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1、 琼琼脂糖凝胶脂糖凝胶电电泳操作泳操作简单简单，电电泳速度快，泳速度快，样样品不需求事先品不需求事先处处置；置；电电泳后区泳后区带带易染色，易染色，样样品极易洗脱，便品极易洗脱，便于定量于定量测测定。定。测测定蛋白定蛋白质质的相的相对对分子分子质质量常用量常用SDS-SDS-聚丙聚丙烯酰烯酰胺凝胶胺凝胶电电泳，泳，这这是由于是由于该该方法分方法分别别蛋白蛋白质质完全取决于分子的大小，而非所完全取决于分子的大小，而非所带电带电荷的性荷的性质质和分子的大小、外形。和分子的大小、外形。【典例【典例1 1】有关凝胶色】有关凝胶色谱谱法和法和电电泳法的泳法的说说法正确的法正确的选项选项是是A.A.它它们
2、们都是分都是分别别蛋白蛋白质质的重要方法的重要方法B.B.它它们们的原理一的原理一样样C.C.运用凝胶色运用凝胶色谱谱法需求运用法需求运用缓缓冲溶液而冲溶液而电电泳不需求泳不需求D.D.以上以上说说法都正确法都正确 【解【解题题关关键键】解答此】解答此题题的关的关键应键应明确以下两点：明确以下两点：(1)(1)凝胶色凝胶色谱谱法的原理；法的原理；(2)(2)电电泳法的原理。泳法的原理。【规范解答】选【规范解答】选A A。凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分。凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分别蛋白质的一种有效方法；电泳法是利用待测样品中各种分别蛋白质的一种有效方法；电泳法是利用待测样品中各种
3、分子带电性质的差别和分子本身的大小、外形不同，使带电分子带电性质的差别和分子本身的大小、外形不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分别或子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分别或鉴定。所以鉴定。所以A A正确，正确，B B错；这两种方法都用到缓冲溶液，以调错；这两种方法都用到缓冲溶液，以调理溶液的酸碱度，所以理溶液的酸碱度，所以C C错误。综上所述，答案选错误。综上所述，答案选A A。2.2.凝胶色凝胶色谱谱操作操作(1)(1)凝胶色凝胶色谱谱柱的装填：用蒸柱的装填：用蒸馏馏水溶水溶胀胀凝胶凝胶均匀装填色均匀装填色谱谱柱柱在在约约50 cm50 cm高的操作高的
4、操作压压下，用下，用300 mL300 mL的物的物质质的量的量浓浓度度为为20 mmol/L20 mmol/L的磷酸的磷酸缓缓冲液充分洗冲液充分洗涤涤平衡凝胶平衡凝胶12 h12 h，使凝胶装填，使凝胶装填严严密。密。(2)(2)翻开流出口，使翻开流出口，使缓缓冲液与凝胶面平冲液与凝胶面平齐齐，封，封锁锁出口出口(3)(3)样样品的参与和洗脱品的参与和洗脱用吸管将用吸管将1 mL1 mL透析后的透析后的样样品加到色品加到色谱谱柱柱顶顶端，翻开下端出端，翻开下端出口，使口，使样样品渗入凝胶床内后，封品渗入凝胶床内后，封锁锁下端出口。下端出口。小心参与物小心参与物质质的量的量浓浓度度为为20 m
5、mol/L20 mmol/L的磷酸的磷酸缓缓冲液冲液(pH=7.0)(pH=7.0)到适当高度后，到适当高度后，衔衔接接缓缓冲液洗脱瓶，翻开下端出口，冲液洗脱瓶，翻开下端出口，进进展洗展洗脱。脱。待待红红色的蛋白色的蛋白质质接近色接近色谱谱柱底端柱底端时时，用，用试试管搜集流出液，管搜集流出液，每每5 mL5 mL搜集一管，延搜集一管，延续续搜集。搜集。 红细红细胞的洗胞的洗涤涤：洗：洗涤涤次数不能次数不能过过少；低速、少；低速、短短时时离心。离心。凝胶的凝胶的预处预处置：沸水浴法置：沸水浴法时间时间短，短，还还能除去微生物和气泡。能除去微生物和气泡。色色谱谱柱的装填：装填尽量柱的装填：装填尽
6、量严严密，降低密，降低颗颗粒粒间间隙；无气泡；隙；无气泡；洗脱液不能断流。洗脱液不能断流。色色谱谱柱柱胜胜利利标标志：志：红红色区色区带带均匀一致地挪均匀一致地挪动动。【典例【典例2 2】(2021(2021扬扬州高二州高二检测检测) )如如图图表示血表示血红红蛋白提取和分蛋白提取和分别别的部分的部分实验实验安装，安装，请请回答以下回答以下问题问题：(1)(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用表达了蛋白质具有在红细胞中的作用表达了蛋白质具有_功能。功能。(2)(2)甲安装中，甲安装中，B B是血红蛋白溶液，那么
7、是血红蛋白溶液，那么A A是是_；乙；乙安装中，安装中，C C溶液的作用是溶液的作用是_。(3)(3)甲安装用于甲安装用于_ _ ，目的是，目的是_。用乙安。用乙安装分别蛋白质的方法叫装分别蛋白质的方法叫_，是根据，是根据_分别蛋白质的有效方法。分别蛋白质的有效方法。(4)(4)用乙安装分别血红蛋白时，待用乙安装分别血红蛋白时，待_时，用时，用试管搜集流出液，每试管搜集流出液，每5 mL5 mL搜集一管，延续搜集。搜集一管，延续搜集。 【解【解题题关关键键】(1)(1)了解凝胶色了解凝胶色谱谱法的原理；法的原理；(2)(2)分析磷分析磷酸酸缓缓冲液的作用；冲液的作用；(3)(3)掌握蛋白掌握蛋
8、白质质的分的分别别与提取方法。与提取方法。【规规范解答】范解答】(1)(1)血血红红蛋白能携蛋白能携带带氧气，表达了蛋白氧气，表达了蛋白质质具有运具有运输输功能。功能。(2)(2)甲安装中，甲安装中，B B是血是血红红蛋白溶液，那么蛋白溶液，那么A A是磷酸是磷酸缓缓冲冲液；乙安装中，液；乙安装中，C C溶液的作用是洗脱血溶液的作用是洗脱血红红蛋白。蛋白。(3)(3)甲安装用甲安装用于透析于透析( (粗分粗分别别) )，目的是去除，目的是去除样样品中相品中相对对分子分子质质量量较较小的小的杂杂质质。用乙安装分。用乙安装分别别蛋白蛋白质质的方法叫凝胶色的方法叫凝胶色谱谱法，是根据相法，是根据相对
9、对分子分子质质量的大小分量的大小分别别蛋白蛋白质质的有效方法。的有效方法。(4)(4)待待红红色的蛋白色的蛋白质质接近色接近色谱谱柱底端柱底端时时，用，用试试管搜集流出液，每管搜集流出液，每5 mL5 mL搜集一管，搜集一管，延延续续搜集。搜集。答案：答案：(1)(1)运输运输(2)(2)磷酸缓冲液磷酸缓冲液 洗脱血红蛋白洗脱血红蛋白(3)(3)透析透析( (粗分别粗分别) ) 去除样品中相对分子质量较小的杂质去除样品中相对分子质量较小的杂质 凝胶色谱法凝胶色谱法 相对分子质量的大小相对分子质量的大小(4)(4)红色的蛋白质接近色谱柱底端红色的蛋白质接近色谱柱底端【误区警示】在血红蛋白的提取和分别中，缓冲液能维持溶【误区警示】在血红蛋白的提取和分别中，缓冲液能维持溶液酸碱度稳定；透析过程中，可以除去小分子的杂质；在蛋液酸碱度稳定；透析过程中，可以除去小分子的杂质；在蛋白质纯化过程中，可以将血红蛋白分别出来。白质纯化过程中，可以将血红蛋白分别出来。
