《实验三蛋白质的沉淀反应》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验三蛋白质的沉淀反应（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验三、蛋白质的沉淀反应11、实验目的熟悉蛋白质的沉淀反应进一步掌握蛋白质的性质22、实验难点与重点2.1蛋白质沉淀的方法有哪些2.2蛋白质沉淀反应的原理33、实验原理蛋白质胶体溶液稳定的因素蛋白质胶体溶液稳定的因素: :水化膜、表面电荷水化膜、表面电荷加入适当试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水加入适当试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层，或者与某些试剂结合成不解的盐后，蛋白质的化层，或者与某些试剂结合成不解的盐后，蛋白质的胶体溶液就不稳定，并将产生沉淀。胶体溶液就不稳定，并将产生沉淀。4改变蛋白质表面的水化层及电荷的主要途径有：改变溶液的离子强度改变溶液的pH改变溶液的介电常数改变
2、溶液的温度蛋白质沉淀可逆与不可逆的区别5能使蛋白质沉淀的试剂有：能使蛋白质沉淀的试剂有：高浓度中性盐高浓度中性盐 （NH4)2SO4NH4)2SO4、Na2SO4Na2SO4、NaClNaCl（中和蛋白质的电荷，可逆）（中和蛋白质的电荷，可逆） 这种加入盐使蛋白质沉淀析出的现象称为这种加入盐使蛋白质沉淀析出的现象称为盐析盐析，用于蛋白质分，用于蛋白质分离制备离制备有机溶剂有机溶剂 丙酮、乙醇丙酮、乙醇 ( (破坏蛋白质水膜，用于在提取破坏蛋白质水膜，用于在提取DNADNA等时去除蛋等时去除蛋白质，冰浴条件沉淀蛋白质短时间内是可逆的，否则不可逆白质，冰浴条件沉淀蛋白质短时间内是可逆的，否则不可逆
3、) )重金属盐重金属盐 Hg2+Hg2+、Ag+Ag+、Pb+ Pb+ （与蛋白质中带负电荷时，形成不易溶解的盐（与蛋白质中带负电荷时，形成不易溶解的盐, ,或改变蛋白质的空间结构）或改变蛋白质的空间结构）生物碱试剂生物碱试剂沉淀：沉淀：三氯乙酸三氯乙酸，苦味酸，钨酸等（必须在溶液，苦味酸，钨酸等（必须在溶液pHpH大大于于pIpI时，蛋白质带正电荷，可以与生物碱试剂结合）时，蛋白质带正电荷，可以与生物碱试剂结合）加热加热变性沉淀：豆腐变性沉淀：豆腐等电点等电点沉淀：沉淀：GluGlu的生产的生产64、实验步骤、实验步骤蛋白质溶液蛋白质溶液1ml1mlNaClNaCl晶体少许，溶解，晶体少许，
4、溶解，95%95%乙醇乙醇2ml2ml加入加入混匀混匀观察沉淀产生观察沉淀产生加加水水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？需要先加蛋白质溶液，再加饱和需要先加蛋白质溶液，再加饱和硫酸铵，否则清蛋白与球蛋硫酸铵，否则清蛋白与球蛋白会同时析出白会同时析出除去球蛋白除去球蛋白加多变成盐析，作加多变成盐析，作用中和电荷，用中和电荷，加速沉淀加速沉淀蛋白质溶液蛋白质溶液5 ml5 ml加入加入5 ml 5 ml 饱和硫酸铵溶液饱和硫酸铵溶液加入加入微微摇动，静置数分钟微微摇动，静置数分钟观察沉淀产生为球蛋白观察沉淀产生为球蛋白过过滤滤滤液中加硫酸铵粉末滤液中加硫酸铵粉末析出清蛋白，加水析出清蛋白，加水沉淀是否溶
5、解？沉淀是否溶解？操作注意点：操作注意点：如加入硫酸铵如加入硫酸铵粉沫过量，会粉沫过量，会有硫酸铵晶体有硫酸铵晶体出现，要与蛋出现，要与蛋白质沉淀区分白质沉淀区分开开来。来。7蛋白质溶液蛋白质溶液2 ml2 ml加入加入1%1%醋酸醋酸4-54-5滴，滴，加入加入5%5%鞣酸数滴鞣酸数滴加入加入混匀混匀沉淀？沉淀？加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？蛋白质溶液蛋白质溶液2 ml2 ml加入加入1%1%醋酸醋酸4-54-5滴，滴，加入饱和苦味酸数滴加入饱和苦味酸数滴加入加入混匀混匀沉淀？沉淀？加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？pH大于大于pIpH小于小于pI时带时带正电荷正电荷蛋白质溶液蛋白质溶液2 ml2 ml加入加入1%1%醋酸铅，至有沉淀出现醋酸铅，至有沉淀出现加入加入加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？蛋白质溶液蛋白质溶液2 ml2 ml加入加入1%1%硫酸酮，至有沉淀出现硫酸酮，至有沉淀出现加入加入加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？85、原始数据96、问题6.1、蛋白质发生沉淀的主要原因是什么？何谓可逆沉淀和不可逆沉淀？蛋白质变性一定沉淀？沉淀蛋白质一定是变性的吗？为什么？6.2、蛋白质的沉淀反应有何用途？10
