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1、1.2 基因工程的基本操作程序原理技术应用 重组人胰岛素（HumulinHumulin优泌林） 1982年10月全球第一个商业化基因重组人类胰岛素在美国上市基因工程的基本操作程序最新课件思考1： 如何利用大肠杆菌来生产重组人胰岛素？基因组文库的构建基因的分离与克隆 思考2：如何从人类基因组中分离胰岛素基因？基因工程的基本操作程序最新课件思考3：从基因组文库中获取人的胰岛素基因，导入大肠杆菌能否成功表达？为什么？基因工程的基本操作程序最新课件cDNA文库的构建思考4：能否根据mRNA合成没有内含子的胰岛素基因？基因工程的基本操作程序最新课件 聚合酶链式反应（PCR）思考5：如何快速扩增胰岛素基因
2、（cDNAcDNA）？基因工程的基本操作程序最新课件uu聚合酶链式反应（PCR）l变性、退火、延伸三变性、退火、延伸三步曲步曲变性：变性：双链双链DNADNA解链解链成为单链成为单链DNADNA退火：退火：部分引物与模部分引物与模板的单链板的单链DNADNA的特定的特定互补部位相配对和互补部位相配对和结合结合延伸：延伸：以目的基因为以目的基因为模板，合成互补的模板，合成互补的新新DNADNA链链基因工程的基本操作程序最新课件思考6：能否根据氨基酸的序列获得人胰岛素基因的碱基序列？基因工程的基本操作程序最新课件氨基酸序列氨基酸序列mRNAmRNA序列序列DNADNA序列序列人工合成人工合成 DN
3、A合成仪基因工程的基本操作程序最新课件思考7：选用哪种限制酶对质粒和胰岛素基因进行酶切，可将目的基因插入到Tetr基因内？思考8：重组质粒导入大肠杆菌后能表达吗？若不能， 还应做怎样修饰？ 基因工程的基本操作程序最新课件用BamH对胰岛素基因和质粒切割，加入DNA连接酶，得到的都是重组质粒吗？基因工程的基本操作程序最新课件目的基因目的基因载体载体BamHBamHBamHBamH DNADNA连接酶连接酶重组体重组体载体自连载体自连目的基因目的基因 自连自连基因工程的基本操作程序最新课件思考9：如何根据标记基因筛选到含重组质粒的大肠杆菌？基因工程的基本操作程序最新课件uu应将体外重组反应混合物转
4、化给 AmpAmps sTetTets s/Amp/Ampr rTetTetr r大肠杆菌菌株？ uu将Amp琼脂平板上的菌落原位影印在Tet平板上生长，对比这两个平板上的菌落生长情况，如何挑出含有重组质粒的菌落？基因工程的基本操作程序最新课件定向克隆策略双酶切连接思考10：如何 避免质粒和目的基因的自身环化？基因工程的基本操作程序最新课件大肠杆菌合成的胰岛素具有生物活性吗？如何鉴定胰岛素基因在大肠杆菌中是否得到了成功表达？基因工程的基本操作程序最新课件酵母菌酵母菌若通过基因工程生产干扰素（一种糖蛋白），应选择 (大肠杆菌/酵母菌)作为受体细胞？说明理由。基因工程的基本操作程序最新课件若要培育
5、转基因抗虫棉，目的基因和受体细胞分别是什么？如何将目的基因导入受体细胞？基因工程的基本操作程序最新课件如何鉴定棉花的染色体DNA上是否插入了抗虫基因？基因工程的基本操作程序最新课件目的基因成功表达的标志是什么？如何用基因探针检测目的基因是否转录出了mRNA？基因工程的基本操作程序最新课件如何检测Bt基因是否成功地翻译成Bt毒蛋白？uu将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；uu将表达出的蛋白质注射给动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体；uu从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；uu将抗体与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交基因工程的基本操作程序最新课件蛋白质检测蛋白
6、质检测蛋白质检测：利用抗原-抗体杂交：被检测物是蛋白质，“探针”是抗体基因工程的基本操作程序最新课件基因工程的基本操作程序最新课件目的基因的检测与鉴定存在与否分子水平检测个体水平鉴定分子杂交技术抗原-抗体杂交：检测性状及产品活性等表达与否mRNA蛋白质：DNA基因工程的基本操作程序最新课件uu若要培育转基因羊，从羊奶中提取出治疗心脏病的药物tPA。人tPA基因为什么要和羊泌乳基因重组在一起？为什么选择受精卵作为受体细胞？怎样将重组tPA基因导入受精卵中？基因工程的基本操作程序最新课件（0707天津卷）天津卷）下图为获得转基因抗虫棉的技术下图为获得转基因抗虫棉的技术流程。请据图回答：流程。请据图
7、回答：（1 1）A A过程需要的酶有过程需要的酶有_。（2 2）B B过程及其结果体现了质粒作为运载体必过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是须具备的两个条件是_。基因工程的基本操作程序最新课件（3 3）C C过程的培养基除含有必要营养物质、琼过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入脂和激素外，还必须加入_。（4 4）如果利用）如果利用DNADNA分子杂交原理对再生植株分子杂交原理对再生植株进行检测，进行检测，D D过程应该用过程应该用_作作为探针。为探针。基因工程的基本操作程序最新课件(12(12年海淀区期中年海淀区期中) ) 大肠杆菌大肠杆菌pUC18pUC1
8、8质粒的质粒的LacZLacZ基基因中如果没有插入外源基因，因中如果没有插入外源基因，lacZlacZ基因便可表达基因便可表达出出-半乳糖苷酶，当培养基中含有半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTGIPTG和和X-galX-gal时，时，X-galX-gal便会被便会被-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入加入_物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成在培养基中形成_颜色的菌落，原因颜色的菌落，原因 。基因工程的基本操作程序最新课件基因工程的基本操作程序最新课件
