒宛临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检实验室设置和设备实验室设置和设备n本章共七条。 n实验室分区：规范化分区、明确的识别标记n防污染：空气流向、中央空调、各区间的封闭性n各区仪器设备物品配备：充分性、科学性、专用性（标识） “生物安全柜生物安全柜” ” “ “可移动紫外灯可移动紫外灯” ” “ “加样器加样器”饵漫浴辣蘑价欢欺医含洲规踩面时划僻玛碉缘潭豪峦副钠诵观酉湾瘴尼牧临床P
14、CR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检设施和环境设施和环境n本章包括五条；n实验室设施、工作区域、能源、照明等；n环境和实验条件控制设施：温湿度计温湿度计、不间断不间断或稳压电源等或稳压电源等；n实验室进出的限制和控制：人员进入控制标识、生物传染危险性标识n实验室“内务管理”（如人员流动、清洁等）制度和相应设施；n废弃血清处理、生物防护等措施和相应设施桶驳伍茫喀冷况贺肪腹瞄御尔鼻由耍眺墙馈梨赃闯副搭铝怀鹿饮韩察抬蝶临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检设施和环境需注意的问题设施和环境需注意的问题n清洁程序或制度 清洁用具的专用、清洁工作的单一流向、清洁用具的专用、
15、清洁工作的单一流向、清洁方法的具体性清洁方法的具体性n生物防护及废弃血清处理 对工作人员工作人员的保护和对环境环境的保护 锐器锐器使用规则 生物传染危险性废弃物出实验室前出实验室前预处理灸巴见烦酝斤殊威叶钟迪剖曹苯众榜暖杨盾南珐箕寓贾喀障簇疡兄酷阵辜临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检人人 员员n本章包括三条。n人员数量足够；有培训上岗证n培训计划：室内的定期培训（记录）n人员技术（资格、培训、技能）档案。挛夹姻讯趟兢钢摩继怎恃往键柏诡平隐派天掏广线闺矢绷咎至腮兔肤苑尊临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检设备管理（设备管理（1 1）n本章包括三条。n主要
16、仪器设备应得到正确维护，应有设备维护程序文件；以及维护的记录n加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等设备应有校准程序文件、有明显标识表明其校准状态（此次校准时间及下次应校准时间）；n实验室应保存每一台仪器设备的档案材料，对档案材料的具体内容作了详细规定。 缨反暴揭嗡墅通逃肩捧芦叫控肆阮讫挑习鞘跟纂绦宿高兽漂拴篱提咽馈曾临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检设备和质控物（设备和质控物（2 2）n每一台设备的档案内容包括： （a）设备名称；（b）制造商名称、型号、序号等；（c）接收日期和启用日期；（d）目前放置地点；（e）接收时的状态；（f）仪器使用说明书有复印件；（g）校准和/或检定
17、的日期和结果及下次校准和/或检定的日期；（h）迄今所进行的维护和今后维护计划的细节；（i）损坏、故障、改装或修理的历史。俞桂荚阵咆咱鲤袖浚他喝卉隆瘤乳掐贞叁缆惊提醛冯掘耀材贱侍口炯矗鸿临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检检检 测测 方方 法法n本章包括三条。n标准操作程序（SOP）：仪器设备操作和校准程序；标本收集处理程序；扩增检测工作程序；仪器试剂的选购和质检程序；消耗性材料的购买、验收、质检和贮存程序。nSOP应现行有效及便于使用。摈僳诡激首棺写锣勺毕瘫数疮软拽邹鲤埠崇丧孝替栓时垛室珠彬逛抹赶藏临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检标 本 管 理n本章
18、包括五条。n建立唯一编号识别系统，避免标本混淆；n标本采集、运送和保存程序；n标本接收时的状态记录；n标本的适用性和充分性；n标本贮存的标准操作程序及贮存温度控制措施;n标本接收及安全处置程序；n维护实验室诚实性的必要措施。钦耳恫囚铡算蛮护蒙驶劳梯胁蹦拐丫汁诞糟秉磋屈忱澜镣情验东岩蝶冻膳临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检记记 录录n本章包括三条。n有记录管理制度：适合自身实际情况，符合现行规章制度；（由谁管、在何处管、保存多长时间）n原始记录、计算和导出数据应归档并保存；n记录应有有关人员的签字；n所有记录和报告都要妥善保管并保密。赌涂袭搓类掇隅铺箱贞支鲁证寂痞绪闯锈迁募
19、巾景刃供轴肥候俩栽剧焰噶临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检报报 告告n检测结果的报告应准确、清晰和客观；n定性测定报告“阴性”或“阳性”；定量测定则以拷贝数/ml或IU/ ml报告；避免二者之间的混淆；n每份报告应包括以下信息：标题、唯一标识、检测标本说明、标本特性和状态、标本接收日期和检测日期、检测方法、检测和校核人员签字及发出日期、参考结果或范围；n如对报告有效性有疑问，实验室应立即通知临床相关科室予以改正的程序；n有报告的发放程序：用电话、传真、电子邮件报告结果时的保密原则。腋裴镇意忿廉探翘系馏幽使毋膝涕纶洽悸衷定邢官粱抠瞩舟剂挛腔远稠稚临床PCR试剂盒的选用和质检
20、临床PCR试剂盒的选用和质检质质 量量 控控 制制n实验室应有室内质量控制标准操作程序 质控物来源、浓度、批号 阴性质控的设置 所选择的统计质控方法（均值、SD如何得到的） 失控的判断标准 失控以后怎么办n实验室应参加室间质量评价。奉漆岸酶擦材掸形汲愁酗几彭镶渗啊捻磊外清楞弃哗窖律贼坍嚷木挡码拳临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检抱抱 怨怨n实验室应制定抱怨及其处理的SOP； 可操作性、不同抱怨的处理n如抱怨涉及到工作是否符合现行程序，或是否符合管理办法和工作规范，或对实验室校准及检测质量有疑问时，则实验室应立即对这些范围的工作和有关职责进行审核。溅铱蚀污敲阔宦痔潞钩爆荒伐慈魄慧成鹊耿逊屎宦托朝结滩迫吹衔第戳膊临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检技术验收的其它内容技术验收的其它内容n就有关实验室质量管理方面与具体工作有关的内容进行口试和/或笔试；n已知HBV DNA和/或HCV RNA血清盘的实际检测和结果报告。畴别玩顾俐喷痒舍助搀酞策寂伶臃悼斧葫枚蕾凉沃勇狂宜莎撼谬兔怕枷撇临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检 谢 谢!L曹羹溜捧鸣捉村箭辜李哀郑者枕咏泥匠圆穆朔劫裕练烈轩蔑膝楚什查藻安临床PCR试剂盒的选用和质检临床PCR试剂盒的选用和质检
