组培生产中提高组培苗繁殖速度的方法 #亚龙组培分享#

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1、im#亚龙组培分享#1、组培苗繁殖速率及计算统计组培苗增殖速度，有以苗为单位，也有以芽或未生根的小茎作 单位的，以原球茎球状体或胚状体因难以统计，则以瓶为单位。大 多数以芽和苗作单位。由于组培苗在无菌条件下生长，营养充足，温度适宜，光照充分， 100%的相对湿度，又不受季节、气候的限制，也无病虫的危害， 故增殖极快，那么，怎样计算其增殖速度呢？计算增殖速率有理论 计算和实际计算两种。实践中要受到多种因素制约，困难很多，因 此实际产苗要远远低于理论数字。但理论计算可以作为一个计算产 量的指标，提供参考，有它的积极意义。组培苗理论上一年能繁殖多少，可用下面的简单公式计算：Y=mXn丫二年繁殖数m=

2、无菌母株苗数X二每个培养周期增殖的倍数n二全年可增殖的周期次数例如月季每5周转接一次，甲品种每次增殖3倍，乙品种每次增殖5 倍，丙品种每次增殖7倍，假定一开始都是一个芽，那么这三个品 种一年能繁殖多少呢？根据公式可知：n=10.4，即每年可转接10次，那么这三个品种年繁殖率分别计算如下：甲品种丫=1 x310=59000=5.904乙品种丫 =1x510=9760000=9.76 06丙品种丫 =1x710=282000000=2.82 x 1082、 提高繁殖速度的方法 不仅组培苗的繁殖类型不同，而且在试管内又受到基因型、外植体 来源、年龄、部位、培养基种类、附加成分和培养环境等多种因素 的

3、影响，应通过具体试验来摸索每种植物最快最好的繁殖方法。1. 改进培养基 长期以来，根据培养的组织不同，目的不同，已设计了许多种培养 基。初代培养能否进行增殖，培养基的选择是一个关键。MS培养基 可以适用于许多植物的培养，但在大量组织器官培养中发现，由于 其无机盐浓度较高，对某些植物来说出现了抑制生长甚至毒害作用， 例如，扑虫堇(pinguiculamoranensis )的叶，接种到1/2LS培养基 中死亡率很高(LS和MS的无机盐一样)，在1/5LS培养基中效果很 好，而越橘的嫩茎在1/4MS培养基中生长良好，作为热带气生兰的 许多种类均需要较低的盐浓度。糖类具有维持培养基渗透压的作用，在培

4、养过程中，组织不断地从 培养基中吸取糖，随时间增长，逐渐降低了糖的浓度，不能维持正 常的渗透压，这种情况下应尽快将材料转移至新鲜的培养基，否则 影响组培苗的生长。在植物组织培养中所用的维生素类尽大部分为B族维生素，如硫胺素、烟酸、叶酸、生物素等，它们以各种辅酶的形成参与代谢活动， 影响形态发生、分化及组培苗的生长。有的外植体或愈伤组织能自 己合成各类维生素，但在没有研究和确定的情况下，一般均加进， 以防缺乏。植物生长调节物质，在组培苗增殖中起决定性的作用，由于植物体 内源激素难以测定，因此，外源激素的加进靠一系列的试验来修正。 下面叙述试管内增殖的三种不同途径和使用不同的植物生长调节物 质。亚

5、龙组培（1）促进腋芽形成和生长的激素高等植物的每一个叶腋中都有腋 芽，在一定条件下可使它生长。现在知道顶端优势抑制芽的生长可 被外源的细胞企业管理素打破，所以在利用这条途径来增殖时，几 乎都要加进细胞企业管理素。由于细胞企业管理素的持续作用，腋 芽不断分化和生长，逐渐形成芽丛。反复切割和转移到新的培养基 中继代培养，就可在短期内得到大量的芽。除了细胞企业管理素以 外，培养基中还经常加进低浓度的生长素，以促进腋芽的生长，但 要防止愈伤组织化。有时还加进低浓度的赤霉素，以促进腋芽的伸 长。在实际操作中，一般高浓度细胞企业管理素和低浓度生长素的配比，既能提高腋芽的增殖速度，也能保证腋芽健壮生长，为后

6、续 的生根移栽打下良好基础。如果细胞企业管理素浓度过高生长素浓 度过低，会形成过于细密的嫩芽，虽然提高了增殖速度，但苗多而 弱，降低了芽的质量，不适宜作为生根或移栽用苗，这不免是一种 浪费。但这并不意味着促进腋芽的增殖必须同时需要生长素和细胞 企业管理素。许多情况下只用细胞企业管理素也可以达到优质的增 殖芽。（2）诱导不定芽形成和生长的激素除现有的芽之外，任何器官上 的，通过器官发生重新形成的芽称为不定芽。促进外植体形成不定 芽，要使用一定量的细胞企业管理素和生长素，一般浓度不能过高。 否则不但使器官分化能力降低，而且也使遗传性难以稳定。诱导外 植体形成不定芽时，一般使用细胞企业管理素的浓度高

7、于生长素浓 度的配比，但也经常采用细胞企业管理素和生长素浓度的比值接近 于1的配比。有的材料还需加进低浓度的2,4-D才能诱导不定芽的产 生。具体应用时应查阅资料，并通过大量筛选来寻找最适当的细胞 企业管理素和生长素种类和浓度的配比。但总的原则还是如上所述， 不能片面追求增殖率，既要求一定的增殖率，也要保证小苗的质量。 亚龙组培（3）促进胚状体的形成和繁殖的激素胚状体途径的优点是增殖率 高，而且同时具有胚根和胚芽，可免往生根。现在胚状体发生还不 普遍或产生的胚状体难以成株或成株率太低，以及遗传性尚不稳定， 故仅在有限植物中应用。一般是在含有丰富还原氮的培养基上，加有生长素，特别是2,4-D以诱

8、导胚状的发生，然后转移到降低浓度或 没有生长素的培养基上使其成熟、萌发和生长。培养基中，还可加 进其他附加成分，如氨基酸，水解乳蛋白（LH ）300mg/L 500mg/L , 水解酪蛋白（CH ）200mg/L 500mg/L ,以及腺嘌哙（ADE ）1mg/L 80mg/L等，以促进组培苗的生长。2、改善培养条件组培苗增殖与培养条件如温度、光照、湿度、培养器皿和培养基的pH值密切相关，需要进行控制，以促进繁殖。（1 ）温度（temperature）不同植物增殖的最适温度不同，大多采用2529的温度。一般低于 15C时，培养的组织生长岀现停滞，而高于35C对生长也不利。促进芽的形成温度略低，

9、如烟草芽形成以18C最好，129以下，33C 以上成芽率均低。增殖苗的温度一般是恒温，也有昼夜变温下生长 效果比恒温好的，如百合。在考虑某种培养物的温度要求时，也应 考虑原植物的生态环境所处温度条件，如松树一般生长在较高的海 拔及较低的温度环境，在较高温度的培养条件下其组培苗生长变慢， 有人采用两到三个月的模拟冬天的低温环境，又使生长恢复。温度 预处理也对组培苗增殖有影响。高温处理不仅可获得无病毒植株， 也影响到器官发生。草莓的茎尖分生组织经38C处理3d5d，提高 了无病毒茎尖分生组织的成活率。天竺葵一个品种分别用10C、 20C和30C等不同温度处理1周 4周，培养8周后，以10C处理的

10、茎尖繁殖数最高，20C处理的其次，30C处理的最差，在木本植物 的胚培养中，发现胚在2-5C条件下进行一定时间的低温处理，有利 于提高胚的成活率，如桃。(2 )光照(light)光对组培苗生长增殖也有明显影响，表现在光照、 光质和光周期等方面。光照强度对细胞、组织的增殖和器官的分化 研究尚少，因此看法不一致。在一些植物(如荷兰芹等)的组织培 养中，发现器官形成不需要光；工艺技术而另一些植物(如菊芋、 卡里佐枳橙)的组织培养中，则发现光对器官的形成有重要作用。 据报道用黑暗、2200lux和5700lux等不同光照处理卡里佐枳橙的茎 尖培养，茎尖分化新梢数随着光强增加而增加，分别增加153.8%

11、和 238.5%。吴绛云发现对光照显著促进黑穗醋栗幼苗的增殖。而王际 轩等培养苹果砧木的芽，通过暗培养产生黄化苗，明显提高茎尖增殖率。关于光周期，组培苗的增殖与分化，许多研究者都选用一定 光周期来培养，最常用的光周期是16h光照，8h黑暗。有人发现菊 芋块茎器官的分化，每天ih600lux光照有促进，到12h由达最高限 度，再增加则无作用。曹孜义等用连续光照培养葡萄组培苗，尽大 多数品种可加快苗的增殖，而且使苗生长健壮。王永明发现一月以 上每日10h以下光照，会使部分苗生长停止和封顶，若延长至12h 16h，则可消除。如果诱导试管内花的形成，那日照长短则是一个 重要因素。(3 )湿度(humi

12、dity)培养容器内的相对湿度几乎可达100%，而环境 中的湿度会影响培养基湿度，培养室温度太低，培养基易失水、干 裂，影响生长，过高则易引起棉塞长霉，造成污染。一般要求在70% 80%的相对湿度，过低应洒水，过高应通风除湿。(4 )pH值(pHvalue)组培苗的增殖都要一定的PH值。如果PH值不 适，则直接影响组培苗对营养物质的吸收，从而影响到生长和繁殖。 除特殊要求外，一般培养基PH值都在5.6 6.0之间。(5)渗透压(penetrating pressure) 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透 压的变化。通常12个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压 以上就对植物生长有阻碍作用，而 56 个大气压植物生长就会完 全停止， 6 个大气压植物细胞就不能生存。植物组培公司-济南亚龙生物科技公司(6 )气体(air)组培苗生长和繁殖需要氧气。进行固体培养时，如果瓶塞密闭或将 芽埋进培养基会影响生长和繁殖。液体培养，则需进行振荡和旋转 或浅层培养以解决氧气供应。组培苗增殖培养时，应注意避免有害 气体的进进，如S02、乙烯等的伤害。