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1、超高效液相色谱法测定保健食品中角鲨烯摘要 目的 研究采用超高效液相色谱法测定保健食品中角鲨烯的含量。方法 样品用 95 % 乙腈水溶液超声波提取法提取，采用ODS-C18(2.1 mm*100 mm, 1.7 um)色谱柱分析,95%乙腈 水溶液为流动相,0.25 mL/min流速对角鲨烯洗脱，用DAD检测器在210 nm处分析。结果 采 用超高效液相色谱法比常规高效液相色谱法省时20min，测定角鲨烯的回收率和相对标准偏 差分别在94.6 %103.4 %, 1.3%2.5%之间；方法最低检出浓度0.2 mg/kg，比常规高效液 相色谱法降低25倍。结论 该方法快速，适用于保健食品中角鲨烯含
2、量的测定。角鲨烯是一种脂质不皂化物，最初是从鲨鱼的肝油中发现的,1914 年被命名为 Squalene, 其化学名称为 2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯,属开链三萜,又称鱼肝油 萜,具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗 疲劳、抗肿瘤等多种生理功能,是一种无毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物质1， 2。角鲨烯已经被广泛应用于保健食品中，但是至今为止，我国尚未出台关于角鲨烯测定的 国家标准或者规范性文件。近年来，已经有一些学者建立了分析角鲨烯的方法，如气相色谱 法(GC) 35,高效液相色谱法(H
3、PLC) 6, 7,气相色谱质谱联用法(GC-MS) 811等， 但是这些方法大都分析时间较长；现采用超高效液相色谱法(UPLC)法测定保健食品中角 鲨烯的含量，对测定条件进行优化，比常规HPLC法省时20 min,且灵敏度高，准确性好， 是一种简便、快速、准确、环保的检测方法。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 仪器与设备 UPLC 色谱系统(Waters) ODS-C18 (2.1 mmX100 mm,1.7 um)； FB11005 超声仪(Fisherbrand)； K-S22型电热恒温水浴锅(上海精密实验设备有限公司)BT 224S电 子天平(sartorius)。1.1.2标准品
4、和试剂角鲨烯对照品(Sigma-Aldrich),精密称取角鲨烯标准品，用乙腈配置成1.0 mg/mL 的标准储备液；甲醇(色谱纯)，乙腈 (色谱纯)，超纯水 (Millipore)。1.1.3 样品 角鲨烯胶丸(某企业生产)。1.2 方法1.2.1样品的预处理 准确称取角鲨烯胶丸样品0.200 g,置于2.0 mL容量瓶中，加入2.0 mL 95 %乙腈水溶液，超声提取20 min,冷却后用95 %乙腈水溶液准确定容，0.45um有机相滤 膜过滤，待测定。1.2.2色谱条件 检测波长为210 nm,进样体积10 ,流动相：95 %乙腈水溶液；流速0.25 mL/min。按上述条件进行UPLC
5、分析，以保留时间定性，峰面积定量。2 结果与分析2.1 提取方法和具体提取条件的确定 研究比较了超声提取法和摇床振荡提取法，结果表明 在其他条件相同的情况下，摇床振荡提取法提取时间W2 h的情况下，提取效率低于超声提 取20 min。因此选定分析效率更高的超声提取法。研究了正己烷、乙酸乙酯和95 %乙腈水溶液3种提取溶剂，发现3种提取溶剂提取效率相 当，但选定正己烷和乙酸乙酯提取时，需要置换溶剂才能上仪器检测，耗时耗力，最终本文 确定95 %乙腈水溶液的流动相作为提取溶剂。当提取时间达到20 min时，提取效率稳定， 并最终确定超声提取 20 min。2.2仪器分析法 首先比较了 UPLC与H
6、PLC检测谱图，见图1和图2从谱图1和图2可以看出，使用UPLC使每次分析时间节省了 20 min,分析效率大大提高。 同时通过实验确定最佳洗脱流速和最佳流动相比例为0.25 mL/min的95 %乙腈水溶液。2.3标准曲线和线性范围1.0 mg/mL的角鲨烯标准储备溶液配制为0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0和10|ig/mL的标准系列溶液，进样10uL，浓度和峰面积有良好的线性关系，线性方程分 别为 y =59932x +162.88 ， R2 为 0.9999。2.4准确度和精密度试验 在角鲨烯胶丸样品中分别添加0.5、1.0和2.0的1.0 mg/mL的 角鲨烯标
7、准溶液(换算为0.2 g样品的添加浓度分别为2.5，5.0和10 mg/kg),按照1.2.1步 骤测定回收率，平行测定6次。3个添加浓度的平均回收率在94.6 %103.4 %之间，相对标 准偏差RSD (%)在 1.3%2.5%之间。结果见表1。2.5最低检测限实验测得角鲨烯最低检测质量为0.2 ng，取样0.2 g，定容至2.0 mL，10 的进样量下，其最低检测浓度为0.2 mg/kg，与普通液相色谱法的比较见表2。该研究方法前处理简单，超声提取只需要 20 min， UPLC 测定角鲨烯比 HPLC 出峰时间缩短 了 20 min，最低检出浓度降低了 25倍，方法的准确度和精密度均较高，适用于保健食品中 角鲨烯含量的测定。
