食品微生物检验的质量控制分析

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1、食品微生物检验食品微生物检验的质量控制的质量控制广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心内容内容食品微生物检验质量控制概述食品微生物检验质量控制概述食品微生物检验的室内质量控制食品微生物检验的室内质量控制食品微生物检验的室间质量控制食品微生物检验的室间质量控制食品微生物检验质量食品微生物检验质量控制概述控制概述一、质量控制相关定义一、质量控制相关定义l质量控制：满足质量要求的操作技术和活动。质量控制：满足质量要求的操作技术和活动。l质量保证：为了满足实验室质量要求质量保证：为了满足实验室质量要求 ，制定，制定相应的计划并实施所进行的一系列系统活动相应的计划并实施

2、所进行的一系列系统活动l质量手册：是描述质量系统元素的文件或文件质量手册：是描述质量系统元素的文件或文件的集合。的集合。 二、食品微生物检验质量控制概念二、食品微生物检验质量控制概念l质量控制质量控制是食品微生物学实验室为了保是食品微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。建立的操作程序体系。三、食品微生物检验质量控制目的三、食品微生物检验质量控制目的l食品微生物学的质量控制食品微生物学的质量控制是保证食源性致病菌是保证食源性致病菌的培养、分离、鉴定及血清学试验等的准确性，的培养、分离、鉴定及血清学试验等的准确性，避免因操作变化

3、导致检验结果错误。避免因操作变化导致检验结果错误。四、质量控制分类四、质量控制分类 分为分为室内质量控制室内质量控制和和室间质量评价室间质量评价两个组成部分两个组成部分l室内质量控制：实验室内部采取的以对比分析、室内质量控制：实验室内部采取的以对比分析、跟踪以及对实验室工作的连续性控制计划。跟踪以及对实验室工作的连续性控制计划。l室间质量评价：通过互相校准和室间质量评价：通过互相校准和/ /或检验对实或检验对实验室的操作和结果所进行的评价。验室的操作和结果所进行的评价。五、质量控制五、质量控制内容内容l室内质量控制室内质量控制 实验室内部实验室内部 质量保证的核心和基础质量保证的核心和基础l室

4、间质量评价室间质量评价 外部组织或机构外部组织或机构 质量评价质量评价食品微生物学检验食品微生物学检验室内质量控制室内质量控制室内质量控制室内质量控制一、对检验人员的要求一、对检验人员的要求二、操作手册二、操作手册三、检测环境要求三、检测环境要求四、设备四、设备/ /仪器要求仪器要求五、仪器设备的功能监测五、仪器设备的功能监测六、培养基的质量控制六、培养基的质量控制七、试剂、染色液及抗血清的质控七、试剂、染色液及抗血清的质控八、检验过程的质量控制八、检验过程的质量控制九、标准菌株的来源和保存九、标准菌株的来源和保存十、实验室安全防护十、实验室安全防护一、对检验人员的要求一、对检验人员的要求l相

5、应岗位的人员，应具备相应的技术能力，相相应岗位的人员，应具备相应的技术能力，相应的技术能力证明（证书及证件）。应的技术能力证明（证书及证件）。l微生物检验室应有相应技术能力的人负责室内微生物检验室应有相应技术能力的人负责室内的技术工作，并设立质量监督员。的技术工作，并设立质量监督员。一、对检验人员的要求一、对检验人员的要求高度的主观判断力高度的主观判断力 个人的技能、经验个人的技能、经验 细菌学的专业水平细菌学的专业水平培训班培训班实验室进修实验室进修学术交流学术交流专业期刊专业期刊二、操作手册二、操作手册l各级人员的职责和权限各级人员的职责和权限l实验室安全措施实验室安全措施l样品采集和处理

6、指南样品采集和处理指南l培养基和试剂的配制方法培养基和试剂的配制方法l.等等等等三、检测环境要求三、检测环境要求- -房屋要求房屋要求l房屋要求：足够宽敞、通风、有良好的照明。房屋要求：足够宽敞、通风、有良好的照明。l房屋内墙面及地等应采用易于清洁的材料。房屋内墙面及地等应采用易于清洁的材料。l房间的设置应根据工作内容加以分用，设立专房间的设置应根据工作内容加以分用，设立专用房间。用房间。三、检测环境要求三、检测环境要求- -环境设施要求环境设施要求l专用房间的温湿度控制与记录（样品存放室）专用房间的温湿度控制与记录（样品存放室）l特殊环境的微生物指标控制与记录（无菌室等）特殊环境的微生物指标

7、控制与记录（无菌室等）l专用工作室的标准操作规程和定期的检测校准专用工作室的标准操作规程和定期的检测校准程序。（洁净室等）程序。（洁净室等）l特殊环境中的专用设施质量控制应符合有关要特殊环境中的专用设施质量控制应符合有关要求（净化工作台）求（净化工作台）三、检测环境要求三、检测环境要求l食品微生物学检验室要求布局合理，操作区食品微生物学检验室要求布局合理，操作区域与办公区域分开。洗涤室、培养室、消毒域与办公区域分开。洗涤室、培养室、消毒间、无菌室应分开。无菌室要设有套间或缓间、无菌室应分开。无菌室要设有套间或缓冲间。微生物检验室应备有自动或脚踩式洗冲间。微生物检验室应备有自动或脚踩式洗手池和固

8、定的消毒设施。手池和固定的消毒设施。三、检测环境要求三、检测环境要求l微微生生物物检检验验室室应应制制定定合合理理、完完善善的的卫卫生生管管理理制制度度，采采用用湿湿式式保保洁洁，定定期期对对操操作作环环境境进进行行消消毒毒。对对废废弃弃物物，应应投投入入指指定定的的容容器器内内，经经无无害害化化处处理理后后方方可可排排放放，以防某些病原微生物传播。以防某些病原微生物传播。三、检测环境要求三、检测环境要求l需需在在无无菌菌条条件件下下工工作作的的区区域域应应以以明明确确标标识识并并能能有有效效地地控控制制、监监测测和和记记录录。每每天天记记录录环环境境检检测测报报告告，并并经经常常进进行行空空

9、气气落落菌菌实实验验：定定期期对对无无菌菌室进行室内环境消毒。室进行室内环境消毒。三、检测环境要求三、检测环境要求- -环境设施的相关技环境设施的相关技术指标术指标l净化室、净化工作区域、洁净环境按国家及部净化室、净化工作区域、洁净环境按国家及部颁标准进行检测。颁标准进行检测。l空气洁净度指标：空气洁净度指标：l检测频率及检测方法。一次检测频率及检测方法。一次/ /月；空气细菌检月；空气细菌检测（沉降法）。测（沉降法）。级别级别0.5m尘粒尘粒(个个/L)5m尘粒尘粒(个个/L)活菌颗粒平均数活菌颗粒平均数(cfu/平板平板)1003.50.01.010000350.02.53.0四、设备四、

10、设备/ /仪器要求仪器要求- -总则总则l满足开展相关检测项目的要求。满足开展相关检测项目的要求。l制定相关设备制定相关设备/ /仪器的作业指导书。仪器的作业指导书。l设备设备/ /仪器需进行检定校准。仪器需进行检定校准。l设备设备/ /仪器的运行状况记录。仪器的运行状况记录。l维修后设备维修后设备/ /仪器的再校准或检查，应具有完仪器的再校准或检查，应具有完整的检查记录。整的检查记录。温度计温度计l实验室必须要有工作温度计和参照温度计。实验室必须要有工作温度计和参照温度计。l工作温度计：用于日常温度检查。工作温度计：用于日常温度检查。l参照温度计：用于校正工作的温度计。参照温度计：用于校正工

11、作的温度计。l温度计运行检查：一般可采用一次温度计运行检查：一般可采用一次/ /半年的运半年的运行检查。行检查。l日常检查、校准检查、运行检查等都应做好相日常检查、校准检查、运行检查等都应做好相应的记录。应的记录。培养箱、水浴箱和冰箱的温度控制培养箱、水浴箱和冰箱的温度控制l培养箱的温差要求，一般显示值与实测值相差培养箱的温差要求，一般显示值与实测值相差不大于不大于11，箱体内各点温差（内部的温度，箱体内各点温差（内部的温度均衡性）以及温度波动同样不大于均衡性）以及温度波动同样不大于11。l温度监控方法：可将工作温度计置甘油中，放温度监控方法：可将工作温度计置甘油中，放入待测箱体内，观察工作温

12、度计的温度，最好入待测箱体内，观察工作温度计的温度，最好1-21-2次次/ /天监控并记录。天监控并记录。高压灭菌锅的温度控制（一）高压灭菌锅的温度控制（一）l高压灭菌锅；可用生物指示菌法（常用）、化高压灭菌锅；可用生物指示菌法（常用）、化学变色纸片及高压灭菌锅温度计等方法进行检学变色纸片及高压灭菌锅温度计等方法进行检测。测。l生物指示菌法是一种高压灭菌锅的效果显示法。生物指示菌法是一种高压灭菌锅的效果显示法。l高压灭菌锅由专人操作，并做好作业记录。高压灭菌锅由专人操作，并做好作业记录。l高压灭菌锅使用时，内置物品不能太多，单位高压灭菌锅使用时，内置物品不能太多，单位体积内的内容物（每瓶内的培

13、养基）不能太多。体积内的内容物（每瓶内的培养基）不能太多。高压灭菌锅的温度控制（二）高压灭菌锅的温度控制（二）l高压灭菌锅温度波动范围：高压灭菌锅温度波动范围：110110，115115和和12121212。l高压灭菌锅校准周期一般在半年。高压灭菌锅校准周期一般在半年。干燥灭菌箱温度控制干燥灭菌箱温度控制l干燥灭菌箱的温度校准：用参考温度计进行温干燥灭菌箱的温度校准：用参考温度计进行温度测试。度测试。l干燥灭菌箱温度要求与精确度：干燥灭菌箱温度要求与精确度：1605 1605 或或180 5 180 5 。l干燥灭菌箱校准周期一般为一年。干燥灭菌箱校准周期一般为一年。培养基配制用蒸馏水的控制培

14、养基配制用蒸馏水的控制l按设备说明，定期清洁离子交换器和更换离子按设备说明，定期清洁离子交换器和更换离子交换材料。交换材料。l检测要求：西欧标准为微生物检验用蒸馏水的检测要求：西欧标准为微生物检验用蒸馏水的特定电导率特定电导率0.50.5ms/mms/m；细菌数细菌数5050cfucfu/ml/ml。我们日常用的标准为我们日常用的标准为 1010ms/mms/m。l检测频率：检测频率：1 1次次/ /每月。每月。l蒸馏水定点供应，并做好相应的质量控制及记蒸馏水定点供应，并做好相应的质量控制及记录。录。天平的管理天平的管理l天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台天平放置要求：无振动、无气流影响

15、及水平台面上。面上。l天平要有使用记录。天平要有使用记录。l天平作为计量仪器是列入国家强制检定的范围，天平作为计量仪器是列入国家强制检定的范围，一般一般1 1次次/ /年进行检定。年进行检定。容积的控制（一）容积的控制（一）l保证高压灭菌后的稀释剂满足标准用量。保证高压灭菌后的稀释剂满足标准用量。l采取称中法来测定蒸发量，体积采取称中法来测定蒸发量，体积100100mlml的稀释的稀释剂起重量为剂起重量为101101g g。高压结束体积偏差不得超高压结束体积偏差不得超过过1%1%。l采取先高压后定量分装，可避免因高压造成采取先高压后定量分装，可避免因高压造成的体积误差。的体积误差。l对保存的定

16、量液体应在使用时，注意补充容对保存的定量液体应在使用时，注意补充容积。积。容积的控制（二）容积的控制（二）l吸管的控制：通过小计量容器校准后使用。吸管的控制：通过小计量容器校准后使用。l小计量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，小计量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校准周期一般为校准周期一般为1-21-2次次/ /一年。一年。l小计量容器日常使用检查可每周进行一次，包小计量容器日常使用检查可每周进行一次，包括容器的完整性，并做好相应的记录。括容器的完整性，并做好相应的记录。pHpH计计lpHpH计使用前应用标准液进行校准。计使用前应用标准液进行校准。l缓冲液使用有效期：缓冲液使用有效期：PH4

17、.00 PH4.00 约约1 1年年 PH7.00 PH7.00 约约6 6个月个月 pH9.00 pH9.00 约约6 6个月个月lpHpH计的维护：电极外表的定期清洗；计的维护：电极外表的定期清洗； 电极敏感性检测及极性恢复。电极敏感性检测及极性恢复。净化工作台的控制净化工作台的控制l水平流净化工作台工作区域，要求洁净度为水平流净化工作台工作区域，要求洁净度为100100级。空气沉降级。空气沉降3030minmin，细菌数细菌数1 1个个/ /皿。垂皿。垂直流净化工作台，细菌数直流净化工作台，细菌数0.490.49个个/ /皿皿. .l净化工作台运行检查频次：净化工作台运行检查频次：1 1

18、次次/ /月，采用细菌月，采用细菌沉降检测。沉降检测。l净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一次，净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。并同时进行粒子与细菌沉降检测。紫外线灯的控制紫外线灯的控制l检测方法：仪器测试法和生物测试法。检测方法：仪器测试法和生物测试法。l前者是通过专用仪器检测紫外灯管发射的紫外前者是通过专用仪器检测紫外灯管发射的紫外光强度。国家消毒技术规范中表明在距离照射光强度。国家消毒技术规范中表明在距离照射源源1 1米处，要求其强度为米处，要求其强度为90 90 lxlx。l生物测试法：采用一定的菌培养物，经一定比生物测试法：采用一定的菌培养物，经

19、一定比例稀释，菌量控制在例稀释，菌量控制在200-250200-250个个/0.5/0.5mlml，涂布涂布平板在紫外灯光下照射平板在紫外灯光下照射2 2minmin，同时设置普通光同时设置普通光源的对照组，置源的对照组，置3737培养培养4848h h，计算其杀灭率，计算其杀灭率，要求杀灭率达要求杀灭率达99%99%。显微镜的控制显微镜的控制l显微镜应有作业指导书，日常维护记录及自校显微镜应有作业指导书，日常维护记录及自校记录。记录。l显微镜应置于无振动、避免灰尘、防潮等要求显微镜应置于无振动、避免灰尘、防潮等要求的环境。的环境。其它微生物检测专用仪器的控制其它微生物检测专用仪器的控制l细菌

20、鉴定仪、酶标仪等设备，工作中常用阳性细菌鉴定仪、酶标仪等设备，工作中常用阳性对照检测其功能的正常性。对照检测其功能的正常性。l仪器的检定则按检定或自校作业指导书进行。仪器的检定则按检定或自校作业指导书进行。l仪器的使用登记、校准计划、校准记录等文件仪器的使用登记、校准计划、校准记录等文件存档。存档。l仪器专人使用，操作者应持证上岗。仪器专人使用，操作者应持证上岗。五、仪器设备的功能监测五、仪器设备的功能监测l高压灭菌器：定期监测（每月一次）高压灭菌器：定期监测（每月一次） 生物指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌 化学指示剂：变色的指示带化学指示剂：变色的指示带l培养箱、冰箱、

21、水浴箱：培养箱、冰箱、水浴箱： 每日早、晚两次温度观测，绘制温度曲线图每日早、晚两次温度观测，绘制温度曲线图五、仪器设备的功能监测五、仪器设备的功能监测l厌氧培养装置：厌氧培养装置： 化学标记：化学标记： 美蓝美蓝 生物学指标：铜绿假单胞菌生物学指标：铜绿假单胞菌lCOCO2 2培养箱培养箱 ： 每天检查箱内的每天检查箱内的COCO2 2含量含量五、仪器设备的功能监测五、仪器设备的功能监测l生物安全柜：生物安全柜： 定期更换滤网，紫外线每定期更换滤网，紫外线每3 3月检查月检查1 1次次l微生物鉴定仪微生物鉴定仪 及时更新软件及时更新软件 每批号鉴定卡用标准菌株测定每批号鉴定卡用标准菌株测定五

22、、仪器设备的功能监测五、仪器设备的功能监测 表表1仪器设备的质量控制标准仪器设备的质量控制标准设备设备控制标准控制标准允许范围允许范围高压灭菌器高压灭菌器121121培养箱培养箱351水浴箱水浴箱370.5冰箱冰箱42低温冰箱低温冰箱-205CO2培养箱培养箱5%10%10%培养基的有效性试验培养基的有效性试验l每每一一批批新新制制或或新新购购的的培培养养基基，使使用用前前均均须须取取标准菌株试验标准菌株试验. .l培培养养基基的的试试验验结结果果需需要要加加以以记记录录，项项目目包包括括试验日期、试验结果以及实验者的签名等。试验日期、试验结果以及实验者的签名等。 六、培养基质量控制六、培养基

23、质量控制培养基质量控制培养基质量控制培养基的量：培养基的量：l平板培养基的厚度一般为平板培养基的厚度一般为3mm3mm (90mm(90mm平皿平皿+15-20+15-20mlml培养基）培养基）l斜面不超过试管的斜面不超过试管的2/32/3常用培养基的质量控制 （一）（一）l检验项目与方法：物物理理、化化学学及及生生物物学学指指标标鉴鉴定定lA A：感感官官测测定定，检检查查其其颜颜色色与与透透明明度度，培培养养基基应澄清，无浑浊。应澄清，无浑浊。lB B：PHPH测定，按各种培养基要求的测定，按各种培养基要求的PH0.2PH0.2。lC C：生生物物学学指指标标检检定定，无无菌菌实实验验、

24、被被检检培培养养基基相应细菌生长率测试；菌落大小及特征的检测。相应细菌生长率测试；菌落大小及特征的检测。常用培养基的质量控制 （一）（一）无菌试验：无菌试验：l 每批配好的培养基须进行无菌试验每批配好的培养基须进行无菌试验l随随机机选选取取5%-10%5%-10%的的量量，如如果果配配制制大大量量的的培培养养基基，则则任任意意选选取取1010个个平平板板或或管管装装培培养养基基，3535温温度度下下过过夜夜培培养养，证明无菌生长为合格证明无菌生长为合格常用培养基的质量控制 （二）（二）l生长率测试：适适用用于于液液体体和和固固体体培培养养基基：将将菌菌培培养养液液，用用生生理理盐盐水水做做倍倍

25、比比稀稀释释，取取合合适适稀稀释释度度进进行行平平板板计计数数，同同时时以以新新鲜鲜配配制制的的国国标标培培养养基进行对照。基进行对照。常用培养基的质量控制 （三）（三）l菌菌落落大大小小测测试试：划划线线分分离离测测试试菌菌，取取1010个个菌菌落落测测量量直直径径大大小小，其其直直径径均均值值与与新新鲜鲜配配制制的的国国标培养基无统计学差异。标培养基无统计学差异。常用培养基检定用标准菌株表表2常用培养基的质量控制常用培养基的质量控制培养基培养基质控菌种质控菌种生长情况生长情况结果结果血琼脂血琼脂巧克力琼脂巧克力琼脂营养琼脂营养琼脂麦康凯琼脂麦康凯琼脂中国蓝琼脂中国蓝琼脂SS琼脂琼脂沙保罗琼

26、脂沙保罗琼脂化脓链球菌化脓链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌大肠埃希菌福氏志贺菌福氏志贺菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌大肠埃希菌福氏志贺菌福氏志贺菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌产气肠杆菌产气肠杆菌鼠伤寒沙门菌鼠伤寒沙门菌大肠埃希菌大肠埃希菌白色假丝酵母菌白色假丝酵母菌+-+-+-+明显乙型溶血环明显乙型溶血环甲型溶血环甲型溶血环24h生长生长生长生长分解乳糖，菌落红色分解乳糖，菌落红色不分解乳糖，菌落无色透明不分解乳糖，菌落无色透明不生长不生长分解乳糖，菌落蓝色分解乳糖，菌落蓝色不分解乳糖，菌落无色不分解乳糖，菌落无色不生长不生长

27、粉红色菌落粉红色菌落无色菌落，中心黑色无色菌落，中心黑色常用培养基检定用标准菌株表表2常用培养基的质量控制常用培养基的质量控制生长生长生长，生长， 溶血溶血生长生长部分抑制部分抑制生长，黄色菌落生长，黄色菌落生长，蓝绿色菌落生长，蓝绿色菌落大量生长大量生长抑制生长抑制生长+-脆弱拟杆菌脆弱拟杆菌产气荚膜梭菌菌产气荚膜梭菌菌空肠弯曲菌空肠弯曲菌大肠埃希菌大肠埃希菌霍乱弧菌霍乱弧菌副溶血弧菌副溶血弧菌霍乱弧菌霍乱弧菌大肠埃希菌大肠埃希菌厌氧血平板厌氧血平板弯曲菌琼脂弯曲菌琼脂TCBS琼脂琼脂碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水结果结果生长情况生长情况质控菌种质控菌种培养基培养基培养基保存环境l制成的培养基保存

28、环境为制成的培养基保存环境为44冰箱，如制成平冰箱，如制成平板则用塑料袋包装置冰箱保存，板则用塑料袋包装置冰箱保存， l干燥培养基干粉含有活性物质或遇热易分解的干燥培养基干粉含有活性物质或遇热易分解的物质应仔细查看存放条件，多数也须放在物质应仔细查看存放条件，多数也须放在2-8 2-8 条件保存。条件保存。l含有高浓度胆盐的培养基存放于含有高浓度胆盐的培养基存放于10-15 10-15 。培养基配制的质量控制培养基配制的质量控制l培养基的制作过程必须统一培养基的制作过程必须统一l培培养养基基或或添添加加剂剂的的剂剂量量、pHpH值值、高高温温灭灭菌菌的的时时间间或或温度，都需遵照规定温度，都需

29、遵照规定l培培养养基基名名称称、本本批批配配制制量量、配配方方、配配制制日日期期和和配配制制人员姓名都必须详细记录人员姓名都必须详细记录 培养基制备控制程序 l培养基配制所用的仪器设备必须经过相应的鉴培养基配制所用的仪器设备必须经过相应的鉴定定 。l配制培养基所用的用具及容器必须是清洁或是配制培养基所用的用具及容器必须是清洁或是灭菌的。灭菌的。 培养基的配制程序（一）培养基的配制程序（一） l不同的培养基配制时注意各类成分的用途。不同的培养基配制时注意各类成分的用途。l对于干燥培养基配制，同样需要进行对于干燥培养基配制，同样需要进行PHPH测验。测验。培养基的配制程序（二）培养基的配制程序（二

30、）l配配制制好好的的培培养养基基（尤尤其其是是糖糖发发酵酵管管）不不宜宜久久放放。因因为为培培养养基基吸吸收收空空气气中中的的二二氧氧化化碳碳，会会使使培培养养基变酸，从而影响细菌的生长。基变酸，从而影响细菌的生长。l培养基中的抑制剂及指示剂一定要精确称量。培养基中的抑制剂及指示剂一定要精确称量。七、试剂、染色液及抗血清的质控七、试剂、染色液及抗血清的质控染色液的质量控制染色液的质量控制l 染色液要标明配制或购入日期，选用适当的标染色液要标明配制或购入日期，选用适当的标准菌株作阳性及阴性对照鉴定。准菌株作阳性及阴性对照鉴定。l革兰氏染色用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌制备革兰氏染色用金黄色葡萄球菌

31、和大肠埃希菌制备浓菌悬液进行质量控制，每次质控与标本检测同浓菌悬液进行质量控制，每次质控与标本检测同步进行。步进行。七、试剂、染色液及抗血清的质控七、试剂、染色液及抗血清的质控各种染色液的监控菌株各种染色液的监控菌株染色液染色液 阳性对照菌阳性对照菌 阴性对照菌阴性对照菌 监控频度监控频度革兰染色液革兰染色液 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌大肠埃希菌 每天每天抗酸染色液抗酸染色液 结核分枝杆菌结核分枝杆菌 每次每次 异染颗粒染色液异染颗粒染色液 白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌 每次每次荚膜染色液荚膜染色液 肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌 每批每批鞭毛染色液鞭毛染色液 普通变形杆菌普通变形杆菌 福

32、氏志贺菌福氏志贺菌 每次每次七、试剂、染色液及抗血清的质控七、试剂、染色液及抗血清的质控试剂的质量控制试剂的质量控制l各类试剂，在配制或购入后均应进行各类试剂，在配制或购入后均应进行“有效有效”试试验，用已知阳性及阴性菌株进行试验验，用已知阳性及阴性菌株进行试验l试剂须根据标示配制，适当储存试剂须根据标示配制，适当储存l对较稳定的试剂如靛基质试剂应在配制时及每周对较稳定的试剂如靛基质试剂应在配制时及每周予以检测，凡不稳定的试剂每天使用时均应检测予以检测，凡不稳定的试剂每天使用时均应检测，合格后才能使用，合格后才能使用 七、试剂、染色液及抗血清的质控七、试剂、染色液及抗血清的质控表表3常用试剂的

33、阳性、阴性对照菌株常用试剂的阳性、阴性对照菌株常用试剂常用试剂 阳性对照菌株阳性对照菌株阴性对照菌株阴性对照菌株凝固酶试剂凝固酶试剂金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌触酶试验用试剂触酶试验用试剂化脓链球菌化脓链球菌V-P试验用试剂试验用试剂阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌氧化酶试剂氧化酶试剂铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌大肠埃希菌大肠埃希菌靛基质试剂靛基质试剂金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌七、试剂、染色液及抗血清的质控七、试剂、染色液及抗血清的质控诊断血清的质量控制诊断血清的质量控制l购入的沙门菌属、志贺菌属、致病性大肠杆菌购入的沙门菌

34、属、志贺菌属、致病性大肠杆菌的诊断血清必须立即记录其购入日期、观察透的诊断血清必须立即记录其购入日期、观察透明度、色彩有无变化和是否有沉淀物，然后置明度、色彩有无变化和是否有沉淀物，然后置44冰箱保存冰箱保存l使用前应注意检查诊断血清的批号、有效期，使用前应注意检查诊断血清的批号、有效期，如发现浑浊或有絮状沉淀物时，很可能系污染如发现浑浊或有絮状沉淀物时，很可能系污染所致，不能再继续使用所致，不能再继续使用七、试剂、染色液及抗血清的质控七、试剂、染色液及抗血清的质控诊断血清的质量控制诊断血清的质量控制l使用前应以阳性及阴性菌株进行检测，观察其效使用前应以阳性及阴性菌株进行检测，观察其效价及特异

35、性价及特异性l不得将诊断血清置室温保存不得将诊断血清置室温保存, ,各种诊断血清均应各种诊断血清均应置冰箱中置冰箱中44保存保存l每月用标准菌株进行一次测定每月用标准菌株进行一次测定 八、检验过程的质量控制八、检验过程的质量控制检测质量保证检测质量保证l定期使用有证标准物质和次级标准物质（参考定期使用有证标准物质和次级标准物质（参考物质）进行内部质量控制。物质）进行内部质量控制。l参加实验室间的比对或能力验证参加实验室间的比对或能力验证l利用相同或不同方法进行重复检测利用相同或不同方法进行重复检测l对留存的样品进行再检测。对留存的样品进行再检测。重复计数要求重复计数要求l菌落计数精密度控制直接

36、计数，选择同一标本，要求菌落计数精密度控制直接计数，选择同一标本，要求检验人员进行菌落计数。检验人员进行菌落计数。l自身同一平皿重复计数误差应小于自身同一平皿重复计数误差应小于7.7%7.7%l实验人员之间同一平皿重复计数误差实验人员之间同一平皿重复计数误差18 .2%18 .2% 自身同一梯度平行加样两皿间相对误差小于自身同一梯度平行加样两皿间相对误差小于7.7%7.7% 实验人员之间同一梯度计数误差实验人员之间同一梯度计数误差18 .2%18 .2%l不同梯度间菌落计数最终误差小于不同梯度间菌落计数最终误差小于7.7%7.7%菌种鉴定质控菌种鉴定质控l菌菌种种鉴鉴定定质质控控要要求求，对对

37、所所给给的的微微生生物物菌菌种种，按按有有关关的的方方法法及及指指标标进进行行生生化化、血血清清等等方方面面的的鉴鉴定。定。l鉴鉴定定质质量量评评价价：鉴鉴定定程程序序是是否否正正确确；鉴鉴定定方方法法是是否否正正确确；具具体体操操作作技技术术是是否否熟熟练练，结结果果报报告告是否正确。是否正确。内部质量控制的推荐频率内部质量控制的推荐频率l菌落计数精密度控制：菌落计数精密度控制： 1 1次次/3/3月；月；l菌种鉴定控制：菌种鉴定控制： 1 1次次/ /半年或半年或1 1年年九、标准菌株的来源和保存九、标准菌株的来源和保存标准菌株要求标准菌株要求l 必须是形态、染色反应、生理生化及血必须是形

38、态、染色反应、生理生化及血清学特性典型而稳定的菌株清学特性典型而稳定的菌株l实验结果重复性好，极少发生变异实验结果重复性好，极少发生变异l国际社会认可国际社会认可l来源于专门机构来源于专门机构九、标准菌株的来源和保存九、标准菌株的来源和保存标准菌株来源标准菌株来源l美国典型菌种保藏中心美国典型菌种保藏中心ATCCATCCl卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中心卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中心 l国家医学微生物菌种保藏中心国家医学微生物菌种保藏中心九、标准菌株的来源和保存九、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法标准菌株的保存方法 冷冻干燥法：冷冻干燥法：l最理想的保存方法，不改变菌种性状，保

39、最理想的保存方法，不改变菌种性状，保存时间长存时间长l手续繁琐，需专门的冷冻干燥设备手续繁琐，需专门的冷冻干燥设备l菌种保存中心均采用此法菌种保存中心均采用此法九、标准菌株的来源和保存九、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法标准菌株的保存方法 冰冻保存法：冰冻保存法：l此法较简单，将细菌混悬于脱纤维羊血或脱此法较简单，将细菌混悬于脱纤维羊血或脱脂牛奶中，置液氮或脂牛奶中，置液氮或-20-20冰箱保存冰箱保存l但细菌经多次转种，性状可能发生变异但细菌经多次转种，性状可能发生变异九、标准菌株的来源和保存九、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法标准菌株的保存方法培养基保存法：最简易方便的方法，适

40、用于大多数实验室培养基保存法：最简易方便的方法，适用于大多数实验室（1 1）普通琼脂斜面保存法：适于一般细菌的保存，置）普通琼脂斜面保存法：适于一般细菌的保存，置44冰箱冰箱可保存可保存1 1个月。个月。（2 2）血琼脂斜面保存法：适于链球菌，可半月转种一次。）血琼脂斜面保存法：适于链球菌，可半月转种一次。（3 3）半固体穿刺法：穿刺培养基并加液体石蜡，置）半固体穿刺法：穿刺培养基并加液体石蜡，置44冰箱可冰箱可保存保存3-63-6个月，适用于肠杆菌科细菌。个月，适用于肠杆菌科细菌。九、标准菌株的来源和保存九、标准菌株的来源和保存食品微生物检验实验室必备质控菌株：食品微生物检验实验室必备质控菌

41、株：l大肠埃希菌大肠埃希菌 ATCC25922ATCC25922l大肠埃希菌大肠埃希菌 ATCC35218ATCC35218l铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 ATCC27853ATCC27853l金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 ATCC25923ATCC25923l粪肠球菌粪肠球菌 ATCC29212ATCC29212十、实验室安全防护十、实验室安全防护培训与告之培训与告之警示标志警示标志防止空气污染防止空气污染有毒有害物防护有毒有害物防护消除污染和废物的处理消除污染和废物的处理食品微生物学检验食品微生物学检验室间质量评价室间质量评价室间质量评价室间质量评价l室间质量评价室间质量评价是质量保证体系的重

42、要组成部是质量保证体系的重要组成部分。分。l实验室应参加外部的质量控制活动，对其开展的实验室应参加外部的质量控制活动，对其开展的每一项检测均应参加相应的室间质量控制。每一项检测均应参加相应的室间质量控制。室间质量评价室间质量评价l室间质量控制的一般性检查项目室间质量控制的一般性检查项目1 1、仪器设备的操作书，使用、保养、维修记录。、仪器设备的操作书，使用、保养、维修记录。2 2、培养基和试剂的配制记录、培养基的保存方法、灭菌质、培养基和试剂的配制记录、培养基的保存方法、灭菌质 量、有效期。量、有效期。3 3、室内全面质量控制的建立，工作人员熟练程度的考核和盲、室内全面质量控制的建立，工作人员

43、熟练程度的考核和盲样试验的进行情况，检验操作手册及操作规范性样试验的进行情况，检验操作手册及操作规范性室间质量评价室间质量评价熟练程度的考核熟练程度的考核l用模拟食品标本做质量评价用模拟食品标本做质量评价是目前国内外广泛采是目前国内外广泛采用的方法，主要评价实验室在病原菌的分离、鉴用的方法，主要评价实验室在病原菌的分离、鉴定试验等方面的工作情况。定试验等方面的工作情况。室间质量评价室间质量评价熟练程度的考核熟练程度的考核l由质控管理机构发放模拟标本或菌种，实验室按照由质控管理机构发放模拟标本或菌种，实验室按照日常的操作方法进行相应的分离鉴定试验。实验室日常的操作方法进行相应的分离鉴定试验。实验室完成鉴定后在规定时间内将结果反馈至参考实验室，完成鉴定后在规定时间内将结果反馈至参考实验室，进行评价。进行评价。室间质量评价室间质量评价质控结果的分析与评价质控结果的分析与评价 质控管理机构对每次质控结果进行统计分析，质控管理机构对每次质控结果进行统计分析，将每一实验室的结果与标准进行比较和统计分析，将每一实验室的结果与标准进行比较和统计分析，发回评估报告。发回评估报告。