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1、高效液相色谱法测定产后贴湿巾中咖啡酸的含量【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定产后贴湿巾中咖啡酸含量的方法。方法 色谱柱为HangBang C18 （200 mmX4.6 mm,5 |J m）；流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（23 : 77）；检测 波长为323 nm；流速为1.0 mL/min,进样量为10 J L。结果咖啡酸检测浓度的线性范围为 0.0520.26 J g（r=0.999 8）；平均回收率为97.44%（RSD=0.78%）。结论 本方法操作简 便、快速、准确, 可用于该制剂的质量控制。【关键词】 产后贴湿巾；高效液相色谱法；咖啡酸；含量测定Key words：Chanho
2、u Tieshijin； HPLC； caffeic acid； content determination产后贴湿巾（院内制剂）是由蒲公英、乳香、血竭、煅龙骨、红花、赤石脂、冰片等水煎 后醇沉，浓缩，用无纺布浸润制成的含药湿巾。每片产后贴湿巾大小为4.5 cmX7 cm,含水量 为5 mL,每贴重量为10 g,用于会阴切开缝合术后伤口愈合。本试验研究产后贴湿巾中咖啡 酸的含量测定方法,用于其质量控制。现报道如下。1 仪器与试药Waters高效液相色谱仪,Waters2487紫外检测器（美国Waters 515）,杭州英谱科技HS 色谱数据工作站V4.0+（南京妇幼保健院制剂室）；AE100型
3、电子分析天平（梅特勒-托利多仪 器有限公司）。咖啡酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（供含量测定用,批号 110885-200102）；产后贴湿巾为本院制剂（批号为070603、070826、070924、071025）。甲 醇为色谱纯, 磷酸二氢钠、磷酸为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：HangBang C18（200 mmX4.6 mm,5 J m）；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液（23 : 77）； 检测波长为323 nm；流速为1.0 mL/min；进样体积为10 J L,柱温：40 C1。色谱图见 图1。由图1可知,咖啡酸的保留时间为23 min,咖啡酸与
4、相邻成分杂质峰的分离度为3.4,溶 剂甲醇-磷酸盐缓冲液不干扰测定。理论塔板数按咖啡酸峰计算为3 900,拖尾因子为1.25。2.2 对照品溶液的制备精密称取在110 C干燥至恒重的咖啡酸对照品7.5 mg,置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度， 摇匀，精密量取2 mL,置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 mL中含咖 啡酸 30 J g）。2.3 供试品溶液与空白辅料溶液的制备取本品约1 g,精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加5%甲酸的甲醇溶液10 mL,密塞, 摇匀，称定重量，超声处理（功率250 W,频率40 kHz）30 min,取出，放冷，再称定重量，用5
5、%甲 酸的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜（0.45 p m）滤过，滤液置棕 色量瓶中，得供试品溶液。另按处方比例配制不含蒲公英的空白辅料，照上述方法制成空白辅 料湿巾。2.4 标准曲线的绘制精密称取咖啡酸对照品10.4 mg,置于100 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理约5 min, 溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分别置于10 mL容量瓶 中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按“2.1 ”项下色谱条件分别进样10 p L,以浓度（C）为横坐标, 峰面积（A）为纵坐标进行回归分析,得回归方程：A=279 255.3C6 775.
6、0（r=0.999 8）。结 果表明，咖啡酸检测浓度的线性范围为0.0520.26 p go2.5 精密度试验精密量取对照品溶液10 p L,按“2.1”项下色谱条件重复进样6次。测得咖啡酸峰面 积的 RSD = 0.25%2.6 重复性试验取同一批样品（批号060220）6份,按“2.1”项下方法操作。咖啡酸的含量平均值为11.78 mg/贴,RSD=0.94%。表明本方法重复性良好。2.7 稳定性试验精密吸取同一批（批号070603）供试品溶液10 p L,按“2.1”项下色谱条件，分别于0、 1、2、4、8、12、18、24、30、36 h进样，测定峰面积。结果RSD=1.12%,表明供
7、试品溶液 在36 h内基本稳定。2.8 加样回收率试验取已测得含量的样品（批号070603）5份，精密称定，分别置于25 mL容量瓶中，分别加入 对照品适量，按“2.3”项下方法制成溶液，照“2.1”项下色谱条件进样测定按外标法计算。 结果见表1。表1加样回收率试验结果（略）2.9 样品测定取4批样品，根据上述供试品溶液的制备方法及色谱条件，依法测定样品中咖啡酸的含 量，每批测定4次，结果见表2o 4批样品中含量最高的是070924批号样，为12.42 mg/贴； 含量最低的是070826批号样，为11.75 mg/贴；平均值为12.09 mg/贴。表2咖啡酸含量 测定结果（略）3 讨论对咖啡
8、酸的提取,本试验采用水、乙醇、甲醇、5%甲酸的甲醇作为溶剂,进行回流、超声振荡提取,结果发现,以 5%甲酸的甲醇为提取溶剂,超声振荡提取,测得的咖啡酸峰形良好, 含量相差不大,故采用含 5%甲酸的甲醇为提取溶剂,超声振荡提取法。本试验分别采用不同体积的溶剂（10、20、50 mL）,超声提取30 min,结果3种体积得到 的咖啡酸含量相近，故采用加入10 mL溶剂提取。本试验分别对超声处理提取时间（30、60、90 min）进行了考察，结果得到的咖啡酸含量 相近,为节省时间和能源,故选择超声提取时间为30 min。取咖啡酸对照品溶液（0.03 mg/mL）,从200400 nm范围内测定紫外吸收光谱图，结果测 得最大吸收波长为323 nm,故采用323 nm为检测波长。本法具有色谱分离度高、干扰少、易重复等优点,可直接测定咖啡酸的含量,是产后贴湿 巾较理想的质量监控方法。【参考文献】1国家药典委员会中华人民共和国药典（一部）S.北京：化学工业出版社,2005.244 245.
