胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒真核细胞

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1、胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)(Catlog #DBI-121 ; BI-022； toe kt t）描述:本试剂盒提供了蛋白抽提试剂,蛋白抽提抽提试剂,蛋白抽提试剂C三种具有独特组分的缓冲液。所有试剂采用PIPE缓冲系统。通过实验,可以得到:细胞胞浆蛋白（其中含有含有可溶性的骨架蛋白）；细胞膜蛋白(其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白)；细胞核蛋白;其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。提取方法简单,可靠,快速。获得的各种部分蛋白纯度高，可用于PAGE电泳、estern Bot、免疫共沉淀、MS等后续研究。该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradfor法(DBI生物产品：

2、DBI105,46）蛋白定量和BC方法（DBI生物产品:DBI-107,148)进行定量。II 试剂盒组分：II.蛋白质抽提步骤:.注意事项和试剂准备: 打开试剂盒后,于4度保存蛋白抽提液;于2度保存蛋白酶抑制剂,样品缓冲液()。 使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于l蛋白抽提试剂中,使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Etractio Buff Mi A)；加2ul的蛋白酶抑制剂于2u蛋白抽提试剂B中,使成为蛋白抽提混合试剂（该混合物被称为Eaction Buffer MixB)；加2ul的蛋白酶抑制剂于20l蛋白抽提试剂C中,使成为蛋白抽提混合试剂（该混合物被称为xtrctio ferM

3、ix );试剂盒组分-101BI1022 包装50 次100次颜色蛋白抽提试剂A蛋白抽提试剂A1蛋白抽提试剂B蛋白抽提试剂C混合型蛋白酶抑制剂（00)DSPAGE 样品缓冲液(6)50ml00uml25ml1支5支100m1000ul10ml50ml支10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色 在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。 需要自己提供的试剂：90% aceon，BS抽提所使用的蛋白抽提试剂使用量抽提步骤. 准备细胞1. 将培养好的细胞用预冷的PBS 清洗2- 次。2. 选择合适的方法进行悬浮细胞和贴壁细胞的蛋白抽提:如果样品为悬浮细胞；蛋白抽提试剂的使用量依赖于培养细胞的湿重或细胞数量

4、。a) 转移悬浮细胞培养液到一个预先称重的离心管中,简单的离心。b） 弃去上清培养基,称量其重量，计算出悬浮细胞的重量。) 按照实验I 进行下面的实验。如果样品为单层贴壁细胞： 蛋白抽提试剂的使用量取决于培养细胞的器皿大小或细胞数量。a) 按照实验III 进行下面实验。. 悬浮细胞蛋白抽提实验步骤1. 吸取取5 倍体积细胞湿重的蛋白抽提试剂,加入到已经清洗好的细胞沉淀中。用移液器小心吹打,使细胞悬浮。. 冰上孵育细胞，并且轻微振荡,时间为大约0 分钟。使95-00%的细胞胞浆流出细胞。注意:在实验过程中，每个步骤的时间要保持连贯性。3 以80g的离心速度,4 度离心0 分钟。.转移上清到一个干

5、净的离心管中。记录上清的体积，此即为胞浆蛋白。(标记为上清1）。于-7保存该样品。.吸取取3 倍体积细胞湿重的蛋白抽提试剂,加入到沉淀中。用移液器小心吹打，使沉淀悬浮。6 冰上孵育细胞，并且轻微振荡,时间为大约30 分钟。7. 以5000g 的离心速度，4 度离心 分钟。. 转移上清到一个干净的离心管中。记录上清的体积,此即为细胞质膜蛋白。(标记为上清2)。于-0保存该样品。9. 吸取取.5 倍体积细胞湿重的蛋白抽提试剂C，加入到沉淀中。用移液器小心吹打，使沉淀悬浮。.漩涡混合器上高速振荡0 秒，或转移到玻璃匀浆器中高速匀浆30 秒。1. 以70g 的离心速度,度离心10分钟。11转移上清到一

6、个干净的离心管中。记录上清的体积，此即为细胞核蛋白。（标记为上清3）。于-70保存该样品。. 单层贴壁细胞的蛋白抽提对于贴壁细胞,用细胞刮将细胞刮掉,用PBS 清洗细胞3次。600，离心5 分钟,收集细胞。下面实验适用于约510 个细胞。 吸取取1m 的蛋白抽提试剂A，加入到已经清洗好的细胞沉淀中。用移液器小心吹打，使细胞悬浮。2.冰上孵育细胞，并且轻微振荡，时间为大约0 分钟。使00%的细胞胞浆流出细胞。注意：在实验过程中，每个步骤的时间要保持连贯性。3. 以40g 的离心速度， 度离心10 分钟。4. 转移上清到一个干净的离心管中。记录上清的体积,此即为胞浆蛋白。( 标记为上清1)。于-7

7、保存该样品。.5吸取取00ul 蛋白抽提试剂B,加入到沉淀中。用移液器小心吹打，使沉淀悬浮。6. 冰上孵育细胞,并且轻微振荡，时间为大约30分钟。7.以5000g 的离心速度,4 度离心10 分钟。8 转移上清到一个干净的离心管中。记录上清的体积,此即为细胞质膜蛋白。（标记为上清2）。于-7保存该样品。9.吸取250u 蛋白抽提试剂C，加入到沉淀中。用移液器小心吹打,使沉淀悬浮。. 漩涡混合器上高速振荡30 秒,或转移到玻璃匀浆器中高速匀浆3秒。10. 以680g的离心速度, 度离心0分钟。1. 转移上清到一个干净的离心管中。记录上清的体积，此即为细胞核蛋白。（标记为上清3）。于-70保存该样

8、品。. 蛋白浓度测定可使用BA定量法（DBI-01)和Bdord(B-6）进行蛋白浓度测定。具体程序请参照相关说明书。该试剂盒所获的的相关部分蛋白质是进行后续实验的最佳蛋白来源。1.该试剂盒所获的的相关部分蛋白质浓度很高,可以用相关的缓冲液进行稀释使用，因此最大限度的避免了去垢剂的影响。2. 该试剂盒中的蛋白抽提试剂可以和各种蛋白酶抑制剂混合使用,而不影响其抽提效果。3. 利用该试剂盒所得到的蛋白抽提液以成功用于SDAGE,WB，EMSA，IP 等各种实验,蛋白抽提试剂中的去垢剂完全不影响实验。内容总结（1）胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞）(Catalo DBI11(2)Stre kt t )描述:本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A,蛋白抽提抽提试剂B,蛋白抽提试剂C三种具有独特组分的缓冲液（3） 使用前， 加10u的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为xtranBuffer Mix A)