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1、提RNA,可是电泳后什么条带都没有，用的是REDzol,是因为细胞太 少了还是别的什么原因，在加了氯仿后没有出现3层，只有沉淀和上 清，是不是因为加氯仿到离心隔的时间太久了参考见解：1、样品量太小；2、操作时没有严格按照提RNA的要求做，一般需要带手套，最好带 上口罩，所有塑料用品需要用DEPC处理并高压，要在超净台上操作， 尽量不让外源的RNA酶降解RNA。3、RNA电泳的电泳液和胶必须现配现用，并且要用DEPC处理，电 泳槽、制胶板先用蒸馏水洗涤然后用75的酒精处理，还有，要单 独一个槽子跑，不要和其他胶一起跑。跑胶时间控制在10分钟左右。4、在加了氯仿后没有出现3层，只有沉淀和上清，可能
2、是加的氯仿 量不合适，一般是按氯仿/mITrizol加氯仿的。从加氯仿到离心隔的 时间对这个应该没有影响。5、在提完 RNA后可以测0D值，如果0D值在之间，说明提的RNA 比较纯。RNA提取可不可以不用DEPC处理，多次灭菌（而不是长时间灭菌） 也可以比较有效地灭活RNAse，这种方法确实可行吗 参考见解：DEPC主要目的是防止RNA酶,其实还有很多其他的方法处 理器皿的，如氯仿冲洗,NaOH处理,高温烘烤等另外两次灭菌也可以 代替DEPC处理.提RNA的关键在于:防止内源性或外源性RNase降解 RNA对付外源性RNase有两种办法：能烤者烤，能泡者泡。比起 其他的核酸实验来说，就多这么一
3、步。其二、RNase分子内部存在二 硫键，一般条件变性后很快即可复性，所以极为稳定；而且其作用条 件“简单、快捷”与绝大多数DNase不同，不需要二价阳离子即 可迅速发挥酶切作用。所以，要想长期保存 RNA标本，DEPC处理溶 液、Tip头等都是必不可少的。RNase 一般高压不能灭活，如果不用 DEPC的话，快速提取，快速使用，不能贮藏。3 个关于乙醇单词:etha nol ； alcohol； mercaptoetha nol，他们的 主要区别是什么，可以互相代替吗参考见解：ethanol是乙醇的专业名词，是用在医学，工业等方面， 主要是指工业酒精。alcohol也是乙醇，酒精的意思，但是
4、主要是用 在饮食行业的名词。mercaptoethanol是巯基乙醇，不同于前两种, 是另外一种物质，是一种还原剂。RNA提取中DNA是怎么去掉的在哪一步呢 参考见解：在加入氯仿离心吸取上清的时候，注意不要吸到中间层。 一般都要用DNase处理，即使吸不到中间层，也可能有DNA污染。 组织已经低温保存了一年多了，用来提RNA可以吗参考见解：液氮中保存应该可以，但如果是在-70C低温冰箱中则可 能降解，建议在液氮中保存时尽量将组织块切小，最好直径在1CM 之内，有利于保存并方便下一步RNA提取操作。当然如果条件允许, 可以将组织块放入RNAIater后低温保存，只要普通冰箱即可，方便 且效果很好
5、。提取血细胞的RNA,但血凝很快，应该注意什么问题是不是要加EDTA用什么方法会更好参考见解：全血提DNA或RNA要用抗凝血，可以用医院里采血管，里面已经 加了抗凝剂，或是自己配EDTA、ACD等来抗凝。EDTA 抗凝用的溶液， 与血液之间体积比一般是1:10 。ACD配方：单结晶水柠檬酸（分子量），柠檬酸三钠（分子量）， 单结晶水D-葡萄糖（分子量），顺次溶于蒸馏水中定容至1000ml， 过滤除菌。分装后一20C保存。抗凝血要用淋巴细胞分离液分离， 得到单核细胞后，再加入trizol等提取RNA,步骤可按试剂盒操作 进行。如果不分离单核细胞，血里面的红细胞对提取有影响，把红细 胞破坏掉也可以
6、。采用淋巴细胞分离液分离外周血中的有核细胞，经细胞裂解液处 理，上清提取RNA,沉淀提取DNA,用分离液分离所得红细胞沉淀制 备血红蛋白溶液。本法能从少量外周血中同时分离RNA、DNA及血红 蛋白，高效易操作，值得推广。怎样能更有效的降低材料的降解参考见解：1、新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么 降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中 裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。2、新鲜组织：某些富含内源核酸酶的样品（如肝脏，胸腺等），即使 使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液 氮条件下将组织研碎，并且匀浆时使用更多裂解液。3、冷
7、冻样品：样品取材后应立即置于液氮中速冻，然后移至-70C 冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于- 70C冰箱中。冷 冻样品，即使是冷冻细胞，如果不在液氮条件下研磨碎，而直接加入 裂解液中匀浆，RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分 接触前决不能出现融化，所以研磨用具必须预冷，在碾磨过程中要及 时补充液氮。样品研碎后，在液氮刚刚挥发完时，将样品迅速转移到 含裂解液的容器中，立即混匀匀浆。4、外源RNA酶的污染：试剂，器械及实验环境中的RNA酶进入实验 系统。5、内源RNA酶的污染：抑制剂失效或者用量不够，实验样品过多； 匀浆时温度过高。OD260/OD280 比值偏低 参考见解
8、：1、蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量， 确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的 离心力和时间要足够。如果所得RNA的OD26O/OD28O比值偏低，则用 氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。2、苯酚残留：确保不要吸入中间层及有机相。加入氯仿后首先要充 分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。3、多糖或多酚的残留：一些特殊的组织和植物中，多糖、多酚含量 较多，这些残留也会导致0D260/0D280比值偏低。因此，从这类材料 中提取RNA时，需要注意多糖、多酚杂质的去除。4、设备限制：测定0D260及0D280数值时，要使OD260读数在之间。 此范围线性最好。用水稀释样品：测OD值时，对照及样品稀释液请 使用10mM Tris，。用水作为稀释液将导致比值偏低。RNA提取得率低参考见解：1、该组织或者细胞中RNA含量偏低：不同细胞和组织中RNA的丰度 不同，如肝脏，胰腺，心脏等是高丰度组织（总RNA含量2-4ug/mg）, 脑,胚胎，肾脏，肺，胸腺，卵巢等是中丰度组织（总RNA含量Rg/mg）, 膀胱，骨，脂肪等是低丰度组织（总RNA含量Rg/mg）。
