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1、植物基因组DNA提取一、实验目的1、掌握植物基因组总DNA的抽提方法和基本原理。2、学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。二、实验原理通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类（尤 其是氧化酶类）对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂 （如巯基乙醇）以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各 种酶类的作用。十六烷基三甲基溴化铵（hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB）、十二烷基 硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，简称SDS）等
2、离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白， 使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性， 并使抽提液分相，因核酸（DNA、RNA）水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片 和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植 物总DNA溶液。三、实验仪器及试剂实验仪器：高速离心机；烘箱；冰箱；水浴锅；高压灭菌锅；Nanodrop。实验试剂：玻璃珠，十二烷基磺酸钠（SDS）；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；乙二胺四乙酸 （EDTA）；氯化钠；苯酚；氯仿；无水乙醇等。四、实验步骤1.SDS提取缓冲液在65 C水浴中预热。2将叶
3、片置于1.5ml离心管中，液氮速冻，组织研磨器打样。3. 加入700 l的SDS提取缓冲液，涡旋摇匀。4. 置于65C的水浴中，每隔10 min轻轻摇动，30 min后取出。5.加入200卩1 KAc溶液，摇匀，放入-20C冰箱30 min。6.10000 rpm离心5 min, 上清移至新离心管中，12000 rpm离心5 min。7.上清移至新离心管中，加入700卩1异丙醇，-20C冰箱30 min。8.10000 rpm离心5 min，弃上清，加入500卩1 70%乙醇漂洗。9. 弃液体，晾干。10. DNA纯度与浓度测定（使用nanodrop）。（1）DNA 纯度：DNA 的 0D26
4、0/0D280 般为 1.8 左右。0D260/0D280 - 1.8：说明较纯；OD260/OD280 1.8：说明可能有RNA污染；OD260/OD280 1.8：说明可能有蛋白质污染。五、注意事项1. 叶片磨得越细越好。2. 注意移液器的正确使用。3. 由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性 外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。六、结果与分析1. 植物DNA提取所用试剂的作用？2. 植物DNA提取的关键步骤有哪些？3. 植物DNA提取后的用途有哪些？4从化学结构、化学性质、存在场所以及功能等方面比较DNA和RNA的异同。
