《大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结1、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验方法(1)大肠菌群(colifoms)在 36C 培养 48h 可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽 孢杆菌。该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食 品中肠道致病菌污染的可能。tI結魄触 胪邂fl(2)粪大肠菌群(Fecal colifoms )也称耐热大肠菌群。指大肠菌群中能在 44.5 C生长、发酵乳糖产生气 体的一群细菌。与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语， 它不代表某-一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的-组与粪便污染有 关的细
2、菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。食品卫生学意义：作为粪便污染食品的指标菌，MPN值愈低则说明食 品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低。作为肠道致病菌污染食品的指针，大肠菌群数量越多则肠道致病菌存 在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。（3）大肠埃希氏菌（Escherichia coli）分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属。是人和温血动物肠道内普遍存在的细 菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部 位时，可引起感染。主要有：O抗原（菌体抗原，150个）；K抗原（荚膜抗原，90 个）；H抗原（鞭毛抗原，50个）（4）致泻性大肠埃希氏菌 能侵入肠
3、粘膜上皮细胞,引起食物中毒的大肠埃希氏菌。产毒性大肠埃希氏 菌（ETEC）-肠胃炎、旅行性腹泻。致病性大肠埃希氏菌（EPEC）-婴儿腹泻；肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）-出血性结肠炎；（0157： H7； 0104： H4；O111； O126 等）侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)杆菌性痢疾；粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)急慢性腹泻。2、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的关系3、相关检验方法标准GB4789.3-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数GB 4789.39- -2013食品安全国家标准
4、食品微生物学检验粪大肠菌群计数GB4789.6- 2016 食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB4789.36-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏O157:H7/NM检验。4、大肠菌群和粪大肠菌群的检测流程图检样药gI櫛舞三牛连缕的稱释度如代5 102, 1)I接种:毎亍稀释度接种3LST,每管计ml)1 轴土 11C,48 h浑浊产气不产气報吿大肠商群阴性移种EGL白J3庁土 1,43 Jh移种邑U肉爲j.5 0.510,24 2h浑浊.产汽不产气MPNS大肠茵群阴性报告大肠菌稈的 MPMg浑浊.产吒不产吒*粪大腸菌群阴性査MPN衷报告粪丈肠商酔KMPN
5、值5、大肠菌群计数检验的操作1)MPN 法：10Pll H:VV !O.Ofllg(niL)Xi阳交苗味理盐水4 0诘用列隸帕R blOHWTCL1SJJT将产气的试管内 样品接种到BCIB肉汤站Mi慚徉1:1耐締样i O.Lg(iiiL)X Jo.oigfiiiLjxa 跡乜土 1*C. 48k3h想T不产气(-4. 小导管里无气逓I遴择3牛稀释段毎个稀釋用按神二骨T中根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表(MPN:最可能数，基于泊松 分布的一种间接计数方法)阳性管数MPN95%可信限0.100.010.001下限上限00011004202）VRBA 平板计数法j挑选ioMS .,接种到B
6、GLB经最后证实大肠菌群阳性的BGLB试管比例乘以VRBA菌落数再乘以稀释F + * +选 Slfr-150 平扳iHft典鉀将期亡的vhiu ttsni毛吗养.皿 中，辅刮養匀之一持碇固后內荷 I4h X J 4iuL TLBA典塑齒落为賞红爸 周围有範色煎盐沉 淀环* 0.5mm倍数，即为每克（毫升）样品中大肠菌群数。如：稀释倍数10-3,吸取样品稀释液1ml平板典型或可疑菌落数100挑取10个典 型或可疑菌落接种BGLB-阳性6管大肠菌群数二X100 X 1000=6 XlOCFU/g （ml）辺6、大肠埃希氏菌MPN计数法检验程序划线平扳36148211挑取與挹或用黠供蓉（翼优中心）*
7、移种肯养晾脂”麵士 rc,482h生化反应鉴定革兰氏染色：锭基质试釀（I）+7-阴性无夢挹杆曲甲基红反应（XJR） +Voii1*-Pixiskuuerjx应（Vi）-拧掾酸盐利用试验-按3阳性质杳XUg报告大肠埃希氏菌賊P值.；如要讲 步确宦是否致泻性大肠煤希氏菌.需要屈行血清分刑和毒素分瓊7、大肠埃希氏菌在EMB上的菌落形态 具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落8、靛基质试验(呵噪试验)(1)原理：某些细菌能分解蛋白质生成呵器，呵跺与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰呵噪红色化合物。 培养基：色氨酸肉汤。36匸土 1 C培养24h.接触面红色，阳性1 血5% w 荼酚乙醇 0.6niL+40 %
8、KOHO. 2,niL阴性36C1 C 培养24h9、甲基红反应(MR)阳性肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步 分解中,由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产 物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。培养基：MR-VP培养基。1队V-P试验(VP)某些细菌在葡萄糖蛋白陈水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合， 脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与 蛋白陈中的肌基生成红色化合物，称V P (+)反应。36C1C培养48h,加数滴甲基红溶液11、柠檬酸盐利用试验有的细菌如产气杆菌
9、，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝 香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌,在该培养 基上不生长，培养基不变色。12、大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别甲觸IMR）VF牆麒（0綠鲫+-一+1 - 1;+ -1+軀中證+*t非昶中IW+大肠埃希氏菌为革兰氏阴性无芽胞杆菌， 发酵乳糖、产酸、产气，IMViC生化试验为十十一一或一十一一。只要有1个菌落鉴定为大肠埃希氏菌，其 所代表的LST肉汤管即为大肠埃希氏菌阳性。依据 LST肉汤阳性管数查 MPN表（见附录B），报告每g （mL ）样品中
10、大肠埃希氏菌 MPN值。13、大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）14、大肠埃希氏菌平板计数(1) 选取2个-3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种2 个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL稀释液加入无菌平皿做空白对照。(2) 将10 mL-15 mL冷至45 C0.5 C的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA ) 倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3 mL-4 mLVRBA-MUG覆盖平板表层。凝固后翻转平板，36 C 1C 培养 18 h-24 h。(3) 选择菌落数在10 CFU-100CFU 之间的平板,暗室中360nm-366nm 波长紫外灯照射下，计数平板上发浅蓝色荧光的菌落。(4) 检验时用已知MUG阳性菌株做阳性和阴性对照。15、大肠埃希氏菌平板计数的报告两个平板上发荧光菌落数的平均数乘以稀释倍数，报告每g (mL)样品中大肠埃希氏菌数，以CFU/g(mL)表示。若所有稀释度(包括液体样品 原液)平板均无菌落生长，则以小于 1乘以最低稀释倍数报告。
