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1、常用染色步骤HE,马松，糖原联系人:周昌斌137* 133* 苏木素伊红染色液一. 苏木素伊红染色液套装组合:Harris苏木素染色液50ml水溶性伊红染色液50ml苏木素染色分化液50ml苏木素染色返兰液50ml概述: 苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法,历经上百年的应用历史 至今仍无可替代。因此,苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环 节。二. 染色方法:1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟，2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟，3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30，秒钟，4. 自来水流水冲洗1分钟，5. 苏木素染色58分钟（依染液新旧调整染色时间
2、），6. 自来水流水冲洗1分钟，7. 进入分化液分化数秒钟，8. 自来水流水冲洗1分钟，9. 进入返兰液处理510秒钟，10. 自来水流水冲洗2分钟，11. 进入伊红染色液1-3分钟，12. 自来水冲洗3060秒钟，13. 75%I、75%II乙醇脱水分色各10秒钟，14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟，15. 100%乙醇1、 100%2脱水30-60秒钟，16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟，17. 中性树胶封固。三. 染色技术要点: 苏木素染色液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。因此，在使用前应使用滤纸吸附去除氧 化膜以
3、免污染切片。一般情况下应建立良好的使用习惯，每隔23天将苏木素染 液彻底过滤一次。为保证HE切片的恒定染色质量建议每500ml苏木素染色液染 12001500张切片为宜。苏木素染色液在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间，核 染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主，一般复染的时间应控在10-30秒以内。此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈 淡蓝色，使DAB呈现土黄色。分化和返兰步骤是HE染色关键点，应在染色实践中依据分化液和返兰液的 新旧调整分化和返兰的处理时间。在使用自动染色机染切片是应注意在机械臂 运行时分化液仍在进行分化反应，应适当缩短分化液处理掉
4、时间或用70%乙醇适 当稀释分化液以免分化过度。70%乙醇对伊红具有分色和脱色作用，使伊红在不同的组织结构和病变区域 形成不同层次的红色。因此，伊红染色以适当深染为宜，以便在70%乙醇分色脱 水后能显现明显的色阶和色深度。100%乙醇和二甲苯的纯净度是保证染色后切片透明度和显微镜下清晰度的 重要前提，在湿度较大的情况下应注意试剂的更换。干燥后封片是造成细胞核结构不清的重要原因之一，应尽可能避免。一. Masson三色染色试剂盒：立春红复红50ml亮绿50ml磷钼酸50ml醋酸50 X 2 mlMasson染色是最为常用的结缔组织染色法，此法多用于观察病变组织中纤 维结缔组织的增生和分布，纤维性
5、肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。对酒精性肝硬化/ 坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重 要价值。Masson染色在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和 上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积，对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。二. 染色方法：1. 切片脱蜡至水，2. Harriss苏木素染胞核10分钟水洗，3. 分化、水洗，返蓝、水洗，4. 入Masson复合染色液染色10-20分钟，5. 0. 2%醋酸速洗15秒钟两次，6. 1%磷钼酸处理58分钟，7. 0. 2%醋酸速洗15秒钟两次，8. 1%亮绿SF染色24分钟，9. 0. 2%醋酸速洗15秒钟两次，10
6、. 直接用新鲜95%乙醇分化2030分钟，11. 脱水、透明、封片。网状纤维染色.网状纤维染色试剂盒：高锰酸钾50ml草酸50ml硫酸铁氨50ml氨性银（请置4C冷存）50ml氯化金50ml海波50ml网状纤维由网状蛋白组成，由于在银染色中被染成黑色又称为嗜银纤维。在 化学构成上网状纤维和胶原纤维基本相同因此在病理条件下网状纤维可以转变 为胶原纤维。在人体的肝脏、脾脏、淋巴组织、血管等器官内广泛分布着网状 纤维。网状纤维染色在病理诊断和病理学科学研究中有重要的价值及广泛的应 用。主要用于癌与肉瘤的鉴别、血管内皮肿瘤与血管外皮肿瘤的鉴别、脑膜瘤 与星形细胞瘤的鉴别、以及肝炎肝硬化病变中肝小叶和肝细胞的病理变化。二.染色方法：1. 切片脱蜡至水，2. 入高锰酸钾氧化5分钟、水洗，3. 入草酸漂白12分钟、水洗30秒、蒸馏水洗，4. 入硫酸铁氨媒染5分钟、水洗5秒、蒸馏水洗5秒，5. 滴加氨性银2ml染色1-1.5分钟、蒸馏水洗5秒，6. 入甲醛还原液1分钟（新鲜配置10%甲醛）、水洗2分钟，7. 入氯化金调色1分钟、水洗，8. 硫代硫酸钠处理3分钟，9. VG复染或苏木素浅染胞核（可省略），10. 脱水、透明、封片。
