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1、产品经理 吴 勇HBVHBV分型和耐药突变基因检测分型和耐药突变基因检测产品经理 吴 勇一、基因芯片原理及特点一、基因芯片原理及特点二、二、HBVHBV分型与耐药突变基因检测产品简介分型与耐药突变基因检测产品简介三、亚能三、亚能HBVHBV分型与耐药突变基因检测的运用及临床意义分型与耐药突变基因检测的运用及临床意义四、亚能四、亚能HBVHBV分型与耐药突变检测产品优势分型与耐药突变检测产品优势一、基因芯片原理及特点一、基因芯片原理及特点基因芯片基因芯片(gene chip)(gene chip)：是多种特定的寡核苷酸序列为探针，固定于支持物表面上而成的二维DNA阵列。基本原理：基本原理：利用碱
2、基互补配对原则，通过目的DNA与探针特异结合来判断目的DNA的序列信息。 PCR+反向点杂交（RDB）基因芯片原理基因芯片原理基因芯片技术特点基因芯片技术特点u 高灵敏度高灵敏度PCRPCRu 高特异性高特异性-核酸分子杂交核酸分子杂交u 高通量高通量-膜芯片上排列多种探针膜芯片上排列多种探针u 结果易判读结果易判读-化学显色化学显色 二、二、HBVHBV分型与耐药突变基因检测产品简介分型与耐药突变基因检测产品简介乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒 （PCR-PCR-反向点杂交法）反向点杂交法）注册号：国食药监械（准）字注册号：国食药监械（准）字2
3、0112011第第34011773401177号号专利号：专利号：国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂 PCR PCR扩增：扩增：在S基因和P基因重叠区段设计PCR引物，PCR扩增片段既包含耐药突变位点又能进行基因分型。P P基因：耐药突变检测基因：耐药突变检测编码DNA合成酶（包含逆转录酶rt），抗病毒药物作用靶区，耐药基因突变热点区S S基因：分型检测基因：分型检测技术原理技术原理采集样本采集样本杂交杂交显色显色结果判读结果判读0.5小时小时3小小时1.5小时小时提取提取DNAPCR扩增增操作流程操作流程全程仅需全程仅需6 6
4、小时小时仪器名称仪器名称参数及要求参数及要求台式高速离心机 转速13000rpm，转子规格：1.5mL冰箱双温区：4/-18；双门 移液器1-10L,10-100L, 100-1000L干式恒温器孔径：1.5 mL；控温范围：室温+5-100PCRPCR仪仪0.2 mL，48或96孔分子杂交仪分子杂交仪控温范围：环境温度+5-100，可调；精度：0.1检测仪器检测仪器试剂盒性能指标试剂盒性能指标准确性准确性：检测105例临床慢性HBV感染阳性样本，结果与测序比较显示为相同的 基因型和耐药突变类型，准确率为100%。特异性特异性：检测50例临床HBV阴性样本结果全部为阴性；检测非HBV感染性病原
5、体DNA，包括C型肝炎病毒（HCV）和HIV，结果均为阴性。灵敏度灵敏度：能检测血清HBV的最低检出限为1.0103IU/mL。精密度精密度：检测2.0103IU/mL的血清HBV，批内和批间的一致性好。稳定性稳定性：产品有效期为6 6个月个月，在有效期内产品性能稳定。本产品检测的样本为本产品检测的样本为血清或血浆血清或血浆；要求待检样本的要求待检样本的HBV DNAHBV DNA载量载量1.0101.0103 3copies/mLcopies/mL。样本要求样本要求样本保存样本保存为了避免为了避免DNADNA降解，制备好的血清或血浆，避免长时间室温放置；降解，制备好的血清或血浆，避免长时间室
6、温放置；2 28 8保存不超过保存不超过4848小时；小时；-18-18以下保存不超过半年，避免反复冻融。以下保存不超过半年，避免反复冻融。注意事项注意事项三、三、亚能亚能HBVHBV分型与耐药突变基因检测分型与耐药突变基因检测的运用及临床意义的运用及临床意义亚能亚能HBVHBV产品应用产品应用抗病毒治疗前、治疗中抗病毒治疗前、治疗中HBVHBV的基因分型和耐药突变基因检测的基因分型和耐药突变基因检测u 区分我国常见的区分我国常见的HBV-BHBV-B、C C、D D基因型基因型u 涵盖我国涵盖我国4 4种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、阿德福韦酯、种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、阿德福韦酯
7、、 替比夫定、恩替卡韦）替比夫定、恩替卡韦）7 7个耐药位点的个耐药位点的1616种突变：种突变：rtL180MrtL180M、rtM204V/rtM204V/I I、rtA181V/TrtA181V/T、rtN236TrtN236T、rtM250rtM250I I/L/V/L/V、rtS202G/rtS202G/I I、rtT184rtT184I I/S/A/F/L/S/A/F/L。HBVHBV基因型检测临床意义基因型检测临床意义u HBeAg HBeAg阳性患者中，阳性患者中，B B基因型对基因型对IFN-IFN-治疗的应答率高于治疗的应答率高于C C基因基因 型，型，A A基因型高于基因
8、型高于D D基因型。基因型。u 与与C C基因型感染者相比，基因型感染者相比，B B基因型感染者较早出现基因型感染者较早出现HBeAgHBeAg血清学血清学 转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌；转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌；预测干扰素应答和疾病进展情况预测干扰素应答和疾病进展情况慢性乙型肝炎防治指南（慢性乙型肝炎防治指南（20102010年）年）HBVHBV耐药检测临床意义耐药检测临床意义u抗病毒治疗前，预存耐药检测抗病毒治疗前，预存耐药检测 协助临床选择合理抗病毒药物，实现个体化抗病毒治疗、提高抗病毒疗效、降低耐药发生率。u 抗病毒治疗中，全程耐药监测抗病毒
9、治疗中，全程耐药监测 全程监测耐药，利于早期挽救治疗，为调整治疗方案提供理论支持。全程监测耐药，为调整治疗方案提供理论依据全程监测耐药，为调整治疗方案提供理论依据四、亚能四、亚能HBV分型耐药突变分型耐药突变检测产品优势检测产品优势全基因序列测定全基因序列测定法法限制性片段长度多态性限制性片段长度多态性分析法（分析法（RFLPRFLP）实时荧光实时荧光PCRPCR法法亚能亚能HBV HBV 基因芯片基因芯片灵敏灵敏度度灵敏度低，最低检测限为20%；灵敏，最低检测限为5%；灵敏，最低检测限为5%；灵敏，最低检测限为5%；检测检测位点位点所有突变位点已知耐药位点仅能检测rt204位点我国4种核苷类
10、药物7个耐药位点的16种突变评价评价1、测序试剂大多未获得SFDA批准；2、操作繁琐、技术难度大、仪器要求高、不易在临床开展。1、需针对每一个待测突变位点，分别设计特异性内切酶反应体系；2、一些突变可能生成新的酶切位点，或破坏原有酶切位点，必须谨慎看待检测结果。结果仅提示拉米夫定耐药。1、是首个获得SFDA批准的，同时进行HBV分型、耐药检测的试剂盒；2、准确性好、6小时出结果、结果肉眼可见。仪器要求低，操作便捷、易于临床使用。HBVHBV耐药检测产品比较耐药检测产品比较亚能亚能HBVHBV分型与耐药突变检测优势分型与耐药突变检测优势u 高高 效效：SFDA批准，国内首个HBV分型与耐药突变基
11、因同时检测的试剂盒；u 检测位点广检测位点广：能检测我国 4种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、 阿德福韦酯、替比夫定、恩替卡韦）7个耐药位点的16种突变；u 灵敏度高灵敏度高： 1.0103IU/mL，最低检测限为5%；u 快快 速速：6小时即可完成检测；u 易易 用用：操作简易、结果可直接读取，设备要求低，易于临床使用。 国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂；国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂；6h6h全面呈现：全面呈现：4 4种核苷（酸）相关的种核苷（酸）相关的7 7个耐药位点个耐药位点1616种突变，区分种突变，区分HBV- BHBV- B、C C、D D三种基因型；三种基因型；全程监测耐药，实现治疗个体化：全程监测耐药，实现治疗个体化： 预存耐药检测预存耐药检测 个体化用药、提高临床疗效；个体化用药、提高临床疗效； 治疗第治疗第1212周、周、2424周耐药检测周耐药检测 评估抗病毒早期疗效；评估抗病毒早期疗效； 治疗效果不佳时，耐药检测治疗效果不佳时，耐药检测 及时调整治疗方案、节约成本。及时调整治疗方案、节约成本。产品总结产品总结
