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1、.PCR实验室作业指导书 文件编号：第2版编制： 审核： 批准： 生效日期：2012年 月 日；.目 录序号主 题 内 容 代 号页 号1PCR实验室的设置及管理2PCR实验室工作制度3实验室内务管理及清洁制度4PCR实验室人员的配置及管理5实验人员的培训程序6PCR实验室清洁程序7样品编号的标准操作程序8PCR基因扩增实验室的要求9PCR废弃物的处理程序10试剂准备区工作制度、标准操作、程序文件11标本制备区工作制度、标准操作、程序文件12扩增区工作制度、标准操作、程序文件13产物分析区工作制度、标准操作、程序文件14PCR标本的保存操作程序15PCR标本的采集、运送、接收程序16PCR生物
2、安全防护措施17PCR实验室化学试剂配18PCR实验室记录管理制度19PCR应急处理程序20PCR试剂的质检标准操作程序21PCR消耗品进购质检贮存程序22PCR室内质量控制操作程序23PCR室间质量控制操作程序24PCR温度校准标准操作程序25伯乐PTC-200型核酸扩增仪操作规程26ABI 7300型荧光定量扩增仪操作维护规程27DYY-6C电泳仪操作维护规程28Bio-Rad GelDoc_XR凝胶成像仪使用说明书29恒温水浴箱操作维护规程30旋涡振荡器操作维护规程31普通离心机操作维护规程32高速离心机操作维护规程33低温高速离心机操作维护规程34冰箱操作维护规程35超低温冰箱操作维护
3、规程36生物安全柜操作维护规程37超净工作台操作维护规程38移液器操作维护规程. 修 订 页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1234567891011121314151617181920；.PCR实验室的设置及管理1目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。2适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。3负责人： 4细则：41 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事基因扩增检测及相关实验工作。42 本实验室采用普通RT-PCR扩增和实时荧光定量PCR两种技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为四个区：试剂准备区（第一区）、
4、标本处理区（第二区）、扩增区（第三区）及产物分析区（第四区）。每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。标本的接收则在检验科标本接收处进行。43 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。44 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。45 严格遵守从“试剂准备区标本处理区扩增区产物分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。46 非本实验室工作人员，未经许可不得入内
5、；进修、实习或其他科室人员因需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区） 需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。47 实验完毕后做好清洁消毒工作。5. 本文涉及以下图表：1.实验室设计平面图.PCR实验室工作制度1目的 ：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。2适用范围：所有本实验室人员。3负责人： 4细则：41 本实验室用于基因扩增检测及相关实验工作，不得进行其它实验操作。42各区的用品不得混用。43在各区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程。44试剂准备区只能进行试剂
6、的贮存及配制等相关操作（见相关SOP文件）。45标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成（见相关SOP文件）。46扩增区只能进行DNA或cDNA的扩增、实时荧光PCR扩增产物的分析（见相关SOP文件）。47产物分析区只能进行RT-PCR扩增产物的分析（见相关SOP文件）。4. 8进行实验时严格执行本实验室的各项操作规程，及时做好各种操作记录，力求准确、可靠。实验完毕，做好清洁、整理及分析统计等工作。49室内仪器由专人负责，未经许可，不得随意使用或挪用；爱护使用仪器，定期进行保养与维修。4. 10 爱护医院财产，注意安全；离开实验室前应关好
7、门窗，检查水、电等。.PCR实验室内务管理及清洁制度1目的：保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。2适用范围：实验室相关人员及相关清洁工人。3负责人： 4细则：41内务管理制度a. 非本室工作人员未经允许不得进入实验室。b. 各区的用品不得混用。c. 实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。d. 进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。e. 所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。f. 所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录，未经允许不得随意带出本实验室。g. 各区的各种清
8、洁消毒均应有记录，工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。h. 注意保持实验室卫生整洁，严禁在室内抽烟、吃零食，非实验操作人员应尽量少入。i. 每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，负责仪器的整洁，安全；下班前检查门、窗、水、电，节假日指定人员负责检查实验室的仪器、设备，确保安全。4.2 内务清洁制度a. 实验室地面保持平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。 b. 合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。c. 抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。d. 实验结束后用75%酒精对台面进行清洁，并经紫外灯进行消毒。e. 每
9、天实验结束后，紫外灯消毒60分钟后，依次关闭各区紫外灯并记录照射时间f. 搞卫生时，依次清洁四个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。g. 处理好各区废弃物，高压消毒后集中处理。h. 每周将工作服交消毒洗涤，不同实验区的工作服分开洗 .PCR实验室人员的配置及管理1目的：保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。2适用范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。3负责人： 4细则：41 人员要求a. 鉴于PCR技术要求的特殊性、复杂性，本实验室工人员应为有经验的医学检验专业人员。b. 实验室工作人员应参加上级举办的PCR
10、技术培训，并取得合格证。c. 对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR技术培训合格证，应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。d. 实验室工作人员上岗前必须学习并掌握PCR实验室管理文件。42 人员配置a. 实验室应根据工作需要配备足够的工作人员，目前实验室有主管技师2人、技师？人，？人都已获得培训合格证，视工作量的增加和业务发展需要，会适当增加工作人员。b. 由实验室负责人负责全面管理、技术指导、解决与临床沟通及技术疑难问题；其他各级技术人员履行相应的工作职责。43 人员管理实验室建立所有工作人员的技术档案，包括
11、：学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1次，电子档案随时更新。5. 本文涉及以下图表：实验室主要负责人简历表 PCR实验室工作人员一览表 人员档案卡 实验室人员的培训程序1.目的: 保证实验室有足够的技术力量和科室适应长远发展的需要。2.适用范围: 核酸扩增荧光检测实验室实验人员及预备培训的人员。3.负责人: 4.细则：4. 1实验室负责人或负责人指定人员参加每年省CDC的室间质评总结会。4. 2实验室工作人员每12年至少参加1次PCR技术的省级或国家级继续教育项目，参加相关学术交流会议。4. 3安排未取得上岗培训合格证的工作
12、人员在合适的时间内参加技术培训。4. 4科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的相关知识，提升自身的理论学习水平。特别是在标本接收区采血、接收标本的人员，需定期对其进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。4. 5本实验室工作人员每年进行考核一次,考核内容:a)日常工作质量b)室内质控测评c)室间质控测评d)在抱怨处理中的表现4. 6本实验室工作人员均建立业绩档案,实行能进能出制度,不断吸收高质量人员,加强培训和提高, 对于不适合本室工作的人员要及时调离。5. 本文涉及以下表格 培训申请表 年度培训计划表 培训记录表 员工培训履历表 .PCR实验室清洁程序1目的：保证实验室环境的整洁，防止污染。2适用范围：适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。3负责人： 操作人： 4细则：41 实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。42 合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。43 抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。44
