《13种蛋白质的浓缩方法及应用过程》由会员分享，可在线阅读，更多相关《13种蛋白质的浓缩方法及应用过程（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、13种蛋白质的浓缩方法及应用过程1、丙酮沉淀法：三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变 性。2、免疫沉淀法：得有特异性抗体3、硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析），选择硫酸按是因为：盐 析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济，大多数的蛋白都可以用 资格方法4、聚乙二醇沉淀法：使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解 是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉 淀！5、离子交换层析：可用阴离子交换树脂进行浓缩。6、透析袋浓缩法：利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的 蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃
2、纸代替），结扎，把高分子（6 000-12 000） 聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可 将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用 过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。主要用于更换蛋白质的缓冲液，得有透析袋。不需要特殊的仪器。一般用得是 PEG20000进行实验，简单，快速，对蛋白没什么影响7、冷冻干燥浓缩法：这是浓缩蛋白质的一种较好的办法，它既使蛋白质不易变 性，又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做 法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置干燥器内（干燥器内装有干燥剂，如NaOH、 C
3、aCl2和硅胶等）。密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态。数小时后即可获得含 有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便，应用时可配成任意浓度使用。也 可采用冻干机进行冷冻干燥。8、吹干浓缩法：将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。此法简单，但速 度慢，且温度不能过高，最好不要超过15 C。9、超滤膜浓缩法：此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出，而蛋白质存 留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压 过滤器内，在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥 器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。10、凝胶浓缩法：选用孔径较小的凝胶，如Sephade
4、xG25或G50,将凝胶直接加 入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。 放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，通过离心除去。11、浓缩胶浓缩法：浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸 水性能。每克干胶可吸水120 ml150 ml。它能吸收低分子量的物质，如水、 葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓 缩后，蛋白质的回收率可达80%90%。比浓缩胶应用方便，直接加入被浓缩的 溶液中即可。必须注意，浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在 浓缩胶表面产生阳离子交换，影响浓缩物质的回收率。12、盐析法：多用于各种蛋白质
5、和酶的分离纯化。一般来说，所有固体溶质都可 以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。如硫酸铵沉淀法。13、有机溶剂沉淀法：有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面 水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。该法优点在于：(1) 分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓 度下沉淀；(2) 沉淀不用脱盐，过滤较为容易；(3) 在生化制备中应用比盐析法广泛。其缺点是对具有生物活性的大分子容易 引起变性失活，操作要求在低温下进行。总体来说，蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。有机溶剂的选择首先是能和水混溶，使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮， 还有二甲
6、基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。有多种因素影响有机溶剂的沉淀效果：(1) 温度：低温可保持生物大分子活性，同时降低其溶解度，提高提取效率；(2) 样品浓度和PH：与盐析法中的作用基本相同；(3) 金属离子：一些多价阳离子如Zn2+和Ca2+在一定PH下能与呈阴离子状态 的蛋白质形成复合物，这种复合物在水中或有机溶剂中的溶解度都大大下降，而 且不影响蛋白质的生物活性。(4) 离子强度：盐浓度太大或太低都对分离有不利影响，对蛋白质和多糖而言 盐浓度不超过5%比较合适，使用的乙醇量不超过二倍体积为宜。强调低温(0-4度以下)是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙 酮注意：Mg离子，pH值有机溶剂沉淀法不如盐析法应用普遍，温馨提示：在十度以下的条件下，蛋白质 会在有机溶剂中变性，这时要注意选用合适的有机溶剂：如乙醇，丙酮，还有, 注意：镁离子和pH值
