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1、第三章第三章 抗体的人工制备抗体的人工制备 人工抗体有四类：人工抗体有四类： 多克隆抗体多克隆抗体 单克隆抗体单克隆抗体 基因工程抗体基因工程抗体 催化抗体催化抗体1 1优质教学优质教学第一节 多克隆抗体一、概念： 采用传统免疫方法，将抗原物质经不同途径注入动物体内，数次免疫后采血，分离血清，由此获得抗血清即为多克隆抗体。简称多抗。2 2优质教学优质教学二、多克隆抗体用途1.用于抗原物质的鉴别、定位、分析和提纯。2.作为疾病的诊断、检疫试剂。3.作为人和动物的某些疾病的治疗制剂。3 3优质教学优质教学三、多克隆抗体制备过程4 4优质教学优质教学第二节 单克隆抗体一、概念： 是指由一个B细胞分化
2、增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗体，简称单抗。 特点：高特异性、高均一性高特异性、高均一性高特异性、高均一性高特异性、高均一性5 5优质教学优质教学二、单抗与多抗的比较 特性特性 多抗多抗 单抗单抗 对免疫原的要求对免疫原的要求 免疫原纯度高，免疫原纯度高， 不纯的抗原即可不纯的抗原即可 抗体纯度才高抗体纯度才高 产生高纯度抗体产生高纯度抗体 抗体产生细胞抗体产生细胞 多克隆性多克隆性 单克隆性单克隆性 同质性同质性 高度异质高度异质 高度同质高度同质 特异性特异性 较高，与抗原上较高，与抗原上 高，与特定高，与特定 多种决定簇结合多种决定簇结合 决定簇决定簇 结合结合 稳
3、定性稳定性 较好较好 较差较差 标准化标准化 较难较难 简单简单 交叉反应交叉反应 很常见很常见 不常见不常见 沉淀反应沉淀反应 有有 大多数没有大多数没有6 6优质教学优质教学二、单抗与多抗的比较 特性特性 多抗多抗 单抗单抗 适用的血清学实验适用的血清学实验 适用大多数适用大多数 需适当选择需适当选择 抗体纯度才高抗体纯度才高 产生高纯度抗体产生高纯度抗体 供应量供应量 有限有限 无限无限 有效抗体含量有效抗体含量 0.11.0 0.11.0 悬浮培养：悬浮培养：0.010.050.010.05 （mg/mLmg/mL） 中空纤维：中空纤维：1.05.01.05.0 小鼠腹水：小鼠腹水：
4、1.05.01.05.0 无关无关IgIg含量含量 1015 1015 体外培养液：无体外培养液：无 （mg/mLmg/mL） 小鼠腹水：小鼠腹水： 0.51.00.51.0 其他血清蛋白其他血清蛋白 有有 体外培养：少量体外培养：少量 牛血清白蛋白牛血清白蛋白 小鼠腹水：少量杂蛋白小鼠腹水：少量杂蛋白7 7优质教学优质教学三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生产基本过程8 8优质教学优质教学四、单克隆抗体的优势 高度均一性：高度均一性： 纯度很高的均一性抗体纯度很高的均一性抗体 高度专一性：高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。 大量产生及稳定性：
5、大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代。杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代。 9 9优质教学优质教学五、单克隆抗体的应用（一）在血清学技术方面。（二）在免疫学基础研究方面。（三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。（四）在抗原纯化方面。（五）用于制备抗独特型抗体疫苗。1010优质教学优质教学第三节 基因工程抗体一、概念： 利用基因工程技术制备的抗体分子，称为基因工程抗体。这是分子水平的抗体。优势：优势：去除或减少去除或减少无关结构，保留或无关结构，保留或增加天然抗体特异增加天然抗体特异性和生物学活性。性和生物学活性。 1111优质教学优质教学 基本制备过程：基本制备过程：1212优质教
6、学优质教学是指在同一抗体分子中含有不同种属来源抗体分子片段的抗体。 嵌合抗体多为“鼠-人”类型。一、嵌合抗体： 1313优质教学优质教学 将鼠抗体超变区基因嵌入人抗体将鼠抗体超变区基因嵌入人抗体Fab骨架区编码骨架区编码基因中，再将此基因中，再将此DNA片段与人片段与人Ig恒定区基因相连，恒定区基因相连，转染杂交瘤细胞，并表达嵌合的转染杂交瘤细胞，并表达嵌合的V区抗体。区抗体。 二、重构抗体： 三、单链抗体： 是将是将 Ig Ig 的的 H H 链和链和 L L 链的链的 V V 区基因相连，区基因相连，转染大肠杆菌表达的抗体分子，又称单链转染大肠杆菌表达的抗体分子，又称单链 FVFV分分子。
7、子。 1414优质教学优质教学 如如:Ig相关分子相关分子：将抗体分子部分片段连接到与抗体：将抗体分子部分片段连接到与抗体无关的序列上得到。无关的序列上得到。 噬菌体抗体噬菌体抗体：将已知特异性的抗体分子的所有：将已知特异性的抗体分子的所有V区基因在噬菌体中构建基因库，用噬菌体感染细菌，区基因在噬菌体中构建基因库，用噬菌体感染细菌，模拟免疫选择过程，使具有相应特异性的重链和轻模拟免疫选择过程，使具有相应特异性的重链和轻链可变区在噬菌体表面呈现出来。链可变区在噬菌体表面呈现出来。四、其他基因工程抗体： 五、全套抗体基因库 1515优质教学优质教学第四节 催化抗体一、概念： 是具有催化活性的免疫球蛋白，也叫抗体酶。具有抗体的高度选择性和酶的高效催化性。优点：优点： 具有具有抗体的高抗体的高度选择性度选择性和和酶的高酶的高效催化性效催化性。 1616优质教学优质教学 如：细胞融合法、基因工程抗体技术、引入辅如：细胞融合法、基因工程抗体技术、引入辅助因子法等。助因子法等。 二、催化抗体的制备： 三、催化抗体的应用： 如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上也有如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上也有重要应用价值。重要应用价值。1717优质教学优质教学
