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1、广州金域医学检验中心 KM-SOP030640Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Version 2.0文件已阅声明表Procedure Circulation Form文件名称（File Name）: 骨髓染色体制备及分析作业指导书 编号（Serial Number）： 表号（Table Number）:KM-MP03.02.02已阅声明：本人承诺已理解本文件中的相关内容，今后的工作中将严格按照此文件执行，不随意对外传阅此文件，如有与文件不相符的操作，责任由本人承担。（Declaration: I have understood
2、the relevant content of the document. I will keep the document confidential and be responsible to the procedure accordingly.）阅读人签名：在按文件执行前，请在下表中签名，表明同意上述声明。You are required to sign the declaration at the form of this page before commencing the practical.签名（SIGNATURE）签名日期（DATE）签名（SIGNATURE）签名日期（DATE）
3、文件本次修改记录表Procedure Amendment Form编号（Serial Number）： 表号（Table Number）:KM-MP03.02.03序号No.页码Page内容更改说明Description of Modified Contents审批人Approver批准日期Approved date文件信息表Procedure information form编号（Serial Number）： 表号（Table Number）:KM-MP03.02.04文件名（文件编号）File Name(File number) 骨髓染色体制备及分析作业指导书(KM-SOP0306.40
4、)版本号Version NumberVersion 1.0执行日期Implementation Date2009-03-20文控部门Doc. Control Dept.实验室文控室回顾计划Review Plan计划回顾人/计划回顾日期Responsible person /Due date实际回顾人签名/日期Reviewed by: Signature /Date胡朝晖/2010-03-20取代的旧文件Replaces文件发放范围Distribution ListNo.存放地点(持有人)Location（Holder）No.存放地点(持有人)Location（Holder）1实验室文控、实验诊
5、断部、（周梅华）2遗传（陈赟）3遗传技术组（江帅）作者签名/日期Author signature /Date林秋菊 廖立斌审核人签名/日期Checker signature /DateN/A英文初审人签名/日期Translation first trial （signature）/DateN/A英文复核人签名/日期Translation Recheck （signature） /DateN/A批准人签名/日期Approved by :Signature /Date胡朝晖 文件接收人签名/日期Doc. Receiptor /Date目录（Table of Contents）1 目的（Purpos
6、e）：52 范围(Scope)：53 职责(Responsibility)：54 操作程序（Operation Procedure）:54.1 试验原理（Test Principle）：54.2 样本采集（Specimen Collection）：54.3 安全防范（Safety Precautions）：54.4 试剂（Reagents）：64.5 器材（Instruments）：64.6操作步骤(Procedure):65 染色体分析(Chromosomes Analysis)：95.1扫片（Preview Slides）:95.2 中期分裂相分析 (Metaphase Analysis)
7、：96 室间质评（Proficiency Test）：107 质量控制（Quality Control）:108 文件回顾（Documents Review）:109 参考文献 (References):1110 文档历史（Document History）1111 相关文件及表格(Documentation and form)：11骨髓染色体制备及分析作业指导书（Bone Marrow Chromosome Preparation and Analysis Standard Operation Procedure）1 目的（Purpose）：对骨髓标本染色体制备及分析操作进行规范，以控制各环
8、节可能出现的误差和差错，及时准确地为病人提供检验结果。2 范围(Scope)：适用于细胞遗传室骨髓标本；WBC12109，原始幼稚细胞30%的外周血标本。3 职责(Responsibility)：3.1 技术人员（Technical Personnel）：负责按作业指导书对标本进行制备及分析操作； 3.2 质量监督员（Quality Supervisor）：负责监督操作过程中的所有记录；3.3 技术组主管（Technical Group Supervisor）：负责管理监控操作过程按照标准操作程序进行；3.3 主任助理（General Supervisor）：进行全面监督管理。4 操作程序（O
9、peration Procedure）:4.1 试验原理（Test Principle）：骨髓中的细胞在不含有植物血凝素（PHA）的培养基中培养24-48小时，进入有丝分裂期，随后加入秋水仙素或秋水仙酰胺破坏纺锤体，使细胞分裂停止在中期，使染色体单体收缩，形态典型，宜于观察和分析。再经过氯化钾溶液低渗、固定、滴片制成玻片、显带、姬姆萨染色，在油镜下可观察到每个分裂相的染色体的形态及进行染色体记数分析。4.2 样本采集（Specimen Collection）：用0.2%肝素湿润的针筒抽取骨髓2ml或更多，立即注入含有1640培养基的标本瓶中。4.3 安全防范（Safety Precaution
10、s）：参见生物安全文件。4.4 试剂（Reagents）：4.4.1试剂名称（Reagents Name）:RPMI1640培养基白细胞稀释液Earles 溶液 （R显带用）0. 5%胰酶(G显带用)09生理盐水0.075M 氯化钾溶液3：1甲醇、冰醋酸溶液（固定液）PH7.4 PBS（缓冲液）20ugml 秋水仙素10% Giemsa染色液4.4.2储存与稳定性：（Storage and stability）各自配试剂储存条件和配制方法及有效期参照各种试剂的作业指导书。4.5 器材（Instruments）：生物安全柜培养箱抽风柜恒温水浴锅（型号: Grant Y14 R显带用）低速大容量离
11、心机电热恒温烤箱酒精灯恒温搅拌器白瓷显带缸显微镜4.6操作步骤(Procedure):4.6.1接种与培养(Inoculation and Culture)A 技术组人员首先穿戴工作服，隔离帽，口罩，手套；在生物安全柜内进行接种操作，开始操作前打开生物安全柜内的紫外灯，消毒30分钟。B 核对标本(Sample Confirm)：技术组人员核对标本，按照编号进行排序，将样本移入生物安全柜内进行接种操作；每个标本打印6-8个标签，用以贴在2-4个培养瓶、2个离心管、1个吸管，1个塑料试管上。标签内容为两个唯一性识别码：实验号和条形码。（一般以68个标本为一组，方便接种。）C 复融培养基(Disso
12、lve Medium)：取出-18保存的培养基，在37下融解复温，擦干培养瓶身，贴好标签，移入生物安全柜内。D 双人接种：一位技术员（甲），消毒瓶盖，用10ml注射器抽取少量标本滴23滴至白纸上，另一位技术员（乙）用加样枪吸取20l至于含有白细胞稀释液（380l）的小试管中稀释后，进行骨髓有核细胞计数。而甲这时应该尽快做好所需标记如培养方法(培养法:C 、直接法：D )。E 细胞计数时，求得大方格平均数N，则50N=所加入的5ml培养基内骨髓血的毫升数或3600N=应加入5ml培养基内骨髓血的滴数（使细胞浓度为12106/ml）。实际操作时可用以下公式：N20,接种 2.5ml；20N100，
13、50N=所加入的5ml培养基内骨髓血的毫升数；N100, 3600N=应加入5ml培养基内骨髓血的滴数, 滴数30,滴数72=所加入的5ml培养基内骨髓血的毫升数。F 甲按细胞计数算出的值进行接种，培养法的接种两瓶，直接法的一瓶。（注：直接法标本量是培养法的34倍。）G 接种完，将培养法的标本放入37的培养箱内，培养17-24小时。而用直接法接种的标本加0.9%生理盐水至20ml，再加320l的秋水仙素后，放入4冰箱，可同培养法同时收获（或者当天加完生理盐水与秋水仙素后放入37的培养箱内，培养1个小时后收获。）。H 所有标本的接种和添加试剂必须在符合标准要求的生物安全柜中进行，同时接种和添加试剂必须注意无菌操作避免污染（注：直接法是有菌操作，培养法的是无菌操作）。生物安全柜的全部功能每年都要进行验证,以确保安全柜的所有功能达标。生物安全柜的使用和维护参照BIOBASE BSC-1500AZ-X生物安全柜作业指导书4.6.2 细胞的收获步骤（The steps of cell harvest ）（直接法：D）A 根据有核细胞计数，将骨髓（约为培养法细胞数的3
