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1、睡眠剥夺对吗啡成瘾大鼠学习记忆能力的影响实验概述课题目的：观察睡眠剥夺对吗啡成瘾大鼠的空间记忆学习能力的影响。课题方法：SD大鼠40只随机分为4组（n=10）：生理盐水对照组、吗啡成瘾对照组、生理盐水+睡眠剥夺对照组、吗啡成瘾+睡眠剥夺实验组。小鼠递增注射7d简历成瘾模型后，通过睡眠剥夺箱48h建立睡眠剥夺模型，水迷宫实验观察其学习记忆的前后差异对比。被试选取：雄性SD大鼠40只，自由饮水、饮食，照明采取昼夜各半。吗啡成瘾大鼠模型：采取腹腔注射吗啡3次日法，每日增加5mg/kg，连续7d的盐酸吗啡腹腔注射，连续给药量为: 10、15、20、25、30、35、40 mg（Kg次），3次日(8时，
2、12时，16时)。SD大鼠40只，随机分为生理盐水组、吗啡组( n= 20)。睡眠剥夺模型：睡眠剥夺箱由2个60cm( L) 20cm(W) 60cm(H)的有机玻璃箱组成，底部通过直径为46cm的转盘相连。转盘转速为10min/圈，睡眠剥夺侧的转盘下底盘中水深2- 3cm，水温保持在20左右，大鼠只能在转盘上活动，瞌睡时转盘和箱侧壁会将其挤下水中，从而达到睡眠剥夺的目的；对照组一侧的转盘下底盘中不放水，大鼠可以在转盘上和底盘中自由活动，保证正常睡眠。其间自由进食、饮水，自然昼夜光照。每次将2只大鼠称重后放入睡眠剥夺箱的两侧，一侧为睡眠剥夺组，另一侧为对照组。Morris水迷宫实验：主要包括定
3、位航行实验和空间搜索实验两方面。本实验将大鼠分别从第一和第四象限放入，记录逃避潜伏期、游泳轨迹。大鼠连续接受7d训练,每天4次，每次间隔20s，记录大鼠分别从四个象限不同入水点入水找到平台所需的时间，即逃避到平台上的潜伏期(Escaping latency)。4次潜伏期成绩的平均值作为当日最终成绩进入最后统计。最大游泳时间，本实验设置为70s。分析的影响此实验结果的可能因素如下：动物实验是一个变异性特别大的操作过程，同样的实验设计，因为被试的不同、主试的差异或者实验环境的变化都可能造成实验结果迥异。实际动物实验结果都要经过多年多个实验和多个实验室的实验验证才能得到充分验证，可见动物实验的结果有
4、时候可能与实际情况并不相符，因此在保证实验结果真实可信的前提下，作为实验人员应当尽量保证实验结果的可重复性。这种目的依靠严格的实验被试、主试和实验程序环境的统一。1. 被试因素 选择正确合适的被试在实验的可行性和可靠性上发挥重要的作用，此实验想要探索睡眠剥夺对吗啡成瘾个体学习记忆功能的影响，最终结果为人体临床实验提供依据。这种情况下，应当选择与人体代谢、功能、结构疾病特点相似的动物模型。此实验选取应用较为广泛的SD大鼠吗啡成瘾模型和睡眠剥夺模型进行研究，同时需要引进动物遗传种属稳定的达到国际实验标准的实验动物。实验动物的年龄和体重因素同样重要，此实验中，应用成年SD雄性大鼠进行实验，此时应当对
5、大鼠出生天数和体重进行限制达到标准，因为处于不同生长时期的动物其身体机能非常不同，年龄和体重的控制在整个动物实验中有严格的要求。引进统一的动物后同样不能排除动物个体差异对实验结果的影响，像人类一样，动物在学习记忆或者其他操作性行为方面的表现也相差较大，这种变异造成实验结果的失真，因此在实验过程中要密切注意所有实验动物的表现，以便及时发现个性大鼠进行处理。性别是实验动物对实验结果造成影响的一大方面，主要由于雌雄身体生理指征方面差异明显，除特别要求外，一般只用一种性别大鼠进行实验。2. 主试因素主试即实验操作者，在进行实验操作的过程中发挥着至关重要的作用。（1）实验季节性：不同季节，动物的机体反应
6、性有一定改变。一般动物正常活动都有其季节性，像很多变温动物会冬眠，很多恒温动物会在冬天来临之前储备食物等等。此实验中使用的SD大鼠属于鼠科，季节特性造成大鼠在冬季活动会比其他季节减少，或者在发情期间造成兴奋性增加对实验结果造成影响。（2）生物钟过程：机体的有些功能还有昼夜规律性变动。尤其像是大鼠这种昼伏夜出的动物，在强制要求其过着“黑白颠倒”的生活以后，可能会有大鼠出现生物钟紊乱，这种紊乱对身体机能影响巨大。有不少人应该也会有这种体会，在做关于大鼠的实验时，晚上的大鼠活动兴奋性要明显高于其在白天的兴奋程度。这种生物钟带来的影响应该在实验设计之初就被考虑到并且进行克服。（3）麻醉深度：不同的麻醉
7、剂有不同的药理作用和副作用，应根据实验要求与动物种类而加以选择。（4）手术技巧：手术熟练可以减少对动物的刺激，减少动物的创伤和出血，提高实验成功率和实验结果的正确性。（5）实验用药物给药的途径、制剂和剂量是影响实验结果很重要的易俗。（6）动物实验设计：实验设计的科学性对实验结果的可靠性起关键作用。具体做法是一要熟识实验动物学及有关学科专业知识；二要符合统计学要求，而不仅仅在实验后作统计处理。3. 实验器材和环境因素（1）温度：动物饲养和实验环境应当尽量保持在室温，温度过高或者过低都会导致动物身体机能减退，甚至直接导致动物死亡。因此，在进行动物实验时，实验人员应当时刻关注动物所处环境的温度是否合
8、适。（2）湿度：当环境湿度达到饱和状态时（即高温、高湿），动物体的蒸发被抑制，易引起代谢紊乱，使动物机体抵抗力下降，发病率增加。高湿情况下，一些病原微生物和寄生虫开始大量生长繁殖，动物房内垫料与饲料易霉变，影响动物健康。湿度较低的时候，室内灰尘飞扬，易引起动物呼吸道疾病。当温度为27、相对湿度20时，几乎所有大鼠都发生环尾症。（3）气流和风流：实验动物单位体重与体表面积的比值较大，当饲养室内气流速度过小，空气流通障碍，动物体表散热困难，就易患病，甚至死亡；相反，气流速度过大，动物体表热量丢失增加，同样危急健康。因此，尽量保持饲养室和实验室空气流速的恒定。（4）空气洁净度：动物粪尿等排泄物发酵分
9、解产生的污物种类很多，其中氨浓度常是判断饲养室污染状况的监测指标。氨是一种刺激性气体，当其浓度升高时，可刺激动物眼结膜、鼻腔黏膜和呼吸道黏膜而引起流泪、咳嗽，严重者甚至产生急性肺水肿而引起动物死亡。长期处于高浓度氨的环境下，实验动物上呼吸道可出现慢性炎症，失去实验价值。另外动物饲养间的空气中颗粒物是另外一种污染空气的来源。包括室外空气未过滤直接进饲养室和动物的皮毛、皮屑以及饲料、垫料等被气流携带在空气中漂浮，形成的颗粒物污染。这种小颗粒，经呼吸道吸入体内后到达细支气管与肺泡而引起呼吸道疾病。在进行动物饲养管理时，应当保持规律的换气通风、对动物粪便的清除和防止外来污染颗粒的传入。（5）光照光线：
10、如上所述，动物一般都会有其独特的生物钟。对大鼠来说，持续光照，会过度刺激生殖系统，导致连续发情，出现永久性阴道角化，影响雌性排卵。光照过强会导致雌性动物带仔能力差，甚至出现吃仔和哺乳不良现象。强光照还使动物出现视网膜退行性变化。（6）音响噪声：突然的噪声容易引起大鼠动物紧张，应激敏感。噪声还可造成动物听源性痉挛。（6）居住因素：饲养笼和实验设备应选用标准的无毒、耐腐蚀、耐高压、易冲洗、易消毒灭菌的耐用材料制成，并符合大鼠生理生态及防逃逸的要求。器具内外边角应圆滑、无锐口。垫料垫料应使用标准的无毒、无异味、无油脂、吸湿性强，粉尘少的材料，经消毒或灭菌后使用。饮水清洁级以上动物必须饮用经酸化无菌、高压灭菌或超滤去菌的水。（7）生物因素：空气中的微生物空气中微生物的含量是实验动物环境检测的重要指标。（8）社会因素和饲养密度：社会因素是指在某个种属中，实验动物个体的优劣、社会地位及饲养密度等。饲养密度可对实验动物的社会造成明显影响。此实验采用单笼饲养方式，防止动物之间的相互影响。
