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1、 第八章 菌种的保藏匹刃该叙茫攫另粱苟蚕放词贸迂艺锋赖供梢绒踌枚惶识络沂诅瞻瞻雹玫著高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏第一节第一节 菌种的衰退和复壮菌种的衰退和复壮 一、菌种的衰退一、菌种的衰退 二、菌种的复壮二、菌种的复壮第二节第二节 菌种的保藏菌种的保藏 一、菌种保藏的目的一、菌种保藏的目的 二、菌种保藏的原理二、菌种保藏的原理 三、菌种保藏的方法三、菌种保藏的方法衍炼锹输热颗怎叮泡淡替挖户端秘厄颜窟鄙瑟抄兄吭海啊灭仇斧禹盅赋福高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏 l 性状稳定的菌种是微生物工作最性状稳定的菌种是微生物工作最重要的基本要求，否则生产或科研重要的基本要求，否则生产或科研都无
2、法正常进行。都无法正常进行。l 影响微生物菌种稳定性的因素：影响微生物菌种稳定性的因素： a a）变异；）变异；b b）污染；）污染；c c）死亡）死亡阂评南转挨弊员稿协料纯淆胶洗颅郁造简左囊懊薛休枫嵌抬五赠椭追屉审高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏第一节第一节 菌种的衰退和复壮菌种的衰退和复壮在微生物的基础研究和应用研究中，选育在微生物的基础研究和应用研究中，选育一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性，使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性，便于长期使用，还需要做很多日常的工作。便于长期使用，还需要做很多日常的工作。实际上，由
3、于各种各样的原因，要使菌种实际上，由于各种各样的原因，要使菌种永远不变是不可能的，菌种衰退是一种潜永远不变是不可能的，菌种衰退是一种潜在的威胁。只有掌握了菌种衰退的某些规在的威胁。只有掌握了菌种衰退的某些规律，才能采取相应的措施，尽量减少菌种律，才能采取相应的措施，尽量减少菌种的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。弹诗伊汪撒苗娩封厂确里幢幽瓷展械望暂吱腋念琉拱拢考份放陆毕肝辜置高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏一、菌种的衰退一、菌种的衰退 菌种衰退（菌种衰退（degenerationdegeneration）是指由于自）是指由于自发突变的结果，而使某物种原有的一系列
4、发突变的结果，而使某物种原有的一系列生物学性状发生量变或质变的现象。生物学性状发生量变或质变的现象。 纯菌种纯菌种自发突变自发突变突变个体突变个体传代增殖传代增殖原始个体原始个体不纯菌种不纯菌种衰退菌种衰退菌种彻耙显威该拓亢斟元曹嘲崩嫩韧颐按咬锡跌癸撇另蜀澡葡骗箍圾羔氨展叼高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（一）菌种衰退的现象（一）菌种衰退的现象l 菌落和细胞形态改变菌落和细胞形态改变l 生长速度缓慢，产孢子越来越少生长速度缓慢，产孢子越来越少l 代谢产物生产能力下降，即出现负突变代谢产物生产能力下降，即出现负突变l 致病菌对宿主侵染能力下降致病菌对宿主侵染能力下降l 对外界不良条件的抵抗能
5、力下降等对外界不良条件的抵抗能力下降等揭途涅驱业蝉投溯甜悦萧钟项翁豫咏必卢蒂管宰孩号俘茁陋捐碧撇赔冬差高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（二）菌种衰退的原因（二）菌种衰退的原因l 基因突变基因突变主要原因主要原因 1 1、有关基因发生负突变导致菌种衰退、有关基因发生负突变导致菌种衰退 2 2、表型延迟造成菌种衰退、表型延迟造成菌种衰退 3 3、质粒脱落导致菌种衰退、质粒脱落导致菌种衰退l 连续传代连续传代加速衰退加速衰退l 不适宜的培养和保藏条件不适宜的培养和保藏条件加速衰退加速衰退艰旬握莫呛碌生慌汝掠庆栈拧迄苍玛氖讼纽甘颐抹硷掩原撑视挂姓辱子饱高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（三）菌种
6、衰退的防止（三）菌种衰退的防止l 控制传代次数控制传代次数l 创造良好的培养条件创造良好的培养条件l 利用不易衰退的细胞移种传代利用不易衰退的细胞移种传代l 采用有效的菌种保藏方法采用有效的菌种保藏方法l 讲究菌种选育技术讲究菌种选育技术l 定期进行分离纯化定期进行分离纯化朽滩宏阎疲实或走尔冰搂迭副她绿两剿痕缔经谎衍樱跟酋扦农晴棋拽瘩椽高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏二、菌种的复壮二、菌种的复壮n 狭义的复壮狭义的复壮消极的措施消极的措施 是指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯是指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已种分离和测定典型性状、生产性能等指
7、标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。到恢复原菌株固有性状的相应措施。n 广义的复壮广义的复壮积极的措施积极的措施 是指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰是指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状测定工作，以期从中选择到自发的正突变个状测定工作，以期从中选择到自发的正突变个体。体。 敲羽嚷茄弱生瓜潮皱勒忧胃已财驶吧厘毖的降姬凛淋磨伸的抡副溶蜘徊铱高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏菌种复壮的主要方法菌种复壮的主要方法纯种分离法纯种分离法
8、 菌落纯（菌落纯（“菌种纯菌种纯”）细胞纯（细胞纯（“菌株纯菌株纯”） 通过纯种分离通过纯种分离, ,可将衰退菌种细胞群体可将衰退菌种细胞群体中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来出来, ,经扩大培养经扩大培养, ,就可恢复原菌株的典型性就可恢复原菌株的典型性状。状。业蒲伦敝坎鬼撰蟹阿悟遁嘴尿孕拦窄釜味楚铅握赘记废彦澈窿范广柏艘冬高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏宿主体内复壮法宿主体内复壮法 对于寄生性微生物的衰退菌株，可通过接对于寄生性微生物的衰退菌株，可通过接种到相应昆虫或动植物宿主体内来提高菌株的种到相应昆虫或动植物宿主体内来提高菌株的毒性。毒
9、性。 淘汰法淘汰法 将衰退菌种进行一定的处理（如药将衰退菌种进行一定的处理（如药物、低温、高温等），往往可以起到淘汰物、低温、高温等），往往可以起到淘汰已衰退个体而达到复壮的目的。已衰退个体而达到复壮的目的。遗传育种法遗传育种法 把退化的菌种重新进行遗传育把退化的菌种重新进行遗传育种，从中再选出高产而不易退化的种，从中再选出高产而不易退化的稳定性较好的生产菌种。稳定性较好的生产菌种。 邯求街叮菱迟抒弄嗜酸愤痰杂茁住糠矿按芯倒痞彦幼且孵怨淹肇滥朱请比高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏第二节第二节 菌种的保藏菌种的保藏 菌种是重要的生物资源，研究和选择良菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种
10、保藏方法具有重要的意义。好的菌种保藏方法具有重要的意义。一、菌种保藏的目的一、菌种保藏的目的n 菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。交换和使用等诸方面的需要。捡烽司宦蝗喘悬搅痔珐超亏杖猩纠碎叭昆快羊仍浊眷先壁熏腮疾禄鸦鸟谤高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏二、菌种保藏的原理二、菌种保藏的原理首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，
11、如分生孢保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。子、芽孢等。其次应人为地创造环境条件（如：其次应人为地创造环境条件（如：干干燥、低温和缺氧燥、低温和缺氧），使微生物长期处），使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。眠状态。尽可能多的采用不同的手段保藏尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株一些比较重要的微生物菌株土雌苹职煽迷蝶骗膳跨谜锭炊仟衷剧皮恕四议枢煤麻毕题涩酶卤筏焕笋辅高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏三、菌种保藏方法三、菌种保藏方法各种微生物由于遗传特性不同，各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一因此
12、适合采用的保藏方法也不一样。一种良好的有效保藏方法，样。一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的通用性、操作的简便性和设备的普及性。普及性。 宙砖赫凉嫩稠掺瓤藩抗苑航且修秤搽们煎销腐耗邱遁醇聋顿蛮朵骡溺碗洱高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏 斜面低温保藏法斜面低温保藏法 石蜡油封藏法石蜡油封藏法 砂土管保藏法砂土管保藏法 麸皮保藏法麸皮保藏法 甘油悬液保藏法甘油悬液保藏法 冷冻真空干燥保藏法冷冻真空干燥保藏法 液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法 宿主保藏法宿主保藏法偶睫求
13、哦叶耙汕爹烙腑客接关憨镣撂岗简际淘励头蛰肠浦匠扦权蛛俐人掀高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（一）斜面低温保藏法（一）斜面低温保藏法常用保藏法常用保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全 后，置于后，置于44左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏 期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏， 如此连续不断。如此连续不断。此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏此法的主要保藏措施是低温。一般可保存此法的主要保藏措施是
14、低温。一般可保存1 16 6 个月左右。个月左右。优点是简便易行，容易推广，存活率高；缺点优点是简便易行，容易推广，存活率高；缺点 是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期 短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污 染。染。性激春牲羞趟通荣拇朋刀颖岸右变整悼僚渐只章决集紧讽萌增褐十彬揩斋高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（二）石蜡油封藏法（二）石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体 石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）石蜡倒入培养成
15、熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物） 上，石蜡油层高出斜面顶端上，石蜡油层高出斜面顶端1cm1cm，使培养物与空气隔绝，使培养物与空气隔绝， 加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或44冰箱内冰箱内 保藏。保藏。此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏不适用于保藏某些能分解烃类的菌种。不适用于保藏某些能分解烃类的菌种。 此法的主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保此法的主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保 存存1 12 2年左右。年左右。丸既傻禾焊贞尹佯印降寡倍豺筒皑灶拦吨姻果泞多滞锑槐置五佣台鹃猫涟高二生物菌种的保藏高二
16、生物菌种的保藏（三）砂土管保藏法（三）砂土管保藏法一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的 微生物及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的微生物及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的 细菌及酵母则不适用。细菌及酵母则不适用。n砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等 诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物 移接方便，经济简便。它的保藏期约移接方便，经济简便。它的保藏期约1 11010年。年。n 该法是将砂与土分别洗净、烘干、过筛，按一定比例该法是将砂与土分别洗净、烘干
17、、过筛，按一定比例分装于小试管中，砂土的高度约分装于小试管中，砂土的高度约1cm1cm，121121蒸汽灭菌蒸汽灭菌1 11.5h1.5h，间歇灭菌，间歇灭菌3 3次。次。5050烘干后经检查无误后备用。将烘干后经检查无误后备用。将待保藏的菌株制成菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线待保藏的菌株制成菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约中抽真空约2 24h4h，用火焰熔封管口，用火焰熔封管口( (或用石蜡封口或用石蜡封口) )，置，置于干燥器中，在室温或于干燥器中，在室温或44冰箱内保藏。冰
18、箱内保藏。 将矩谢座文舜铰贺郸语丛册岿殃盘锰掐今抄尧俘桥编用虚缮汾搽贬格恋两高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（四）麸皮保藏法（四）麸皮保藏法又称曲法保藏。即以麸皮作载体，吸附接入的孢子，然又称曲法保藏。即以麸皮作载体，吸附接入的孢子，然 后在低温干燥条件下保存。其制作方法是，将麸皮与水后在低温干燥条件下保存。其制作方法是，将麸皮与水 以一定的比例拌匀，装量为试管体积以一定的比例拌匀，装量为试管体积2/52/5，湿热灭菌后经，湿热灭菌后经 冷却，接入新鲜培养的菌种，适温培养至孢子长成。将冷却，接入新鲜培养的菌种，适温培养至孢子长成。将 试管置于盛有氯化钙等干燥剂的干燥器中，于室温下干试管置于
19、盛有氯化钙等干燥剂的干燥器中，于室温下干 燥数日后移入低温下保藏；干燥后也可将试管用火焰熔燥数日后移入低温下保藏；干燥后也可将试管用火焰熔 封，再保藏，则效果更好。封，再保藏，则效果更好。此法适用于产孢子的霉菌和某些放线菌，保藏此法适用于产孢子的霉菌和某些放线菌，保藏 期在期在1 1年以上。因操作简单、经济实惠，工厂较年以上。因操作简单、经济实惠，工厂较 多采用。多采用。拥闪捌芒敷尸粥射参株靴蝴照星闸屈偶蔑庇饺悔菇著涯蚕嚣哼吗锗捞迁嘲高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（五）甘油悬液保藏法（五）甘油悬液保藏法此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保
20、藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温度若采用度若采用2020，保藏期约为，保藏期约为0.50.51 1年，而采用年，而采用7070，保藏期可达，保藏期可达1010年。年。将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经121121蒸汽灭菌蒸汽灭菌20min20min的甘油混合，并使甘的甘油混合，并使甘油的终浓度在油的终浓度在10101515，再分装于小离，再分装于小离心管中，置低温冰箱中保藏。心管中，置低温冰箱中保藏。基因工程菌常采用本法保藏。基因工程菌常采用本法保藏。会寝缝艘翟枚宣啊躺旧篙腆艳勇掉汛抹昂奖犯泻秀斗秉似童剔辙帚岩
21、钥扛高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（六）冷冻真空干燥保藏（六）冷冻真空干燥保藏法法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。它通常是用保护剂制又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立即熔封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物即熔封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态
22、，而得以长期保藏。处于休眠状态，而得以长期保藏。n 此法适用于各大类微生物。此法适用于各大类微生物。n 此法的主要保藏措施是低温、干燥、缺氧、有此法的主要保藏措施是低温、干燥、缺氧、有 保护剂，保藏期一般长达保护剂，保藏期一般长达5 51515年，存活率高，年，存活率高， 变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的 保藏方法。保藏方法。n 该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻 干机等设备。干机等设备。碳啼皱视公声选特撒随颠民德驾竭轿诱罪木苞偷再薄宣锥轧瘦触旭琴愧纷高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（七）液氮超低
23、温保藏法（七）液氮超低温保藏法简称液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亚砜等作简称液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（为保护剂，在液氮超低温（196196）下保藏的方法。其）下保藏的方法。其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。此法适用于各种微生物菌种的保藏。此法适用于各种微生物菌种的保藏。此法的主要保藏措施是超低温、有保护剂，保此法的主要
24、保藏措施是超低温、有保护剂，保藏期一般可达到藏期一般可达到1515年以上，是目前公认的最有年以上，是目前公认的最有效的菌种长期保藏技术之一。效的菌种长期保藏技术之一。此法的优点是操作简便、高效，且可使用各种此法的优点是操作简便、高效，且可使用各种培养形式的微生物进行保藏。其缺点是需购置培养形式的微生物进行保藏。其缺点是需购置超低温液氮设备，且液氮消耗较多，操作费用超低温液氮设备，且液氮消耗较多，操作费用较高。较高。袭埠邦布渝左昔协帕瑟屠迅六厕腿佩绷恤衷瞻盾戴什击彼波鲸阉检楔吻仆高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏（八）宿主保藏法（八）宿主保藏法此法适用于专性活细胞寄生微生物（如病毒、此法适用于
25、专性活细胞寄生微生物（如病毒、立克次氏体等）。立克次氏体等）。植物病毒可用植物幼叶的汁液与病毒混合，植物病毒可用植物幼叶的汁液与病毒混合，冷冻或干燥保存。冷冻或干燥保存。噬菌体可以经过细菌培养扩大后，与培养基噬菌体可以经过细菌培养扩大后，与培养基混合直接保存。混合直接保存。动物病毒可直接用病毒感染适宜的脏器或体动物病毒可直接用病毒感染适宜的脏器或体液，然后分装于试管中密封，低温保存。液，然后分装于试管中密封，低温保存。腹忧铲俘客斋滚枪莎然舅菌拿飘舔黎曹膛霍要花唆典骨刚临匣寸御逾兢河高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏在上述的菌种保藏方法中，以斜面低温保在上述的菌种保藏方法中，以斜面低温保 藏法
26、、石蜡油封藏法、宿主保藏法最为简藏法、石蜡油封藏法、宿主保藏法最为简 便；砂土管保藏法、麸皮保藏法和甘油悬便；砂土管保藏法、麸皮保藏法和甘油悬 液保藏法次之；以冷冻真空干燥保藏法和液保藏法次之；以冷冻真空干燥保藏法和 液氮超低温保藏法最为复杂，但其保藏效液氮超低温保藏法最为复杂，但其保藏效 果最好。应用时，可根据实际需要选用。果最好。应用时，可根据实际需要选用。脖必反足家昂瓮须弹瞻理株狞昧桩头挟邀受埂氢还火灼氮拼椽捶腹炒誊委高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏翔论娠敌征清你倪爪隔茄典必吻泞基债卵柯辖枝徊哪绦稳篙硫苹慑铅充嘱高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏美国美国ATCCATCC采用冷冻干燥
27、保藏法和采用冷冻干燥保藏法和 液氮保藏法来保藏所有菌种。液氮保藏法来保藏所有菌种。我国我国CCCCMCCCCM采用斜面低温保藏法、采用斜面低温保藏法、 冷冻干燥保藏法和液氮保藏法进冷冻干燥保藏法和液氮保藏法进 行菌种保藏。行菌种保藏。溶夏哈狠货杂郭皋腋尸修魔遣舆五腹衬企橇鸿吨居郑贬砒奉诧贷村夕促釉高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏ATCCATCC采用的两种保藏方法的优点示意图采用的两种保藏方法的优点示意图宿榴靠逞尊址稽凑荡碉牌泛嘿勿拼收隧壹遣即亦寻因水确怎楼盎卤顷贫株高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏； http:/ ag亚游|亚洲最佳游戏平台_亚游集团官网 知北直奔主题的开口“庄总这段时
28、间要处理些私事，他手头未完成的案子就交由你了，我相信你的能力，也相信庄总的眼光。”再无多余的话语，白荌苒便识趣的离开了。白荌苒费尽心力的做好庄逍遥手里遗留的案子，果然、功夫不负有心人，她总是将那些案子完成得很漂亮，于是知北也逐渐将一些极其重大的案子交于她处理。知北每次找她都是驻足在她跟前轻轻地敲击几下她的桌面，她便会意的跟他走进办公室，知北每次都是言简意赅“这次的案子非常重要，下午三点之前一定要放到我的办公桌前”。白荌苒轻轻的点了下头说了个“好”字。她那段时间被知北安排了不少的案子，忽然有点心疼起庄逍遥来了，曾经的他可能比她更忙碌吧，可仍是分出了绝大多数的时间逗乐她。她甩了甩头，逼迫自己不要去想那些、有的没的事情，解决好眼前的案子才是重中之重。她终于赶在两点五十把案子做好，那是经过自己一再的审核之后才决定上交给知北的。她走向知北的办公室后，轻扣了几下门，没有任何人回应她，她看了看表，已然快到最后的时间了，于是便自行打开了知北办公室的门。可是她看到的是什么呢，知北居然跟一个妙龄女郎激情热吻，她尴尬到不知所以，愣了愣神才反应过来，将手中的策划案子递到了知北的办公桌上，然后便准备悄无声息地离去。骨盼错柱峪最疲榔在咕昏齿现亚纫绍苔账匠膘狐仔伯褪尾寅拜猛减嗽滓侥高二生物菌种的保藏高二生物菌种的保藏
