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1、课题目标课题目标说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。课题重点与难点课题重点与难点课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。（一）旁栏思考题（一）旁栏思考题1.你能说出各种营养物质的作用吗？同专题你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微中微生物培养基的配方相比，生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些培养基的配方有哪些明显的
2、不同？明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必供大量无机营养，无机盐混合物包括植物
3、生长必须的大量元素和微量元素两大类。须的大量元素和微量元素两大类。2.你打算做几组重复？你打算设置对照实验你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？吗？答：教师可以安排学生分组，做不同的材料答：教师可以安排学生分组，做不同的材料或配方，最后分别汇报成果。但每种材料或或配方，最后分别汇报成果。但每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。以说明培养基制作合格，没有被杂菌
4、污染。（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析接种接种34 d后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。请学生适时统计污染率，分析表现出被污染的现象。请学生适时统计污染率，分析接种操作是否符合无菌要求。接种操作是否符合无菌要求。（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间。织进
5、一步分化成根和芽的比例和时间。（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录做好统计和对照，填好结果记录表，培养严谨的科做好统计和对照，填好结果记录表，培养严谨的科学态度。从实验的第一步开始就要求学生做好实验学态度。从实验的第一步开始就要求学生做好实验记录，可以让学生分组配制不同培养基，如诱导愈记录，可以让学生分组配制不同培养基，如诱导愈伤或直接分化丛芽的培养基，然后做不同配方的比伤或直接分化丛芽的培养基，然后做不同配方的比较。较。（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培养基，
6、又不能伤及根系。一般使用无土栽培的培养基，又不能伤及根系。一般使用无土栽培的办法。培养基质要提前消毒，可以向培养基质的办法。培养基质要提前消毒，可以向培养基质喷洒质量分数为喷洒质量分数为5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖覆盖12 h。掀开塑料薄膜后。掀开塑料薄膜后24 h才能移栽。新移才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡几天，等壮苗后再定植栽的组培苗要在温室过渡几天，等壮苗后再定植大田或进行盆栽。学生可以在课后统计自己移栽大田或进行盆栽。学生可以在课后统计自己移栽的成活率，看看移栽是否合格。的成活率，看看移栽是否合格。答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗答：植物组织
7、培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。严格的无菌操作。答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。化和再
8、分化。 实实验验注注意意事事项项 无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键植物组织培养不同于扦插、分根、叶插等常规无性繁殖。植物组织培养不同于扦插、分根、叶插等常规无性繁殖。由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，所以对培养条件的要求较高，对无菌操作的要求非常严所以对培养条件的要求较高，对无菌操作的要求非常严格。如果不小心引起污染，将可能造成培养工作的前功格。如果不小心引起污染，将可能造成培养工作的前功尽弃。尽弃。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（
9、外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。待。妥善处理被污染的培养物妥善处理被污染的培养物 将所有被污染的培养将所有被污染的培养瓶统一放在高压蒸汽锅内进行高压蒸汽灭菌，然后再瓶统一放在高压蒸汽锅内进行高压蒸汽灭菌，然后再打开培养瓶，进行清洗。打开培养瓶，进行清洗。 有毒药品的用后处理有毒药品的用后处理 一般应收集后统一一般应收集后统一交给
10、有关专业部门处理。交给有关专业部门处理。 植物组织培养技术的发展植物组织培养技术的发展大自然中存在着许多有趣的植物无性生殖现象。例如，马铃大自然中存在着许多有趣的植物无性生殖现象。例如，马铃薯的块茎能够发芽生根，秋海棠的叶片能够长成新植株。这薯的块茎能够发芽生根，秋海棠的叶片能够长成新植株。这些现象促发科学家去思考、解释。些现象促发科学家去思考、解释。1902年，有一位德国的植年，有一位德国的植物学家大胆地预言：物学家大胆地预言：“植物的体细胞在一定条件下，可以如植物的体细胞在一定条件下，可以如同受精卵一样，具有潜在的发育成植株的能力。同受精卵一样，具有潜在的发育成植株的能力。”1958年，美
11、国科学家斯图尔德（年，美国科学家斯图尔德（F.C.Steward）将胡萝卜韧）将胡萝卜韧皮部的一些细胞进行培养，由于细胞分化而最终发育成完整皮部的一些细胞进行培养，由于细胞分化而最终发育成完整的新植株。这个实验结果在生物学界引起了很大的震动，它的新植株。这个实验结果在生物学界引起了很大的震动，它表明已经高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的能表明已经高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的能力。已经分化的细胞所具有的这种潜在发育能力称作细胞全力。已经分化的细胞所具有的这种潜在发育能力称作细胞全能性。能性。既然胡萝卜的单个细胞能发育为完整植株，小块的植物组织既然胡萝卜的单个细胞能发育为完整植株，小块的植物组织就更不应该有什么问题。此后很多年，科学家和技术人员将就更不应该有什么问题。此后很多年，科学家和技术人员将许多植物进行了组织培养，并获得了成功。如今，植物组织许多植物进行了组织培养，并获得了成功。如今，植物组织培养已不再神秘莫测，而发展成为常规技术。培养已不再神秘莫测，而发展成为常规技术。
