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1、 免免 疫疫 学学 实实 验验任课教师：任课教师： 杨晓燕杨晓燕Tel： 68485813(O)E mail： 1优讲借鉴 免疫学试验注意事项免疫学试验注意事项1 1、必须穿白大衣进实验室；、必须穿白大衣进实验室；2 2、实验中注意实验室秩序，禁止喧哗打闹；、实验中注意实验室秩序，禁止喧哗打闹；3 3、爱惜实验器材，如发生损坏应及时报告；、爱惜实验器材，如发生损坏应及时报告；4 4、节约实验药品；、节约实验药品；5 5、实验结束后，要回收的玻璃器材如载玻片等、实验结束后，要回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定容器内；废品弃于垃圾袋内，严禁丢弃放于指定容器内；废品弃于垃圾袋内，严禁丢弃在水槽中。在
2、水槽中。6 6、实验完毕，清理桌面，班长安排清洁，老师检、实验完毕，清理桌面，班长安排清洁，老师检查后，做清洁同学方可离开。查后，做清洁同学方可离开。2优讲借鉴试验报告书写格式试验报告书写格式1 1、试验主要步聚；、试验主要步聚；2 2、试验结果；、试验结果；3 3、结论；、结论；4 4、讨论。、讨论。 试试 验验 题题 目目3优讲借鉴 血清学反应：血清学反应： 即体外进行的即体外进行的即体外进行的即体外进行的Ag-AbAg-AbAg-AbAg-Ab反应，由于抗体主要反应，由于抗体主要反应，由于抗体主要反应，由于抗体主要存在于血清中，故又称血清学反应。存在于血清中，故又称血清学反应。存在于血清
3、中，故又称血清学反应。存在于血清中，故又称血清学反应。特点：特点：特点：特点：(1)(1)(1)(1)高度特异性；高度特异性；高度特异性；高度特异性；(2)(2)(2)(2)分子表面的可逆性结合；分子表面的可逆性结合；分子表面的可逆性结合；分子表面的可逆性结合；(3)(3)(3)(3)AgAgAgAg、AbAbAbAb比例合适才会出现肉眼可见的反应。比例合适才会出现肉眼可见的反应。比例合适才会出现肉眼可见的反应。比例合适才会出现肉眼可见的反应。4优讲借鉴5优讲借鉴肉眼可见的肉眼可见的肉眼可见的肉眼可见的凝集物。凝集物。凝集物。凝集物。6优讲借鉴7优讲借鉴影响条件影响条件1 1、电解质：、电解质
4、：0.85% 0.85% NaClNaCl等；等； 2 2、酸碱度：、酸碱度：pH6pH69 9； 3 3、温度：、温度：37370 0C C。8优讲借鉴Ag-AbAg-Ab反应种类：反应种类：1 1、凝集反应、凝集反应； 2 2、沉淀反应、沉淀反应； 3 3、补体结合反应；、补体结合反应；4 4、中和反应；、中和反应；5 5、免疫标记技术。、免疫标记技术。9优讲借鉴实验一实验一 凝集实验凝集实验10优讲借鉴一、实验内容一、实验内容1 1、直接凝集实验、直接凝集实验( (玻片法玻片法) )血型鉴定血型鉴定每人做每人做2 2、间接凝集实验、间接凝集实验类风湿因子检测类风湿因子检测小组做小组做11
5、优讲借鉴二、目的要求二、目的要求1 1、掌握血清学反应概念、特点、影响条件、掌握血清学反应概念、特点、影响条件 及类型；及类型；2 2、了解凝集反应的原理、类型及其用途；、了解凝集反应的原理、类型及其用途；3 3、熟悉常用凝集反应的实验方法及结果判定。、熟悉常用凝集反应的实验方法及结果判定。12优讲借鉴凝集反应：凝集反应： 颗粒性抗原颗粒性抗原( (细菌、细胞等细菌、细胞等) )与相应抗体在与相应抗体在适当的条件下发生特异性结合反应，出现肉眼适当的条件下发生特异性结合反应，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应可见的凝集物，称为凝集反应。颗粒性颗粒性颗粒性颗粒性AgAg凝集原；凝集原；凝集原；凝集
6、原；相应相应相应相应AbAb凝集素。凝集素。凝集素。凝集素。13优讲借鉴颗粒性抗原：颗粒性抗原：光镜下可见，肉眼观呈混浊悬液，如细菌、光镜下可见，肉眼观呈混浊悬液，如细菌、RBC等。等。可溶性抗原：可溶性抗原：光镜下不可见，肉眼观呈澄清透明，如蛋光镜下不可见，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。白质、多糖抗原等。凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应14优讲借鉴凝集反应类型：凝集反应类型：直接凝集反应直接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应15优讲借鉴1 1、直接凝集反应、直接凝集反应(1)(1)(1)(1)玻片法：玻片法：玻片法：玻片法：(2)(2)(2)(2)试管法：试管法：试管法：试管法：已知
7、已知已知已知Ab,Ab,Ab,Ab,测测测测AgAgAgAg，为定性实验；为定性实验；为定性实验；为定性实验；已知已知已知已知Ag,Ag,Ag,Ag,测测测测AbAbAbAb，为定量实验；为定量实验；为定量实验；为定量实验；用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。用途：诊断肠热症用途：诊断肠热症用途：诊断肠热症用途：诊断肠热症( ( ( (Widal reactionWidal reactionWidal reactionWidal reaction) ) ) )诊断布氏菌病诊断布氏菌病诊断
8、布氏菌病诊断布氏菌病( ( ( (Wright reaction)Wright reaction)Wright reaction)Wright reaction)16优讲借鉴2 2、间接凝集反应、间接凝集反应(1)(1)(1)(1)间接凝集试验间接凝集试验间接凝集试验间接凝集试验 已知可溶性已知可溶性已知可溶性已知可溶性AgAgAgAg包被载体包被载体包被载体包被载体, , , ,检测未知检测未知检测未知检测未知AbAbAbAb。 例如：间接乳胶凝集试验检测类风湿因子等。例如：间接乳胶凝集试验检测类风湿因子等。例如：间接乳胶凝集试验检测类风湿因子等。例如：间接乳胶凝集试验检测类风湿因子等。17
9、优讲借鉴(2)(2)(2)(2)反向间接凝集试验反向间接凝集试验反向间接凝集试验反向间接凝集试验 已知已知已知已知AbAbAbAb包被载体包被载体包被载体包被载体, , , ,检测未知可溶性检测未知可溶性检测未知可溶性检测未知可溶性AgAgAgAg 例如：某些传染病和原发性肝癌的早期诊断验例如：某些传染病和原发性肝癌的早期诊断验例如：某些传染病和原发性肝癌的早期诊断验例如：某些传染病和原发性肝癌的早期诊断验18优讲借鉴（3 3）间接凝集抑制试验）间接凝集抑制试验 例如：妊娠试验例如：妊娠试验19优讲借鉴（4 4）协同凝集试验）协同凝集试验用于检测传染病早用于检测传染病早用于检测传染病早用于检测
10、传染病早期血液及分泌液中的微期血液及分泌液中的微期血液及分泌液中的微期血液及分泌液中的微量量量量AgAgAgAg。20优讲借鉴三、试验内容三、试验内容( (一一) )血型鉴定血型鉴定( (每人作每人作) )：ABOABOABOABO血型血型血型血型A AB BABABOO血型血型血型血型AgAgA+ B -A+ B -B+ A-B+ A-A+ B+A+ B+A- B -A- B -血型血型血型血型AbAb抗抗抗抗B B抗抗抗抗A A一一一一抗抗抗抗A A、抗抗抗抗B B21优讲借鉴1、材料、材料已知已知Ab:Ab:标准血清：抗标准血清：抗A A和抗和抗B B血清血清待测待测Ag:RBCAg:R
11、BC血型抗原血型抗原22优讲借鉴2、方法、方法(1)(1)取血取血( (无名指尖或耳垂无名指尖或耳垂) )制备制备2-5%RBC2-5%RBC悬液；悬液；(2)(2)加血清各加血清各1 1滴滴；(3)(3)加加RBCRBC各各1 1滴；滴；(4)(4)牙签搅和混匀牙签搅和混匀；(5)(5)结果判断结果判断(10-15(10-15minmin后后) )。23优讲借鉴A A凝集、凝集、凝集、凝集、B B不凝集不凝集不凝集不凝集A A型血型血型血型血A A不凝集、不凝集、不凝集、不凝集、B B凝集凝集凝集凝集B B型血型血型血型血A A凝集、凝集、凝集、凝集、B B凝集凝集凝集凝集ABAB型血型血型
12、血型血A A不凝集、不凝集、不凝集、不凝集、B B不凝集不凝集不凝集不凝集OO型血型血型血型血在白背景在白背景在白背景在白背景上观察上观察上观察上观察+ + (RBC凝集凝集) (RBC不凝集不凝集)24优讲借鉴4、注意事项、注意事项(1) (1) RBCRBC悬液浓度悬液浓度 2-5% 2-5%；(2) (2) 牙签搅拌混匀时，不能使抗牙签搅拌混匀时，不能使抗A A和抗和抗B B血血 清混合；清混合；(3)(3)在白色背景上观察效果好。在白色背景上观察效果好。25优讲借鉴( (二二) )类风湿因子检测类风湿因子检测Ag: Ag: 变性变性IgGIgGAb: Ab: 抗变性抗变性IgG(IgG
13、(类风湿因子类风湿因子) )间接乳胶凝集试验间接乳胶凝集试验26优讲借鉴方法：方法：A A、取一乳胶凝集实验反应板；取一乳胶凝集实验反应板；取一乳胶凝集实验反应板；取一乳胶凝集实验反应板；B B、加待测血清、阳性和加待测血清、阳性和加待测血清、阳性和加待测血清、阳性和NSNS对照各一滴；对照各一滴；对照各一滴；对照各一滴；C C、各加一滴致敏乳胶；各加一滴致敏乳胶；各加一滴致敏乳胶；各加一滴致敏乳胶；D D、5 5分钟后观察结果。分钟后观察结果。分钟后观察结果。分钟后观察结果。乳胶凝集如细沙状。乳胶凝集如细沙状。乳胶凝集如细沙状。乳胶凝集如细沙状。以黑背景观察为佳。以黑背景观察为佳。以黑背景观察为佳。以黑背景观察为佳。27优讲借鉴
