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1、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。植物组织中淀粉含量的测定 一、原理 淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物,利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一）实验材料任何植物材料。 （二）试剂 浓硫酸(比重.）。 9.2l/lhclo4。 2蒽酮试剂,同实验24。 (三）仪器设备 电子天平，容量瓶。00ml4个、50l个，漏斗,小试管若干支,电炉，刻度吸管0.5ml1支、2.0m3支、ml4支，分光光度计,记号笔。 三、实验步骤 .标准曲线制作 取小试管1支从0编号，按表4-3加
2、入溶液和蒸馏水。 以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。 表24-3各试管加入标准液和蒸馏水量 管号01345 780淀粉标准液（) 00.40.81.1620蒸馏水(m） 2.01.62040 淀粉含量（mg） 04080X020.样品提取称取5010mg粉碎过00目筛的烘干样品，置于5m刻度试管中，加入67ml0%乙醇，在0水浴中提取30min，取出离心（300rpm）5min，收集上清液。重复提取两次（各10mi)同样离心,收集三次上清液合并于烧杯,置于85恒温水浴，使乙醇蒸发至23m,转移至5ml容量瓶,以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。 向沉淀中加蒸馏水3
3、ml,搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15in。冷却后,加入2m冷的.2mol/l高氯酸，不时搅拌,提取5mn后加蒸馏水至10ml，混匀,离心10mi，上清液倾入5l容量瓶。再向沉淀中加入2ml4.6mol/高氯酸，搅拌提取15mi后加水至1l,混匀后离心1mi,收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀1次，离心，合并离心液于50m容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。 3.测定取待测样品提取液1.0m于试管中，再加蒽酮试剂5m,快速摇匀,然后在沸水浴中煮10min,取出冷却，在620m波长下,用空白调零测定光密度，从标准曲线查出淀粉含量（mg）。 四、结果计算:含量(%)0c*vv*100*w 式中。c从标准曲线
4、查得淀粉量，m。v样品提取液总体积,m。v1显色时取样品液量,ml。样品重,g。 0.由葡萄糖换算为淀粉的系数。 碘-淀粉比色法 一、原理 对于淀粉含量较少的植株样品,也可采用碘淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中,当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料任何植物材料。 (二）试剂 80%硝酸钙溶液。 2.0.5%碘液。称5.00g结晶碘和10.0g碘化钾，放入研钵混合干研,然后加10ml蒸馏水研至全部碘溶解,将溶液全部转入1000m容量瓶定容后，贮于磨口试
5、剂瓶。 3.5%含碘硝酸钙溶液。取10ml的硝酸钙溶液，加入0m水再加入l0.的碘液混匀，现用现配。 4.标准淀粉溶液。称取纯淀粉5mg于研钵中,加ml8硝酸钙溶液,研细并转移到10ml的三角瓶中,用158%的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸5min,冷却后全部转入5ml容量瓶中并定容。此液为1mml的淀粉标准液。 .0.1mllnoh。 6.01ml/lhcl。 （三）仪器设备 分析天平，研钵,容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗,电炉，离心机，离心管,试剂瓶。 三、实验步骤 1.称取13g叶片，剪碎放入研钵，加5ml80的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入100ml
6、的三角瓶中，用10ml0的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中,瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸35n（叶片含淀粉少的3i,含淀粉多的5min)，使样品中淀粉转变为胶体溶液。 2.给三角瓶中加2m蒸馏水,混合液转入离心管中离心（202X300rm)23min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入100l容量瓶(淀粉含量少时，可移入50l容量瓶),三角瓶及离心沉淀物用5ml热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中(共洗23次)定容，即为淀粉提取液。 3取510m淀粉待测液，加入到盛有2m0.%碘液的离心管中,混匀静置1min后离心(3000rm）5min，弃上清液。沉淀用5%的含碘硝酸钙溶液冲洗两次,向
7、冲洗后的沉淀中加入100.oll的noh混匀,将离心管浸入沸水内mi，使沉淀溶解。将溶液转入5ml容量瓶中，加入3ml0.%碘液,用30ml左右的水冲洗并入容量瓶，加入2lol/的盐酸,用水定容并显色，在90nm波长处测定光密度。 4.绘制标准曲线取标准淀粉溶液(1mg/ml）、05、1、0、30、4.0、5.0l于6个离心管中，用0%硝酸钙溶液将各管的体积补足至5ml，再向各管加入2ml0%碘液，混匀静置15mi后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在590m波长下测定光密度。此系列溶液的淀粉含量分别为0、.5、1.0、2.0、.0、4.0、0mg,然后以光密度为横坐标，以淀粉含量为纵坐标绘
8、制标准曲线。 四、结果计算:含量(%)=10*c*v/v1*10w式中:c从标准曲线查得淀粉量,g。v样品提取液总体积,ml。v显色时取样品液量，l。w样品重(g）。 ii旋光法（谷物淀粉含量的测定） 一、原理。酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮,可使淀粉轻度水解。同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合,这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中,成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(),旋光度的大小与淀粉的浓度成正比,据此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的h值必须保持2.30,密度须为1.0,加时间的长短也要控制在一定范围。因为只有
9、在这些条件下,各种不同来源的淀粉溶液的比旋度才都是03，恒定不变。样品中其他旋光性物质（如糖分）须预先除去。 二、材料、仪器设备及试剂: (一）材料:面粉或其他风干样品 (二）仪器设备: 1.植物样品粉碎机; 2.离心机; 3.分析天平； 4.粗天平； 5旋光仪及附件； .三角瓶; 7.分样筛(10目）; 8布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵; 9.离心管； 1.小电炉。 (三)试剂: 三、实验步骤: 1.样品准备：(1)称取样品:将样品风干、研磨、通过00目筛，精确称取约2.5g样品细粉(要求含淀粉约g，请参考附注估计),置于离心管内。(2）脱脂:加乙醚数ml到离心管内，用细玻棒充分搅拌，然后离心。倾
10、出上清液并收集以备回收乙醚。重复脱脂数次,以去除大部分油脂、色素等(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难）。大多数谷物样品含脂肪较少,可免去这个脱脂手续。（3）抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10到离心管内，充分搅拌，然后离心,倾去上清液，得到残余物。(4）脱糖:加8乙醇10ml到离心管中,充分搅拌以洗涤残余物（每次都用同一玻棒），离心,倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。 2溶提淀粉:（)加醋酸-氯化钙：先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中，搅拌后全部倾入2ml三角瓶内，再用醋酸氯化钙溶液50分数次洗涤离心管,洗涤液并入三角瓶内，搅拌玻棒也转移到三角瓶内。(2)煮沸溶解：先
11、用蜡笔标记液面高度,直接置于加有石棉网的小电炉上，在4in5in内迅速煮沸，保持沸腾5mn1min，立即将三角瓶取下，置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌,勿令烧焦；要调节温度,勿使泡沫涌出瓶外;常用玻璃将瓶侧的细粒擦下；并加水保持液面高度。 3.沉淀杂质和定容：(1)加沉淀剂：将三角瓶内的水解液转入10ml容量瓶，用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶，并入容量内,加0zo1m混合后，再加15%k4f（)61ml，用水稀释至接近刻度时，加95%乙醇一滴以破坏泡沫,然后稀释到刻度,充分混合，静置,以使蛋白充分沉淀。(2)滤清:用布氏漏斗(加一层滤纸)吸气过滤。先倾清溶液约10m于此滤纸上，使其完全湿润
12、,让溶液流干，弃去滤液,再倾清溶液进行过滤,用干燥的容器接受此滤液，收集约50，即可供测定之用。 测定旋光度：用旋光测定管装满滤液,小心地按照旋光仪使用说明，进行旋光度的测定。淀粉(%)=n1002dl（wk)10式中：用钠光时观测到的旋光度；20:淀粉的比旋度，在这种方法条件下为03；l:旋光管长度(cm）;:样品质量（g)；:样品水分含量(%);n:稀释倍数;10:换算为百分率。也可以不用上列公式计算,改用工作曲线来求得淀粉含量,这样准确度高些。 、淀粉含量的测定 一、目的 掌握植物组织中淀粉含量测定的原理和方法。 二、原理 淀粉用盐酸水解转化成葡萄糖后，测定葡萄糖含量，根据葡萄糖含量换算
13、成淀粉含量。 三、材料、仪器设备及试剂 材料、仪器设备及试剂与上述蔗糖的测定相同，另增加碘试剂；10ml、50m容量瓶。碘试剂（碘化钾碘溶液)的配制:称取碘化钾0g及碘1溶于100ml蒸馏水中。使用前需稀释1倍。 四、实验步骤 .葡萄糖标准曲线制作与上述还原糖含量测定相同。 2.淀粉的水解 取上述还原糖含量测定中经85乙醇浸提后的全部淀粉残渣,放入10ml三角瓶中，加入6l1盐酸10ml，混匀，在沸水浴中加热10min0mi（用碘试剂检查淀粉水解程度，直至不显蓝色为止),再加蒸馏水20ml,摇匀并过滤于10m容量瓶中,过滤后残渣再用蒸馏水冲洗3次,一并过滤入容量瓶,定容至00ml。准确取出1l
14、过滤液置入50ml容量瓶中，加酚酞2滴，用10nao中和至微红色，用蒸馏水定容至250m，待测。 .还原糖含量测定 取4支2ml刻度试管,编号,其中3支（三个重复)分别加入待测液2ml,1支空白管加2ml蒸馏水代替样品液,然后各管再加入dns试剂1.5l,摇匀，混合液在沸水浴中加热5min,然后用自来水冷却,各加入21.5l蒸馏水使总体积为25l,摇匀，在520nm波长下测定吸光度(a）值。 五、结果计算 根据待测液的吸光度从上述标准曲线中查出其相应的还原糖含量,然后按下公式计算出样品中还原糖（葡萄糖)含量和淀粉含量的百分率。 淀粉水解液总量(m)从标准曲线上查得还原糖(mg) 测定时水解液用量（m） 还原糖()=
