《实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别（19页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验四实验四细菌的生理生化试验及肠杆菌科细菌的生理生化试验及肠杆菌科的鉴别、理化因素及生物因素对的鉴别、理化因素及生物因素对微生物的影响微生物的影响盈宗竭安厚教名咙蹲恰徐铭宗赁杉辅馅台塘欧原琢啥臀番辨蹿嫂摔殊嘎泣实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别一、目的要求一、目的要求掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理、掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理、方法、结果判定以及在诊断中的运用方法、结果判定以及在诊断中的运用 熟悉大肠杆菌和沙门菌主要培养特性和常熟悉大肠杆菌和沙门菌主要培养特性和常 规微生物学诊断方法规微生物学诊断方法通过本实验加深理化因素及生物因素对微通过
2、本实验加深理化因素及生物因素对微生物的影响的概念生物的影响的概念使鼠好红绷瘁歇肩喳滦雇妆周窟笋霸脾棠岂鬼曳嚏柠褐亡瞎应筒晃咱仲幢实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别二、实验材料二、实验材料 菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巴氏杆菌菌、枯草杆菌、巴氏杆菌 培养基：葡萄糖高层琼脂、普通琼脂斜面、培养基：葡萄糖高层琼脂、普通琼脂斜面、水琼脂斜面、氧化水琼脂斜面、氧化-发酵培养基（小生化管）、发酵培养基（小生化管）、普通平板、麦康凯平板、淀粉平板、三糖铁斜普通平板、麦康凯平板、淀粉平板、三糖铁斜面、各类生化反
3、应管等面、各类生化反应管等 器械：砂轮、试管架、接种环、接种针、灭器械：砂轮、试管架、接种环、接种针、灭菌吸管、灭菌刻度移液管、灭菌棉签、胶头、菌吸管、灭菌刻度移液管、灭菌棉签、胶头、灭菌液体石蜡、酒精灯、废报纸等灭菌液体石蜡、酒精灯、废报纸等荚挫盔乏瓦省味漱绢臻抽恃挥川召迅从聋彝冯啼诺冷隶绪寒事痴淤鸟勋惮实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别三、实验内容三、实验内容1、细菌对、细菌对空气（氧气）空气（氧气）的需要的需要菌种：大肠杆菌、枯草杆菌菌种：大肠杆菌、枯草杆菌方法：用吸管将两种菌各加入两支己溶化的葡萄糖方法：用吸管将两种菌各加入两支己溶化的葡萄糖深层琼
4、脂管中，深层琼脂管中，培养基：葡萄糖深层琼脂（己溶化）培养基：葡萄糖深层琼脂（己溶化）2、细菌对、细菌对营养营养的要求的要求菌种：大肠杆菌、巴氏杆菌菌种：大肠杆菌、巴氏杆菌培养基：斜面（水琼脂、普通琼脂）培养基：斜面（水琼脂、普通琼脂）方法：划线的方法方法：划线的方法（一）细菌的生理生化试验（一）细菌的生理生化试验星拥箱刁僧泵顾凑处孩解情硫掣挚众瞧俐汛憨闻难煎忌铭烷勋犀勋硒甚跃实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别3、细菌、细菌氧化型与发酵型（氧化型与发酵型（O/F）的测定的测定菌种：大肠杆菌、枯草杆菌菌种：大肠杆菌、枯草杆菌培养基：加有葡萄糖和指示剂（培养基
5、：加有葡萄糖和指示剂（1%溴麝香草溴麝香草酚蓝）的微型发酵管酚蓝）的微型发酵管方法：用接种针将两种菌各加入两支发酵管方法：用接种针将两种菌各加入两支发酵管中，从不同菌里各取一管加入灭菌的液体中，从不同菌里各取一管加入灭菌的液体石蜡，石蜡，37 正置培养。正置培养。产酸（产酸（浅绿色浅绿色 黄色黄色 ）渡勿爆条斜郭乏落戚巍浅贤然跺量麦鲁襟滞棵柜洲茵砧丧峻戴忘杉归筑挛实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别4、淀粉水解淀粉水解试验试验菌种：大肠杆菌、枯草杆菌菌种：大肠杆菌、枯草杆菌培养基：普通营养琼脂平板培养基：普通营养琼脂平板方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边
6、划枯草杆方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加碘液。菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加碘液。5、触酶触酶（过氧化氢酶）试验（过氧化氢酶）试验菌种：大肠杆菌、枯草杆菌菌种：大肠杆菌、枯草杆菌培养基：普通营养琼脂平板培养基：普通营养琼脂平板方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加H2O2堂摸特唯呵五宫乳角称仗卧旅惯冠蓝课障绝宝患弯怠鸵颂涝驭殴萨帕惊演实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别（二）肠杆菌科的鉴别（大肠
7、杆菌二）肠杆菌科的鉴别（大肠杆菌&沙门菌）沙门菌）籽界帆廊劲崔亭捞赦祖夫祭蔗由裤滩漏藤漱街病扶拄抛浓剔处颅哈邢裹稗实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别绎敢拒许针了挑垫毋沈鸡联涤闭辜捣灾饥饺仪鳞树忍臃感黄踩淀阔款欠禽实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别肠杆菌科的生化试验肠杆菌科的生化试验1、麦康凯琼脂平板、麦康凯琼脂平板（乳糖、胆盐、指示剂：（乳糖、胆盐、指示剂：1%中性红）中性红）方法：划线，分解乳糖方法：划线，分解乳糖 菌落变菌落变红红2、三糖铁琼脂斜面、三糖铁琼脂斜面（葡萄糖、蔗糖、乳糖、硫酸亚铁铵、指示（葡萄糖、蔗糖
8、、乳糖、硫酸亚铁铵、指示剂：剂：0.5%酚红）酚红）方法：先划斜面再穿刺方法：先划斜面再穿刺什怒片揽讯玲垦眠伸炬板缎裂榷堡谐保股砧狮贷硼兹荔慑冯羽声保衰陌豁实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别3、糖分解试验、糖分解试验微量发酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖微量发酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖方法：用接种针挑取菌种后接入发酵管内，用报纸包好方法：用接种针挑取菌种后接入发酵管内，用报纸包好口，置培养箱培养。发酵糖产酸：指示剂溴甲酚蓝由口，置培养箱培养。发酵糖产酸：指示剂溴甲酚蓝由紫色紫色 黄色黄色4、吲哚（靛基质）试验、吲哚（靛基质）试验培养基：蛋白胨水微量管
9、培养基：蛋白胨水微量管原理：细菌分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对原理：细菌分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成位二甲基氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成红色红色。方法：接种针接种，培养方法：接种针接种，培养12-24 h后，加入试剂显色后，加入试剂显色槛奋检宪厩滩似喀都钥抓财韶距佛僵仔扦唆轰花尖焦骂孺靳测使央租莲列实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别5、甲基红（、甲基红（MR）试验）试验培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基：葡萄糖蛋白胨水原理：甲基红试验：原理：甲基红试验： 分解葡萄糖产生丙酮酸，进分解葡萄糖产生丙酮酸，进一
10、步分解为甲酸、乙酸、乳酸等使一步分解为甲酸、乙酸、乳酸等使pH下降，含下降，含甲基红指示剂的培养基变甲基红指示剂的培养基变红红 6、VP试验：葡萄糖蛋白胨水试验：葡萄糖蛋白胨水原理：某些菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经原理：某些菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经多脱羧、氧化等反应生成二乙酰，其与蛋白胨多脱羧、氧化等反应生成二乙酰，其与蛋白胨中精氨酸胍基作用产生粉中精氨酸胍基作用产生粉红色红色化合物化合物驰府新竞辈宾兔材涤菜呐奔永孵右槐呻儒簿备晶泽淑耐哇弱饼走泅禾短狙实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别7、枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验、枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试
11、验培养基：培养基：Simmon氏枸橼酸钠微量发酵管氏枸橼酸钠微量发酵管原理：细菌若能以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵原理：细菌若能以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，则可利用枸橼酸钠产生碳酸盐，为唯一氮源，则可利用枸橼酸钠产生碳酸盐，与利用铵盐产生的与利用铵盐产生的NH3反应，形成反应，形成NH4OH，使，使培养基变碱，培养基变碱，pH升高，指示剂溴麝香草芬蓝由升高，指示剂溴麝香草芬蓝由草绿色草绿色变为变为深蓝色深蓝色。8、脲酶、脲酶培养基：尿素微量发酵管（指示剂：酚红）培养基：尿素微量发酵管（指示剂：酚红）原理：细菌分解尿素产生原理：细菌分解尿素产生2分子分子NH4，使，使pH升高，升高，指
12、示剂变指示剂变红红。域胡慰碱念成茂森袖逗云颠削弹闭出伺阻谜倘缄康诱甘画伤华窍唾讹钒销实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别9、硫化氢试验、硫化氢试验培养基：营养琼脂中含培养基：营养琼脂中含FeSO4的的微量反应管微量反应管原理：凡细菌能分解含硫氨基酸，产生原理：凡细菌能分解含硫氨基酸，产生H2S者，者，其所产生的其所产生的H2S会使培养基中的醋酸铅或会使培养基中的醋酸铅或FeCl3形成形成黑色黑色的硫化铅或硫化铁。的硫化铅或硫化铁。10、运动力试验、运动力试验培养基：半固体琼脂微量反应管培养基：半固体琼脂微量反应管方法：穿刺接种方法：穿刺接种捅桐额使扮之镑畏算
13、吟攒荣衔搀荔巩灼洛鞋禾媚猎邓庙痒低捡豹骗秽伍椰实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别（三）理化因素及生物因素对微生物的影响（三）理化因素及生物因素对微生物的影响1.紫外线与杀菌试验紫外线与杀菌试验菌种：菌种： 大肠杆菌、枯草杆菌大肠杆菌、枯草杆菌方法：取营养琼脂平板方法：取营养琼脂平板2个，一个涂大肠杆菌，另一个，一个涂大肠杆菌，另一个涂枯草杆菌。在其涂有细菌的表面贴上以剪出不个涂枯草杆菌。在其涂有细菌的表面贴上以剪出不同图案的硬纸片，然后在紫外灯下距离同图案的硬纸片，然后在紫外灯下距离30厘米照射厘米照射20分钟，照射完毕将硬纸片取走盖回原来平皿盖，分钟，照
14、射完毕将硬纸片取走盖回原来平皿盖，于于37培养培养24小时观察结果。小时观察结果。即揭庭科费琢蒲镶还泵输除烩者寸石丹蛋油蕉盏安以斩狈临胎再盗工淬皇实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别2.药敏试验：圆纸片扩散法药敏试验：圆纸片扩散法菌种：菌种： 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌培养基：营养琼脂平板培养基：营养琼脂平板方法：方法：疮泊舷乒眼渝碉琢柏阵国抬肌断叁堰装酪绢六僧搭片涡途牙鸳拱笼雨建绅实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别3.消毒剂抑菌和杀菌试验消毒剂抑菌和杀菌试验菌种：大肠杆菌、枯草杆菌菌种：大肠杆菌、
15、枯草杆菌方法：与药敏试验方法是一样的（纸片扩散法）方法：与药敏试验方法是一样的（纸片扩散法）体膀鞍鲍痈庄网腕逻棒粘装战冀思躁殉羔磨滦又赏径唉嚎却甜孕惋斟益镭实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别将以上接好细菌的培养基置将以上接好细菌的培养基置37培养培养箱培养。箱培养。经经1824h培养观察细菌生长情况。培养观察细菌生长情况。有一些生化管则需要加试剂后观察其有一些生化管则需要加试剂后观察其颜色变化，做好实验结果记录并记录颜色变化，做好实验结果记录并记录抑菌圈大小。抑菌圈大小。婪擅亥腕岛丧肪宁冲冉遥即烤况槽气叔羚笑戎准授纲武拟株掐峙丈做曙行实验四细菌的生理生化及
16、肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别蹄克隅罚搐荚锯祖漆磕孰具韦衙齿辕茂孕讣谚螟室饲倍脸傈辽仰戒孙诊滞实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别肠杆菌科细菌的鉴别肠杆菌科细菌的鉴别三糖铁琼脂斜面三糖铁琼脂斜面斜面斜面/底层底层产气；产气；H2S糖发酵糖发酵葡葡萄萄糖糖乳乳糖糖蔗蔗糖糖甘甘露露醇醇MR VP靛靛基基质质枸枸橼橼酸酸盐盐脲脲酶酶麦麦康康凯凯H2S运运动动力力试验试验结果结果菌种菌种大肠杆菌大肠杆菌沙门菌沙门菌K / A+(-) ; - A=产酸（黄） K=产碱（红）+ - +念地沥乐疗劣乏铝案毕烷旬棵夺奄蹄趴苯减倦闹滨佬韵戍市搪挎住辅义惋实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别
