抗体技术实用教案

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1、抗体抗体(kngt)分子分子第1页/共70页第一页，共71页。Antibody IgG structure第2页/共70页第二页，共71页。Antibody IgG structure第3页/共70页第三页，共71页。VHVLCLCH1CH2CH3Hinge(Fab)2FabFcMembraneExtensionAntibody IgG structure抗原(kngyun)结合片段恒定(hngdng)区片段第5页/共70页第五页，共71页。VHVLCLCH1CH2CH3Antibody IgG structure抗体(kngt)可变区片段第6页/共70页第六页，共71页。VHVLCLCH1C

2、H2CH3Fv第7页/共70页第七页，共71页。FvVHVLscFvVHVLSingle Chain Fragment variable第8页/共70页第八页，共71页。抗体抗体(kngt)生物体最奇生物体最奇妙的分子妙的分子无限的多样性（无限的多样性（diversity)功能功能(gngnng)与结构的双重性与结构的双重性 可变区可变区抗原结合抗原结合 恒定区恒定区生物学效应功能生物学效应功能(gngnng)分泌型和膜型表达分泌型和膜型表达第9页/共70页第九页，共71页。与抗体与抗体(kngt)有关的诺贝尔奖有关的诺贝尔奖获得者获得者1901von Bering血清治疗1908Ehrlic

3、h & Metchnikoff抗体生成、吞噬1972Edelman & Poter抗体分子结构1977Yalow放射免疫测定1984Koler,Milstein & Jerne单克隆抗体1987TonegawaIg基因结构第10页/共70页第十页，共71页。本节课主要本节课主要(zhyo)内容内容一、细胞工程抗体和基因工程抗体一、细胞工程抗体和基因工程抗体二、治疗性单抗研制二、治疗性单抗研制(ynzh)进展进展第11页/共70页第十一页，共71页。一、细胞工程抗体一、细胞工程抗体(kngt)和基因工和基因工程抗体程抗体(kngt)抗体研究领域的进展大致可分为三阶段抗体研究领域的进展大致可分为三

4、阶段(jidun)：以以1890年年Behring发现白喉毒素免疫血清（白发现白喉毒素免疫血清（白喉抗毒素）为代表，其特点是用抗原免疫动物喉抗毒素）为代表，其特点是用抗原免疫动物来获得多克隆抗体来获得多克隆抗体;以以1975年年Kohler创建杂交瘤技术制备单克隆创建杂交瘤技术制备单克隆抗体为代表抗体为代表;以以1994年年Winter用基因工程方法制备抗体为用基因工程方法制备抗体为代表代表;第12页/共70页第十二页，共71页。（一）多克隆(kln)抗体(Polyclonalantibody)1.概念给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物,它是由多种抗原决定簇刺激(cj)多

5、株B细胞增殖分化所产生的,称为多克隆抗体.第13页/共70页第十三页，共71页。2.多克隆抗体的应用免疫学检测被动免疫治疗和紧急预防3.存在问题特异性差,用于免疫学检测容易(rngy)出现交叉反应第14页/共70页第十四页，共71页。（二）单克隆抗体(kngt)(Monoclonalantibody,McAb)通过B细胞杂交瘤技术,获得(hud)特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体.第15页/共70页第十五页，共71页。单克隆抗体的特性高度(god)均一性：纯度很高的均一性抗体高度(god)专一性：只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应大量产生及稳定性：杂交瘤细胞能在体内外无限繁

6、殖之传代第16页/共70页第十六页，共71页。、细胞工程抗体、细胞工程抗体(kngt)杂交瘤杂交瘤-单克隆抗体单克隆抗体(kngt)第17页/共70页第十七页，共71页。第18页/共70页第十八页，共71页。第19页/共70页第十九页，共71页。第20页/共70页第二十页，共71页。杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要(zhyo)步骤包括（1）抗原制备；（2）免疫动物(dngw)；（3）免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；（4）细胞融合；（5）杂交瘤细胞的选择培养；（6）杂交瘤细胞的筛选；（7）杂交瘤细胞的克隆化；（8）单克隆抗体的检定；（9）分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；（10）单克隆抗体的大量制备

7、。第21页/共70页第二十一页，共71页。免疫(miny)动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用(xunyng)6-8周龄雌性Balb/c小鼠，抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞第22页/共70页第二十二页，共71页。细胞(xbo)融合与杂交瘤细胞(xbo)的选择性培养细胞融合的基本( jbn)方法：取适量脾细胞与骨髓瘤细胞混合，在PEG作用下融合，然后用培养液将PEG融合液缓慢稀释,将混合体系移入选择性培养基HAT中培养。第23页/共70页第二十三页，共71页。HAT选择性培养(pi

8、yng)的原理融合后产生(chnshng)脾脾、脾瘤、瘤瘤融合细胞和未融合的骨髓瘤细胞。次黄嘌呤（H）、氨基碟呤（A）和胸腺嘧啶（T）氨基碟呤（A）阻断嘌呤和嘧啶的合成第24页/共70页第二十四页，共71页。HAT选择性培养(piyng)的原理骨髓瘤细胞选用次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）缺陷型,不能利用外源性次黄嘌呤来合成(hchng)自身核酸中所需要的嘌呤，而内源性嘌呤和嘧啶的合成(hchng)又被氨基碟呤所阻断，不能在HAT培养基上生长。B淋巴细胞无法在体外繁殖传代。脾细胞内有这种转移酶，故脾瘤杂交细胞能用H和T合成(hchng)DNA而得以生长。第25页/共70页第二十五页，

9、共71页。在最适培养条件下，大约105个脾细胞才能形成一个杂交瘤细胞，单个或少数的杂交瘤细胞多半不易存活(cnhu)，通常加入饲养细胞（小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞）饲养细胞释放某些生长刺激因子，并能满足杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。小鼠腹腔巨噬细胞还能清除死亡细胞，应用较多。第26页/共70页第二十六页，共71页。筛选(shixun)阳性克隆与克隆化抗体产生细胞只占所有脾细胞的5%左右，所以融合后8-9天对每孔的培养上清液进行抗体活性的筛选工作，筛选出产生抗体的阳性克隆。常用方法(fngf)：酶联免疫吸附法，免疫荧光技术（适用于细胞抗原的抗体检测）和放射免疫技术。尽早克隆化。第27页/

10、共70页第二十七页，共71页。杂交瘤细胞与抗体性状(xngzhung)的鉴定对杂交瘤细胞进行染色体分析对杂交瘤细胞产生的单克隆抗体进行Ig类和亚类的鉴定对单克隆抗体特异性、纯度和识别(shbi)抗原的相对分子质量进行测定。第28页/共70页第二十八页，共71页。单克隆抗体(kngt)的大量制备体外培养法在培养液中添加10%-20%小牛血清，由于培养液中含有血清成分，总蛋白量可达100mg/ml,纯化困难。小牛血清又是支原体污染的原因。无血清培养法：利用白蛋白、转铁蛋白、乙醇胺等混合物代替小牛血清。但产量不高。用悬浮(xunf)培养方式代替静止培养法，微载体悬浮(xunf)培养第29页/共70页

11、第二十九页，共71页。多采用动物体内诱生法杂交瘤细胞的两种亲本细胞都来自BALB/c小鼠，故选用BALB/c小鼠制备单克隆抗体。先给小鼠注射刺激性的有机溶剂降植烷（破坏腹腔内膜，建立杂交瘤细胞易于增殖的环境），然后注射杂交瘤细胞，待生成腹水后再抽取，离心去细胞沉淀，取上清液冻存。操作简便，经济，所得单克隆抗体量多且效价高，可有效保存杂交瘤细胞株。缺点是小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白，给纯化(chnhu)带来难度。第30页/共70页第三十页，共71页。单克隆抗体(kngt)的纯化在纯化之前必须明确其Ig类和亚类，Ig类和亚类不同，纯化方法也不同；根据用途不同选择不同的纯化方法；如用于体外诊断

12、试剂的IgG类抗体应采用沉淀处理结合亲和层析亲和层析的方法。IgM类抗体应采用沉淀处理结合凝胶过滤的方法；体内诊断试剂或治疗(zhlio)用药物应去除内毒素、病毒、核酸等微量污染物，必须采用亲和层析和阴离子交换层析。第31页/共70页第三十一页，共71页。动物体内诱生法制备(zhbi)的单克隆抗体的纯化方法：1澄清和沉淀处理2分离凝胶过滤阴离子交换层析亲和层析第32页/共70页第三十二页，共71页。、单克隆抗体(kngt)在医学上的应用A、用作诊断试剂1.检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。2.鉴定病原体，准确诊断传染病。3.用于肿瘤的诊断和分型4.激素类单抗用于测

13、定体内激素含量，判断内分泌的功能(gngnng)状态第33页/共70页第三十三页，共71页。B、用作研究工具纯化抗原(kngyun)分析和探查抗原(kngyun)结构分析抗原(kngyun)决定簇分子的功能C、用于疾病的治疗抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗第34页/共70页第三十四页，共71页。单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题单克隆抗体的特异性由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格(yng)特异性的单抗，对正常组织有交叉反应2）异种抗体反应鼠源性单抗用于人体，导致异源性超敏反应第35页/共70页第三十五页，共71页。

14、（三）基因工程(jyngngchng)抗体(Geneticengineeringantibody)根据(gnj)研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体、小分子抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。第36页/共70页第三十六页，共71页。小分子小分子(fnz)抗体抗体鼠单抗人源化鼠单抗人源化基基因因工工程程改改造造(gizo)的的抗抗体体第37页/共70页第三十七页，共71页。小分子小分子(fnz)抗体抗体第38页/共70页第三十八页，共71页。小分子(fnz)抗体基因工程小分子抗体仅表达鼠源性M

15、cAb的V区（CDR）片段，其相对分子质量仅为原抗体的1/80-1/3。Fab片段抗体，由完整的轻链和重链(VH+CH1）组成Fv抗体（VH+VL，非共价结合( jih)）单链抗体:由VH和VL通过一段连接肽（Linker）连接而成的重组蛋白单域抗体：由VH或VL单个可变区第39页/共70页第三十九页，共71页。抗体抗体(kngt)融合蛋白融合蛋白 抗原结合部位与生物活性蛋白抗原结合部位与生物活性蛋白(dnbi)(dnbi)结合结合免疫导向免疫导向免疫桥连免疫桥连嵌合受体嵌合受体第40页/共70页第四十页，共71页。抗体融合(rngh)蛋白酶-抗体型偶合蛋白（抗体酶）在药物治疗中应用前景广阔，

16、它可在靶向位置上将前体药物转化成有效(yuxio)的药物。当抗体和酶的融合蛋白定位在肿瘤部位后再给予前体药物，药物经酶催化显示活性，提高肿瘤区域的药物浓度，降低对正常细胞的毒性。构建抗体融合蛋白的基本原则：将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，即可实现两个基因共表达。第41页/共70页第四十一页，共71页。在构建过程中关键的问题是两个(lin)蛋白间的Linker序列，一般3-5个氨基酸可满足大部分融合蛋白的正确折叠要求。如加入一段有疏水性和一定伸展性的肽链，可缓解两种蛋白的相互干扰。在真核细胞中表达一般不涉及复性问题，其优点是能够将抗体多肽正确折叠和糖基化，省去

17、了繁杂的体外复性，缺点是产量低。在原核细胞中表达有两种形式：一种分泌至菌体外，成为有活性的可溶性融合蛋白；另一种以胞内包涵体形式存在，需溶解包涵体重新折叠，成为有活性的蛋白质。第42页/共70页第四十二页，共71页。嵌合(qinh)抗体从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。特点：减少了鼠源性抗体的免疫原性，同时保留(boli)了亲本抗体特异性结合抗原的能力。保留(boli)鼠源性McAb的CDR区的结构，抗体活性不会消失（CDR区以外的其它部分不影响抗体活性），将C区用人的Ig分子的C区置换，则对人的免疫原性消失。第43

18、页/共70页第四十三页，共71页。嵌合(qinh)抗体嵌合抗体是构建的第一个基因工程( jyngngchng)抗体，构建时可对抗体亚类进行变换，增强抗体的免疫治疗效果。其半衰期约为鼠源的6倍，介导细胞毒性所需的抗体浓度也低于原McAb。20世纪末期构建了为数众多的抗各种恶性肿瘤的嵌合抗体，但真正应用于临床的较少，主要是因为该技术已被日益成熟的人源化抗体技术所取代。第44页/共70页第四十四页，共71页。人源化抗体(kngt)（humanizedantibody)运用基因工程的方法(fngf)将鼠McAb除重链、轻链的互补决定区（CDR）以外的基因全部置换成人抗体的基因。又称CDR移植抗体最大限

19、度地降低了鼠McAb的免疫原性,在人体内的生物半衰期基本上与人抗体类似。至今已有近百种人源化抗体申请临床试验，正在进行临床试验的有30多种，有些已完成期临床试验并获政府批准上市销售。第45页/共70页第四十五页，共71页。鼠单抗人源化鼠单抗人源化恒定区人源化恒定区人源化人人-鼠嵌合鼠嵌合(qin h)抗体抗体可变区人源化可变区人源化人改型抗体人改型抗体用抗体库技术进行人源化用抗体库技术进行人源化第46页/共70页第四十六页，共71页。鼠单抗人源化鼠单抗人源化第47页/共70页第四十七页，共71页。双价抗体(kngt)与双特异性抗体(kngt)(bispecificantibody)许多抗原抗体

20、反应要求双价的抗原结合位点，使抗原分子上的两个表位交联或使两个抗原分子连接。将识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫(miny)效应细胞表面分子的抗体连结在一起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。第48页/共70页第四十八页，共71页。构建(ujin)方法化学交联法用化学试剂随机交联两个Ig分子表面上的巯基，构建双功能抗体。化学交联可能(knng)破坏抗体的功能，不易到达靶向部位，体内稳定性差，每次应用都须重新构建第49页/共70页第四十九页，共71页。生物学方法将分泌(fnm)目的单克隆抗体的杂交瘤细胞与分泌(fnm)另一种抗体的脾细胞融合，形成可分泌(fnm)亲代

21、抗体和杂种抗体的杂种-杂交瘤细胞。构建过程复杂，周期长，产量低，纯化技术复杂，基因组过大不稳定。第50页/共70页第五十页，共71页。基因工程方法1993年Holligen等构建出小分子双功能抗体（SCFV）2，是双功能抗体研究领域(lny)的里程碑。用接头连接不同抗体的VH和VL区，使它们不能形成链内的分子配对，让其形成原抗体的分子内配对构建成双特异性（SCFV）2。双功能抗体一臂识别肿瘤细胞抗原（癌基因产物），另一臂识别免疫效应细胞及分子，介导T淋巴细胞或毒素与药物发挥细胞毒作用第51页/共70页第五十一页，共71页。单链抗体(kngt)单链抗体较好地保持了抗体亲和力，相对分子质量小、穿透

22、力强、免疫原性小，且易与效应效应分子相连接，构建出多种新功能的抗体分子，是构建免疫毒素和双特异抗体的理想元件(yunjin)。因此成为基因工程抗体研究领域的热点。单链抗体基因构建的一般方法：采用从杂交瘤细胞提取mRNA,反转录成cDNA，通过PCR扩增抗体VH和VL基因，人工合成一条寡核苷酸序列（Linker序列），将VL与VH连接构建单链抗体基因第52页/共70页第五十二页，共71页。修饰(xish)抗体（modifiedantibody)将放射性核素、生物毒素（白喉毒素、绿脓杆菌外毒素、蓖麻毒蛋白、蛇毒蛋白、相思子蛋白）或毒性极强的合成药物及抗生素等共价(nji)结合到抗体分子上.通过Mc

23、Ab可特异地将毒素导向肿瘤细胞等的靶部位，以达到毒杀肿瘤细胞而少损伤正常细胞的功效，形象地称之为生物导弹（药物导弹、免疫毒素）。第53页/共70页第五十三页，共71页。治疗治疗(zhlio)性单抗的研性单抗的研究进展究进展第54页/共70页第五十四页，共71页。1. 杂交瘤杂交瘤-单克隆抗体技术诞生单克隆抗体技术诞生2. 抗独特型治疗淋巴瘤成功抗独特型治疗淋巴瘤成功3. OKT3被批准被批准(p zhn)上市上市4. 单抗用于肿瘤治疗效果不佳单抗用于肿瘤治疗效果不佳5. 抗内毒素单抗试用于败血性休克失败抗内毒素单抗试用于败血性休克失败6. 抗抗17-1A和和ReoPro上市上市7. FDA批准

24、批准(p zhn)6个单抗上市个单抗上市治治疗疗性性抗抗体体(kngt)发发展展历历程程和和事事件件第55页/共70页第五十五页，共71页。OKT3OKT3是美国Ortho公司生产的OKT(OrthoKungTcellOKT)系列中的一种抗人T淋巴细胞分化抗原CD3的单克隆抗体，CD3抗原是成熟T细胞的共同分化抗原，在全部外周血T细胞和胸腺、淋巴结内接近成熟的T细胞上表达。OKT3作为一种免疫抑制剂，主要用于预防和治疗同种异体肾移植等器官移植后的急性排斥反应。OKT3主要通过细胞清除、不育性激活、功能性受体封阻、免疫调变、刺激抑制细胞增殖(zngzh)以及直接作用于效应细胞等途径杀伤成熟T细胞

25、或阻断机体细胞免疫反应达到抗排斥目的。第56页/共70页第五十六页，共71页。抗17-1A：主要作用于结肠癌、直肠癌病人原发的和转移的肿瘤；Reopro是一类抗体类药物，1994年首度获得批准，用于冠状动脉手术及心脏搭桥患者(hunzh)的治疗，以防止其血液拴塞。第57页/共70页第五十七页，共71页。抗体名称 抗体种类 靶向抗原 适应症 批准日期 OKT3 鼠单抗 CD3 移植排斥(pich) 1986Panorex 鼠单抗 17-1A 大肠癌 1995（德国）ReoPro 人-鼠嵌合Fab 血小板受体 冠心病 1994 ba Rituxan 人-鼠嵌合抗体 CD20 淋巴瘤 1997Sim

26、ulect 人-鼠嵌合抗体 CD25 移植排斥(pich) 1998Remicade 人-鼠嵌合抗体 TNF- 炎症性肠病、 1998、 类风湿关节炎 1999Zanapax 人源化抗体 CD25 移植排斥(pich) 1997Herceptin 人源化抗体 HER-2 乳腺癌 1998Synagis 人源化抗体 RSV F蛋白 RSV感染 1998Mylotarg 人源化抗体 - CD33 淋巴瘤 2000 化疗药物交连物Campath 人源化抗体 CD52 淋巴瘤 2001已批准已批准(p zhn)上市的治疗性单抗上市的治疗性单抗第58页/共70页第五十八页，共71页。治疗性单抗销售治疗性

27、单抗销售(xioshu)概况概况第59页/共70页第五十九页，共71页。国外有关抗体国外有关抗体(kngt)开发的开发的评述评述 正在正在(zhngzi)(zhngzi)临床试用的治疗性单临床试用的治疗性单抗超过上百种抗超过上百种 1998-2000 1998-2000年年20%20%研制研制(ynzh)(ynzh)的生物药品为单的生物药品为单抗抗 10 10年后市场上的单抗将从现在的年后市场上的单抗将从现在的 1111个个 100100个以上，预计销售额为个以上，预计销售额为$500$500亿亿 预计到预计到20082008年年7 7个主要市场用于肿瘤的个主要市场用于肿瘤的治疗性单抗的销售额

28、达治疗性单抗的销售额达4444亿美元亿美元第60页/共70页第六十页，共71页。进入临床治疗进入临床治疗(zhlio)性单性单抗情况分析抗情况分析治疗肿瘤治疗肿瘤(zhngli)： 32%治疗免疫系统相关疾病：治疗免疫系统相关疾病： 37%器官移植：器官移植： 11%感染：感染： 8%心血管：心血管： 4%其它：其它： 6%所治疗所治疗(zhlio)的疾病的疾病第61页/共70页第六十一页，共71页。所针对所针对(zhndu)的抗原的抗原/抗原数抗原数 /应用数应用数细胞膜分子细胞膜分子(fnz)： CD系列：系列： 35% 42% 膜受体及粘附分子膜受体及粘附分子(fnz)：17% 15%

29、肿瘤相关抗原：肿瘤相关抗原： 10% 5%细胞因子类：细胞因子类： 21% 26%独特型：独特型： 6% 5%病毒：病毒： 10% 7%第62页/共70页第六十二页，共71页。人源化和人源抗体人源化和人源抗体(kngt)制备技术制备技术的成熟是治疗性单抗进展的关键的成熟是治疗性单抗进展的关键在目前进入在目前进入(jnr)临床的单抗临床的单抗中：中： 60%为人源化鼠单抗为人源化鼠单抗 20%为人源单抗为人源单抗 20%为鼠单抗（其中为鼠单抗（其中70%用用于肿瘤）于肿瘤）第63页/共70页第六十三页，共71页。人源抗体人源抗体(kngt)研制的基本路线研制的基本路线 人血清来源(liyun)

30、人杂交瘤单克隆抗体 鼠单抗人源化 噬菌体抗体库 转基因小鼠第64页/共70页第六十四页，共71页。转基因小鼠制备转基因小鼠制备(zhbi)人源抗人源抗体体灭活小鼠胚系灭活小鼠胚系IgIg基因基因(jyn)(jyn) 基因基因(jyn)(jyn)敲除敲除JHJH、JKJK和和CKCK基因基因(jyn)(jyn)段段将人胚系将人胚系IgIg基因基因(jyn)(jyn)转移到小鼠染色转移到小鼠染色体体 人工染色体技术人工染色体技术 微胞介导的染色体转移微胞介导的染色体转移 微基因微基因(jyn)(jyn)位点胚胎细胞注射位点胚胎细胞注射第65页/共70页第六十五页，共71页。第66页/共70页第六十

31、六页，共71页。微胞介导的染色体转移微胞介导的染色体转移(zhuny)第67页/共70页第六十七页，共71页。治疗治疗(zhlio)性抗体的发展趋性抗体的发展趋势势人源抗体制备技术已经成熟，今后将人源抗体制备技术已经成熟，今后将进入进入(jnr)以人源抗体为主的时代以人源抗体为主的时代基因工程抗体逐渐从研究走向基因工程抗体逐渐从研究走向(zuxing)临床临床靶向抗原的研究和选择已逐渐成为研靶向抗原的研究和选择已逐渐成为研制治疗性单抗的关键制治疗性单抗的关键第68页/共70页第六十八页，共71页。泰欣生泰欣生（h-R3，Nimotuzumab）重组人源化抗人表皮生长因子受体单克隆抗体，是全球第

32、三个治疗实体瘤的单抗药物，是我国批准的第一个人源化抗体药物，属国家类新药。在国家重大科技专项“创新(chungxn)药物和中药现代化”的支持下，我国与古巴合资企业百泰生物药业有限公司开发的一类癌症治疗新药“重组人源化抗人表皮生长因子受体单克隆抗体”（商品名：泰欣生）,于4月11日获得国家食品药品监督管理局颁发的新药证书。第69页/共70页第六十九页，共71页。感谢您的欣赏(xnshng)第70页/共70页第七十页，共71页。内容(nirng)总结抗体分子。分泌型和膜型表达。筛选阳性克隆与克隆化。常用方法：酶联免疫吸附法，免疫荧光技术（适用于细胞抗原的抗体检测）和放射免疫技术。缺点是小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白，给纯化带来难度。根据用途不同选择不同的纯化方法。阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。单链抗体:由VH和VL通过一段连接肽（Linker）连接而成的重组蛋白。在原核细胞中表达有两种形式：一种分泌至菌体外，成为(chngwi)有活性的可溶性融合蛋白。感谢您的欣赏第七十一页，共71页。