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1、细胞周期调控生物工程学院王丹MPF的发现及其作用:MPF,即卵细胞促成熟因子(maturation-promoting factor),或细胞促分裂因子(mitosis-promoting factor),或M期促进因子(M phase-promoting factor).背景一: Rao和Johnson(1970、1972、1974)将Hela细胞同步于不同阶段，然后与M期细胞在灭活仙台病毒介导下诱导细胞融合，发现与M期细胞融合的间期细胞产生了形态各异的染色体凝集,称之为染色体超前凝集(prematurely condensed chromosome，PCC)。如图所示:GG1 1期期PCC
2、PCC为单线为单线状，状，S S期期PCCPCC为为粉末状，粉末状，GG2 2期期PCCPCC为为双双线线染色体，染色体，因因DNADNA未复制未复制; ;因因DNADNA由多个部位开始复制由多个部位开始复制; ;说说明明DNADNA复制已完成。复制已完成。人人MM期期细细胞与袋鼠（胞与袋鼠（PtkPtk）G1G1、S S、G2G2期期细细胞融合胞融合诱导诱导PCCPCC：这这就意味着就意味着MM期期细细胞具有某种促胞具有某种促进间进间期期细细胞胞进进行分裂的因子，行分裂的因子，称称为细为细胞促分裂因子。胞促分裂因子。不仅同类M期细胞可以诱导PCC，不同类的M期细胞也可以诱导PCC产生:背景二
3、：1971年,Masui和Markert用非洲爪蟾做实验，明确提出了MPF这一概念。非洲爪蟾卵细胞发育过程分为六个阶段、和期。前四个时期为卵母细胞生成和生长阶段 。其中 第期时细胞核较大，称为生发泡(germinal vesicle,GV),此时细胞就停留在该时期，等待成熟。因此，在成熟卵因此，在成熟卵细细胞的胞的细细胞胞质质中必然有一种物中必然有一种物质质，可以，可以诱导诱导卵母卵母细细胞成熟，称之胞成熟，称之为为促成熟因子，促成熟因子，MPFMPF。进进一步一步实验实验表明：在成熟卵母表明：在成熟卵母细细胞中，胞中，MPFMPF已已经经存在，存在，只是只是处处于非活性状于非活性状态态，称，
4、称为为前体前体MPF(preMPF)MPF(preMPF)。非活。非活性性态态的前体的前体MPFMPF通通过过翻翻译译后修后修饰饰，可以，可以转转化化为为活性活性态态的的MPFMPF。分离纯化出MPF：直到1988年，Maller实验室的Lohka等人才以非洲爪蟾为材料，分离得到了微克级的纯化的MPF。证明其含有p32和p45两种蛋白。二者结合后表现出蛋白激酶活性，可以使多种蛋白质底物磷酸化。证明，MPF是一种蛋白激酶。p34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系：另一批生物学家以酵母为材料,从另一个侧面对细胞周期调控进行着深入研究.如:L.Hartwell以芽殖酵母为实验材料, P.Nurse
5、以裂殖酵母为实验材料。他们的实验原理都相同：均是在不同温度下培养酵母,获得不同的温度敏感突变体, 这些不同的突变体在限定温度下，会滞留在细胞周期的某个阶段以及表现出不同的形态结构。这些与细胞分裂和周期调控有关的基因被称为 (cell division cycle) cdc基因，根据被发现的先后顺序被命名。P.Nurse在裂殖酵母中发现的cdc2基因就是第一个被分离出来的cdc基因。其表达产物是一种相对分子量为34103的蛋白，被称为p34cdc2,进一步研究发现， p34cdc2具有激酶活性，可使多种蛋白底物磷酸化，在裂殖酵母周期调控中起关键性调节作用。 L.Hartwell在芽殖酵母中发现的
6、cdc28基因是第二个被分离出的cdc基因，其表达产物也是一种相对分子量为34103的蛋白，被称为p34cdc28，它也是一种蛋白激酶，在G2/M转换过程中起中心调节作用。由此得出p34cdc2与p34cdc28是同源物。进一步研究发现：二者本身并不具有激酶活性，只有当其与有关蛋白结合后，其激酶活性才能够表现出来。例如： p34cdc2必须与另一种蛋白p56cdc13结合后才具有激酶活性。很快MallerNurse证明：MPF中的p32可以被p34cdc2特异抗体所识别，并且p34cdc2多肽片断可以加速MPF活性，表明二者是同源物。HartwellHartwell还还通通过过研究酵母菌研究酵
7、母菌细细胞胞对对放射放射线线的感受性，提出了的感受性，提出了checkpointcheckpoint（细细胞周期胞周期检验检验点）的概念，意指当点）的概念，意指当DNADNA受到受到损伤时损伤时，细细胞周期会停下来。胞周期会停下来。芽殖酵母及其细胞周期裂殖酵母及其细胞周期在研究酵母的同时，以Tim Hunt为代表的另一批科学家正在以海胆卵为材料，对细胞周期调控进行着深入研究。他们发现：有两种蛋白质的含量随细胞周期进程的变化而变化，一般在细胞间期内积累，在细胞分裂期内消失，在下一个周期中又重复这一消长现象。因此称这两种蛋白为细胞周期蛋白(cyclin)。并很快被分离和克隆出来，证明其广泛存在于从
8、酵母到人类等各种真核生物中，而且在功能上存在互补性。MallerHunt合作证明：MPF中的另一种成分是周期蛋白B。序列分析证明，周期蛋白B与酵母的p56cdc13是同源物。由此MPF的生化成分得到确定： MPF = p34cdc2 + cyclinB （催化亚单位）（调节亚单位）2001年10月8日美国人LelandHartwell、英国人Paul Nurse、TimothyHunt因对细胞周期调控机理的研究而荣获诺贝尔生理医学奖周期蛋白：自1983年首次发现周期蛋白后，许多科学家纷纷开展周期蛋白研究，短短10年就从各种生物中克隆分离了数十种周期蛋白，如酵母的Cln1、Cln2、Cln3、C
9、lb1-Clb6，高等动物的周期蛋白A1-2、B1-3、C、D1-3、E1-2、F、G、H等等。各种周期蛋白均含有100个左右的保守氨基酸序列，称为周期蛋白框，它可介导周期蛋白与CDK结合。 M期周期蛋白(A2,B1)分子的N端含有破坏框。G1期周期蛋白分子的C端含有一个PEST序列。部分周期蛋白分子部分周期蛋白分子结构特征构特征 图中除Cln3外，均为人的周期蛋白分子，所有这些分子均含有一个周期蛋白框。细胞周期蛋白的细胞周期蛋白的破坏框破坏框与降解途径与降解途径G1周期蛋白也通过类似的途径降解，但其N端没有破坏框，C端有一段PEST序列与其降解有关。部部分分哺哺乳乳动动物物和和酵酵母母细细胞胞周周期期蛋蛋白白在在细细胞胞周周期期中中的的积积累累及及其其与与CDK激激酶酶活活性性的的关关系系。不同周期蛋白的表达时期不同，与不同的CDK结合，调节不同CDK激酶的活性。谢 谢！
